医学检验信息网 检验医学 2007-2-11 13:02:21

【摘要】 目的 为探讨喉癌与人乳头瘤病毒(HPV)感染的关系和HPV在喉癌中基因组型的分布与表达。方法 应用聚合酶链反应技术(PCR)制备非放射性探针标记物-地高辛标记HPV共有引物探针，对146例喉不同病变的新鲜组织标本(喉癌68例，喉其它病变48例，正常喉组织30例)，进行HPV6，11，16，18，31，33，35，42，58共9型HPV DNA感染的检测；阳性者用多重引物PCR方法分型。结果 喉癌HPV感染阳性率45.6%(31/68)，喉癌颈转移淋巴结组织阳性率20.0%(3/15)，喉癌前病变阳性率11.8%(2/17)，声带息肉阳性率6.3%(1/16)，15例癌旁及15例癌周正常喉组织均为HPV DNA阴性。HPV DNA型别分布在喉癌中以HPV16、18型为主，喉良性病变中以HPV6、11型为主。结论 喉癌发生与HPV感染有关。 Detection of human papillomavirus in laryngeal carcinoma with digoxigenin labelled probe prepared by polymerase chain reaction ZHAO Shuwei, YE Qing, LU Shuchang, et al. Department of Otorhinolaryngology, Changzheng Hospital of The Second Military Medical University, Shanghai 200003 【Abstract】 Objective To study the relationship between laryngeal carcinoma and human papillomavirus (HPV), and describe distribution, expression of genome types of HPV in laryngeal carcinoma.Methods We used a non-radioactive digoxigenin labeled probe prepared by polymerase chain reaction (PCR) to test the fresh tissue samples from 146 cases with different laryngeal lesions. The labelled probe of HPV consensus primers was obtained, which enabled detection of nine types of HPV DNAs that were HPV 6,11,16,18,31,33,35,42 and 58. The genome types of HPV DNA positive cases were determined by using multiple primers PCR.Results The results turned out to be as follows: The HPV infection positive rate was 45.6%(31/68) for laryngeal carcinoma, 20.0%(3/15) for neck metastatic lymphnode,11.8%(2/17) for precarcinomatous lesions and 6.3%(1/16) for vocal cord polypus. 15 cases of normal tissues adjacent to carcinoma and another 15 normal tissues opposite to the carcinoma were all HPV DNA negative. HPV16,18 types are the main types of laryngeal carcinoma and HPV6,11 types often appear in benign lesions of larynx.Conclusion These results implicated that the occurrence and development of laryngeal carcinoma may be closely related to HPV infection. 【Key words】 Laryngeal carcinoma Human papillomavirus Polymerase chain reaction 关于喉癌病毒病因学的研究，目前处于刚刚开始的探索阶段，随着分子生物学和基因工程技术的发展，国内外学者逐步开始涉足这一领域。近年来研究表明，人类多种肿瘤的发生与人类乳头瘤病毒(Human papillomavirus, HPV)感染有关^［1，2］。HPV致癌性除已被证实在妇女泌尿生殖系肿瘤的病因学上起着重要作用外，目前认为，HPV感染在头颈部鳞状细胞癌的发生中也是一种相关的致病因子^［3，4］。我们应用聚合酶链反应(Polymerase chain reaction, PCR)技术制备非放射性探针标记物-地高辛标记HPV共有引物探针，对146例喉不同病变的新鲜组织标本进行HPV DNA检测，阳性标本用多重引物PCR扩增分型。目的是明确喉癌与HPV感染的关系，探索HPV在喉癌中的致病作用。 1 材料和方法

1.1 标本来源 中国医科大学第一临床学院耳鼻咽喉科，空军沈阳医院耳鼻咽喉科，上海长征医院耳鼻咽喉科，辽宁省肿瘤医院头颈外科近期内喉手术切除的新鲜喉癌标本和喉其它病变手术或活检标本共146例。包括：喉癌68例；喉癌颈转移淋巴结15例；喉癌前病变17例(慢性肥厚性喉炎，病理有不同程度非典型增生7例，声带白斑6例，成人型喉乳头状瘤4例)；声带息肉16例；癌旁正常喉组织15例；癌周对侧正常喉组织15例。全部病例均经组织病理学证实。标本取材后立即置-40℃冰箱存放。

1.2 标准病毒株和细胞及模板DNA的制备 标准病毒株AdV3,AdV7,HSV-1，HSV-2，HCMV，AD169株及正常人白细胞均由中国医科大学第二临床学院病毒室提供。模板DNA的提取按酚/氯仿方法。

1.3 引物投计 HPV通用引物选择在晚期基因(L1)区，能特异性扩增HPV6，11，16，18，31，33，35，42，58共9型HPV DNA的L1保守区253bp的片段。引物设计序列如下：L1C1：5′CGTAAACGTTTTCCCTATTTTTT-3′，L2C2：3′-GTTATGTCTCATAAATCCCAT-5′。HPV多重引物选择在早期基因E6/E7区，共3对引物，可分别扩增 HPV 6/11(145bp)，16(110bp)，18(334bp)共4型质粒DNA的E6/E7区片段。阳性对照(P)来自经文献证实的宫颈癌阳性细胞系(P1：253bp；P2：145bp，P3：110bp，P4：334bp)。引物及阳性对照由中国医学科学院基础医学研究所生物物理室提供。

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