流式细胞术测定人外周血淋巴细胞亚型
利用流式细胞仪检测淋巴细胞亚型，具有简便、快速、计数的细胞量大等优点。但目前各家报道的正常参考值相差较大，为此我们测定了110名正常成人外周血淋巴细胞亚型的百分含量，报告如下。
一、材料与方法
1.仪器：FCSCalibur流式细胞仪为美国Becton-Dickinson（BD）公司产品。
2.试剂：CD45/CD14、IgG1/IgG2a、CD3/CD19、CD3/CD4、CD3/CD8、CD3/CD16+56双色直标单克隆抗体以及溶血剂均由BD公司提供，批号为340182。自备pH 7.2（0.01 mol/L）内含1 g/L叠氮钠PBS。
3.测定对象：110份正常成人静脉血液标本来自徐州市中心血站无偿献血者，其甲、乙、丙型肝炎病毒，艾滋病毒及梅毒检测均阴性，肝肾功能正常，WBC计数为（4.0～10）×109/L之间，年龄18～63岁，其中男性60名，女性50名。所有标本均在当日内测完。
4.测定方法：(1)标本处理见文献［1］；(2)流式细胞仪测定和分析：用BD公司的SimulSET软件进行测定和分析，每次获取15 000个细胞，用HP彩色打印机打印结果。
5.测定过程中的质量保证：(1)在测定期间，使用BD公司提供的质控微球调校流式细胞仪使其分辨率达到最佳的稳定状态。(2)操作者应能够正确熟练地进行标本处理、操作流式细胞仪和电脑。(3)以1份标本平行测定15次CD3，求其和s，变异系数(CV)依次为75.00%、1.69%、2.15％。说明本仪器性能、试剂质量、操作者熟练程度均符合要求。(4)利用CD45/CD14比值正确地设定淋巴细胞门，有关质控要求严格按照试剂说明书执行，否则应重新处理标本后复测。
二、结果
110名正常成人外周血淋巴细胞亚型含量见附表。
附表 110名正常成人外周血淋巴细胞亚型含量(±s，%)| 淋巴细胞亚型 | 男(60例) | 女(50例) | 合计(110例) |
| CD+3 | 70.90±6.13 | 70.77±6.42 | 70.85±6.23 |
| CD+3CD+4 | 37.28±6.00 | 40.57±6.09* | 38.46±5.77 |
| CD+3CD+8 | 31.20±5.67 | 29.40±5.40 | 30.40±5.59 |
| CD-3CD+19 | 10.48±2.88 | 8.46±2.89* | 9.42±3.04 |
| CD-3CD+16+56 | 21.76±8.69 | 23.66±8.30 | 22.37±7.90 |
| CD+3CD+4/CD+3CD+8 | 1.31±0.31 | 1.47±0.36* | 1.38±0.34 |
本研究结果除CD3外，其他几项数据与BD公司的参考值之间均存在差异，特别是具有非特异性抗感染和抗肿瘤功能的NK细胞（CD16+56）比欧美人明显高，而参与体液免疫的B细胞（CD19）则比欧美人要低。
国内测定淋巴细胞亚型由于单克隆抗体的品质、流式细胞仪种类、标本的制备方法等不尽相同，加之所统计的样本例数较少而造成了各实验室报道的参考值差别较大。通过实验我们发现淋巴细胞亚型正常参考值的离散度普遍较大，各实验室不宜采用他人的数据，至少不能使用欧美国家的参考值。应测定出自己实验室的正常参考值。在判断测定结果时，除了明显超过参考值外，对在参考值范围内的结果不宜轻易下结论，因某些异常值可湮没在较宽的正常值之中，故应结合病情动态观察其变化较为合适。有条件者，淋巴细胞亚型应作为健康体检项目，以备今后判断免疫功能时参考。
参考文献
1 左连富主编.流式细胞术样品制备技术.北京：华夏出版社，1991.82-83.
