抗人类免疫缺陷病毒gp41和丙型肝炎病毒NS3杂交瘤细胞株的建立
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2007-2-11 13:02:22
摘要】
目的 为检测血清中人类免疫缺陷病毒(HIV)和丙型肝炎病毒(HCV)抗原提供血清学指标。方法 用纯化的重组HIV(gp41)和HCV(NS3)抗原蛋白作为联合免疫原，免疫BALB/c小鼠，取脾细胞与Sp2/0小鼠骨髓瘤细胞融合，并采用挑单个细胞的方法进行一次克隆。结果 分别获得4株和6株能稳定分泌高效价抗HIV(gp41)和HCV(NS3)抗原蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株。初步建立了双抗体夹心法检测HIV(gp41)和HCV(NS3)抗原的酶联免疫吸附试验。结论 本方法是建立单抗杂交瘤细胞株的快速方法，所建杂交瘤细胞株特异性强，效价高，分泌抗体性能稳定，有推广价值。 Establishment of hybridomas secreting monoclonal antibodies to HIV-gp41 and HCV-NS3 ZHANG Suxiang, PI Guohua, GU Shuyan, et al. Institute of Virology, Chinese Academy of Preventive Medicine, Beijing 100052 【Abstract】
Objective To establish the monoclonal antibodies of HIV and HCV for developing serological diagnostic method.Methods The antigens of HIV gp41 and HCV NS3 expressed from bacteria were mixed to immunize BALB/c mice. The hybridoma cell lines were obtained by fusing SP2/0 myeloma cells with spleen cells from immunized mice.Results Four hybridoma cell lines secreting specific antibodies against gp41 of HIV and six hybridoma cell lines secreting antibodies to NS3 of HCV were obtained. ELISA sandwich method for detection of viral antigens with McAbs was developed.Conclusion A quick and convenient method for obtaining McAbs was developed using mixture of different antigens for immunizition of mice. The monoclonal antibodies had high senusitivity and were stably secreted by hybridoma cell lines. This technique is worthy to be popularized. 【Key words】
Monocloal antibody Mixture antigen Sandwich method 人类免疫缺陷病毒(HIV)和丙型肝炎病毒(HCV)引起的艾滋病和丙型肝炎，严重危害人民的健康。建立早期诊断方法，进行早期治疗，对预防和治疗都是至关重要的。国内外检测HIV抗体和HCV抗体方法很多［1，2］，但直接检测血清中HIV和HCV抗原的方法还很少见。为此我们采用纯化的重组HIV(gp41)和HCV(NS3)抗原蛋白联合免疫小鼠，建立分泌抗HIV(gp41)和HCV(NS3)的单克隆抗体(单抗)杂交瘤细胞株，采用双抗体夹心法检测HIV和HCV抗原。 1 材料和方法
1.1 HIV和HCV抗原 HIV(gp41)和HCV(NS3)抗原由德国Mikrogen提供，为基因工程方法在大肠杆菌(MG109)中表达的抗原，经纯化，其纯度为98%。
1.2 免疫方法 8周龄雌性BALB/c小鼠，双侧腹股沟皮下注射HIV(gp41)和HCV(NS3)各50 μg混合抗原/500 μl完全福氏佐剂，免疫3只小鼠。间隔15天注射1次，第2次每只小鼠注射抗原剂量各25 μg混合抗原/500 μl不完全福氏佐剂，第3次每只小鼠注射抗原剂量各12.5 μg混合抗原/500 μl(不加佐剂)，3天后取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合。
1.3 细胞融合及检测 细胞融合见文献［3］。采用挑单个细胞的方法进行一次克隆，用酶联免疫吸附测定(ELISA)法，分别筛选抗HIV(gp41)和HCV(NS3)抗体阳性孔。
1.4 腹水抗体制备 经腹腔分别注入抗HIV(gp41)和HCV(NS3)抗体阳性的杂交瘤细胞，每只鼠(1×106个细胞)，7～10天后抽取腹水。
1.5 鉴定 染色体计数和ELISA间接法鉴定各株细胞Ig亚型［4］。
表1 ELISA滴定单抗效价 Tab.1 Titers of McAb detected by ELISA| 杂交瘤 Hybridoma | 杂交瘤株号 No.Hybridoma | 细胞上清滴度 Titer of cell supernatant | 腹水效价 Titer of ascites |
| 抗HIV-gp41细胞株 | A3-2 | 103 | 105 |
| Hybridoma secreting | A3-3 | 103 | 104 |
| anti HIV-gp41 | F7 | 103 | 104 |
| E12 | 104 | 105 | |
| 抗HCV-NS3细胞株 | D7 | 104 | 106 |
| Hybridoma secreting | D9 | 104 | 106 |
| anti HCV-NS3 | G8 | 104 | 106 |
| E9 | 104 | 105 | |
| E10 | 104 | 105 | |
| E4 | 103 | 104 |
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