医学检验信息网 检验医学 2007-2-11 13:02:22

【摘要】 目的 研究合成肽WLDPRH的免疫反应性和对干扰素 (IFN)诱导的生物学活性的影响。方法 根据我们早先的研究，已用中和抗体从噬菌体展示6肽库中筛选出了两个与IFN-α有同源性的肽片段,将其中之一进行了人工合成(WLDPRH),并进行了同源性比较分析, 体外竞争酶联免疫吸附实验(ELISA), 体外IFN诱导抗病毒和抗增殖分析。结果 计算机分析表明,人工合成肽WLDPRH与推理的I型IFN受体结合区LoopAB(29-35位)有相当的同源性。体外竞争ELISA实验表明,合成肽在25μg/ml浓度时能特异性抑制IFN-α与中和抗体4C1结合。体外抗病毒结果显示,干扰素在亚保护剂量时(20～70 pg/ml)时,合成肽能提高IFN-α作用细胞后的抗病毒活性,并且合成肽WLDPRH在1.4 μg/ml时, IFN-α抗病毒保护率从40%提高到86%，为最高保护率的最低剂量，但合成肽为1.4 μg/ml, IFN浓度为5～55 ng/ml时,对IFN-α诱导的抗增殖作用不明显。结论 用中和抗体筛选的短肽WLDPRH能影响IFN分子作用模式，并且有可能模拟IFN 分子LoopAB的结构和功能,这为免疫治疗及IFN的小分子模拟设计奠定基础。 Influence of the synthetic peptide recognized by neutralizing antibody on IFN-induced biological responses HU Rong, MA Xuejun, WEI Kaikun,et al. National Laboratory of Molecular Virology and Genetic Engineering,Beijing100052 【Abstract】 Objective The influence of synthetic peptide WLDPRH on IFN-induced biologic activity was studied.Methods Based on our earlier studies in which two peptides were recognized by neutralizing antibody from the hexapeptide library displayed on the phage, one of the peptides synthesized, with amino acid sequence WLDPRH.Results Computer-building approach showed that the synthetic peptide WLDPRH exhibited structural homology with LoopAB(29-35), the binding domain of type I IFN receptor. In the competitive ELISA studies, the synthetic peptide WLDPRH in 25 μg/ml could inhibit IFN binding neutralizing antibody 4C1. IFN-induced antiviral assay showed that the protective effects of suboptimal dose (20-70 pg/ml) of IFN were increased from 40% to 86% in the presence of the synthetic peptide WLDPRH and 1.4 μg/ml of the synthetic peptide WLDPRH was the lowest dose with the best protection. But potentiating effect on IFN-induced growth inhibition was fewer noticeable in 1.4 μg/ml of synthetic peptide.Conclusion The results indicated that synthetic peptide WLDPRH can mimic the structure and activity of Loop AB in the IFN molecule and can be applied to immunotherapy as well as the mimic minimolecular design of IFN. 【Key words】 Synthetic peptide Interferon Neutralizing antibody I型IFN介导靶细胞的生物学活性是通过与细胞表面特异性受体结合而产生的。最新的IFN分子结构模式显示, IFN 分子由五个α-螺旋和四个环状结构组成,它们是A(残基12-24),B-(51-67),C(80-99),D(115-132)和E(141-165)螺旋,AB环(29-35),BC环(68-78),CD环(100-114),DE环(133-140)。许多文献报道AB环(LoopAB)是IFN分子的一个共同的重要的受体结合域^［1，2］。 iFN分子诱导产生两类抗体即中和抗体和非中和抗体,中和抗体可分为两种,一种能阻止IFN分子受体识别表位与受体的高亲合性结合,另一种能阻止信号传导^［1］。不难推导,中和抗体识别表位与IFN分子的受体识别位点有关，或者说与引起信号传导的IFN分子表位有关。IFN分子的不同受体识别域和受体成分的不同位置相互作用,产生细胞内信号传导, 发挥生物学活性。高浓度的受体和配体能进一步增强二者相互作用的动力学过程，并且决定了复合结构的亲合性。我们用中和抗体从噬菌体展示6肽库中筛选出的短肽^［3］,经计算机软件分析与IFN分子受体区域LoopAB有相当的同源性,因此我们将合成肽WLDPRH放入IFN作用模式中,在细胞表面受体有限和亚保护剂量干扰素存在的情况下,通过增加合成肽的流量来增加配体和受体成功碰撞的机遇,以研究合成肽WLDPRH对IFN生物学活性的影响。 1 材料和方法

1.1 主要试剂 IFNα1b为深圳科兴公司产品, IFNα1b半成品由上海生物制品研究所童葵塘教授惠赠。 IFNα1b 中和抗体4C1由安徽安科公司惠赠。合成肽试剂是美国ABI公司提供，阴性(TLDYPARAHTFDDFCPECRPLGCQGCAFQSTVAAEL

责任编辑: 参与评论