流式细胞术对尿路感染快速诊断方法的建立
尿路感染诊断的依据是临床症状和尿液分析以及相关的检测信息，最后的定论还要取决于尿液培养。细菌培养法耗时，费用相对较高，且阴性率与污染率大大超过培养的阳性率。笔者应用UF-100全自动尿液分析仪，利用流式细胞术的原理，通过检测尿液中的细菌数量，并建立合理的阈值，可以实现对菌尿的标本进行快速、无痛性的筛选，直接预测出尿液培养的结果，从而去除大量的阴性标本，提高了培养检出的阳性率，并且可迅速地提供给临床可靠的检测信息，使病人及时地得到合理地诊治。 1材料和方法 1.1 材料 1.1.1 标本来源：2002年8月至2003年1月间,收集了安徽省立医院的门诊或住院病人的203份(门诊病人标本59份,住院病人标本144份)清洁中段尿标本,其中女性标本130份,男性标本73份。 1.1.2 仪器及试剂 1.1.2.1 日本Sysmex公司生产的UF-100全自动尿液分析仪及配套试剂；鞘液、稀释液和染液。 1.1.2.2 血培养基和无菌尿培养管均由省立医院检验科微生物室自制。 1.1.2.3 法国梅里埃公司生产的Vitek-32全自动细菌鉴定及分析系统。 1.1.2.4 Bayer公司生产的CLINITEK-500尿十联干化学分析仪及配套试纸条。 1.2 检测程序 1.2.1 标本的留取：患者晨起第一次尿，用无菌试管收集清洁的中段尿10ml（女性病在留尿前要求清洗外阴）。 1.2.2 操作步骤：整个检测过程分三个部分：①先用1μl的定量接种环，取待测标本划线接种于血培养基上，35℃培养12～24h，如果是阳性标本，再挑取单个菌落，应用Vitek-32全自动微生物分析仪鉴定菌种；②再用全自动尿液分析仪UF-100对标本进行检测，将标本混匀后，仪器自动吸取800μl的未离心的尿液，自动报告细菌计数结果；③最后用Bayer干化学分析仪检测标本，整个检测过程在2h内完成，以防止尿液中细菌的大量繁殖而不能真实地反应尿液中的细菌数量。操作步骤严格按上述次序执行，防止前面操作对后面过程的污染。 1.3 判断方法 1.3.1 细菌培养的判断标准：以血培养基上的一个菌落计为1000，计算出每1ml尿液的CFU值。判断方法如下：①无菌落生长。②生长菌落计数<104CFU/ml，视为无意义生长。③阳性结果，菌落计数>104CFU/ml。④菌落混合生长超过三种且无优势细菌生长，都视为标本污染。 1.3.2 分析方法：以细菌培养法为金标准，选择不同的UF-100的细菌计数的阈值，比较两者的相关性，从而可以判断UF-100检测菌尿的可靠性，并寻找出UF-100直接检测出阳性标本的最佳阈值。 2 结 果 2.1 不同区段细菌数的阳性率 将UF-100的细菌计数分成7个区段，在每个区段中，将培养法的阳性结果数除以相应的UF-100阳性结果的标本数，以此作为阳性率，比较各个区段培养法检出的阳性率。以UF-100细菌计数的区段为X轴，以阳性率的百分比为Y轴制成图1(略)。 随着UF-100的细菌计数的结果的增加,培养结果的阳性率也相应增加。当UF-100的细菌计数<1500/μl时，此时培养出的阳性率仅为7.0%，而细菌计数在9000/μl～10500/μl时，培养出的阳性率可达到76.9%，而当细菌计数达到10500/μl以上时，阳性率可达到94.4%。 2.2 不同范围敏感性和特异性比较 将UF-100所测的细菌计数的结果设置成9个范围，分别计算出这些范围对应的敏感性与特异性以及假阳性率的值（表1）。 表1 UF-100的细菌数不同范围的敏感性与特异性值
| UF-100菌计数范围（/μl） | 敏感性 | 特异性 | 假阳性率 |
| ≥1000 | 0.94 | 0.32 | 0.68 |
| ≥2000 | 0.85 | 0.58 | 0.42 |
| ≥3000 | 0.75 | 0.70 | 0.30 |
| ≥4000 | 0.70 | 0.80 | 0.20 |
| ≥5000 | 0.66 | 0.89 | 0.11 |
| ≥6000 | 0.64 | 0.92 | 0.08 |
| ≥7000 | 0.57 | 0.94 | 0.04 |
| ≥8000 | 0.49 | 0.97 | 0.03 |
| ≥9000 | 0.43 | 0.98 | 0.02 |
