一株莱姆病螺旋体外膜蛋白C的基因克隆与序列测定

莱姆病(Lyme disease)是近年来逐渐被认识的一种蜱媒疫源性疾病，其病原体为伯氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi),它可侵犯机体多种组织、器官，造成多脏器受损。从患者血清中分离到一株伯氏疏螺旋体(BJ-9011)，对该分离株进行培养并按常规方法制备基因组DNA。参照国外文献报道PKo株外膜蛋白C(OspC)的基因序列设计合成引物，应用PCR方法扩增该基因，上游引物：5’-TGAAAAGAAAAATTGTTGGAC-3’，下游引物：5’-TTAAGGTTTTTTTGGA-3’。扩增片段包括外膜蛋白C全基因及ATG起始密码前51个碱基，长度约690bp,扩增产物经Klenow酶补平后，插入pcDNA?Ⅱ克隆载体，应用美国ABI373A型自动测序仪进行序列测定。结果表明该克隆包括外膜蛋白C的成熟蛋白全部编码区，长度为691bp，编码211氨基酸(图1)。其核苷酸及氨基酸序列与北美分离株B31的同源性为99%。外膜蛋白C是一种具有较强抗原性的伯氏疏螺旋体外膜蛋白，编码20-25kD蛋白，可刺激机体产生特异性IgM抗体。重组OspC已用于莱姆病的诊断及预防的研究，大量实验结果提示，OspC不仅可作为莱姆病早期诊断的一种较为理想的抗原，而且具有潜在的用于疫苗研制的前景。本克隆的获得为下一步进行基因表达、纯化及制备基因工程抗原以用于我国莱姆病的诊断和预防奠定了基础。

1 BJ-9011株外膜蛋白C的全基因序列及推导的氨基酸序列

(虚线表示引物结合序列)