医学检验信息网 检验医学 2007-2-11 13:02:21

【摘要】 目的 明确乙型肝炎病毒(HBV)C基因启动子(BCP)与前C变异株在慢性乙型肝炎患者中的动态消长，及与HBeAg血清学状态的关系。方法 对32例慢性乙型肝炎患者的105份系列血清进行错配聚合酶链反应(PCR)-限制性片段长度多态性分析，并对其中15例患者系列血清标本的PCR产物进行直接测序。结果 BCP和A83变异株感染率均明显增高(62.5%＞46.9%；31.3%＞12.5%)；BPC变异株更多地(14/16)表现为优势积累，且先于HBeAg血清阴转；BCP野株/变异株比例变化影响HBeAg血清学的稳定性。结论 两种类型的变异株在炎症活动中均具有选择优势，最终造成HBeAg(-)的HBV感染；可能与HBV感染之持续有关。 Dynamic changes of basal core promoter and pre-core mutants of hepatitis b virus in patients with chronic hepatitis B virus infection CHEN jinjun, HOU Jinlin, WANG Zhanhui, et al. Deprtment of Infectious Diseases, Nanfang hospital, Guang zhou 510515 【Abstract】 Objectives To clarify the association of hepatitis b virus mutants in basal core gene promoter and pre-c region with serum HBeAg state and persistent HBV infection.Methods 32 patients, who infected with hepatitis B virus and suffered from several exacerbation during the course of this diseae, were followed up for an average of 20.8 months. Using two mis-matched primers to amplify BCP and pre-c gene fragments, in combination with restricted fragment length polymorphism assay, we studied the presence of these two mutants(nt 1762A→T, 1764G→A and nt1896G→A)in 105 serum samples. Direct sequencing was performed on 15 patients′serial samples to identify the efficiency of these rapid and simple methods and other variations in these regions.Results The presence of these two kinds of mutants increased during the following-up, (62.5%＞46.9%;31.3%＞12.5%). In most cases, two mutants prevailed and finally displaced the wild type virus; the serology of HBeAg was affected predominantly by the ratio of BCP mutant to wild type.Conclusion BCP and pre-c mutants emerged in the course of chronic infection and were selected positively by the inflammation activity. The serological conditions of HBeAg were changed when the predominant situationsof these two mutants were established. The survival of these two mutants implied that mutations in these two regions may contribute to the persistent infection of hepatitis B virus. 【Key words】 Hepatitis B virus Gene/genetics Restricted fragment length polymorphism 乙型肝炎病毒(HBV)的变异是较普遍的现象。前C变异，主要是第1 896位核苷酸(nt)G→A的突变，它是HBeAg阴性HBV感染的主要原因^［1，2］。最近的研究表明，C基因启动子(BCP)变异，尤其是nt1762 A→T和nt1 764 G→A的联合突变(T1 762/A 1 764)，由于涉及到BCP区调控前C mRNA转录的第2个AT丰富区，因此可导致前C mRNA的转录效率下降，从而造成无HBeAg血症的HBV感染^［3，4］。我们设计了一条错配引物^［5］，应用PCR-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)的方法，对143例HBV慢性感染者T1762和A1 764联合变异的基本情况进行了研究，发现此类型的变异在我国相当普遍^［6］。为进一步明确BCP变异与HBeAg血清学状态及HBV感染持续的关系，我们对其中的32例慢性乙型肝炎患者进行了回顾性研究。 1 材料和方法

1.1 病人 南方医院1990年1月～1996年12月收治的32例慢性乙型肝炎患者，男性28例，女性4例；平均年龄30.6岁(18～56岁)。24例在首次住院时经肝活检证实；8例在研究过程中发展为肝硬化。诊断标准按1995年第五届全国传染病寄生虫病学术会议通过的标准。研究跨度平均为20.8个月(8～51个月)，27例经历了1～4个血清丙氨酸转移酶(ALT)峰值(＞5倍正常值)，其他5例患者的ALT水平为持续轻度异常。在随访期间，所有研究对象均未使用血液、血液制品或抗病毒药物治疗，无一例混合感染丙型肝炎病毒或丁型肝炎病毒。

1.2 血清标本 以第1次入院时为研究起始，随访到的最后1次血清为末，其中25例不同时间点的血清标本在3份或3份以上。取样间隔2～12个月。

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