应用分子检测进行诊断、治疗选择及疾病监测
分子诊断学:
应用分子检测进行诊断、治疗选择
及疾病监测
Deborah “Debs” Payne, PhD, CLSp(MB), CLDir(NCA)
Director of Molecular Diagnostics
University of Texas Southwestern Medical Center
Dallas, TX
目 的
? 1) 阐述能用分子诊断学诊断的疾病
? 2) 讨论分子检测如何监测治疗
? 3) 描述分子检测用于选择治疗
阐述能用分子诊断学诊断的疾病
阐述能用分子诊断学诊断的疾病
? 新生儿脓毒血症
? HIV 感染
? 结核
? HIV 和 Mtb 耐药变异
? 禽流感
脓毒血症
在每年死亡的400万新生儿中大部分是由脓毒血症引起的
B群链球菌（Group B Streptococcus ，GBS)
? GBS 在某些健康的新生儿和成人的下消化道为天然菌群
10-35% 的妇女阴道和直肠中存在GBS
? GBS 感染是导致新生儿感染性发病和死亡主要原因
? 接近20% 或 ~1,600 婴儿永久性的残疾
? 脓毒血症 - 肺炎
? 脑膜炎 - 失聪、失明
? 体障、智障
2002 CDC 修正指南
目前的方法
培养： > 2天
需要提供相应设施以在检测后通知患者
分子分析的优势
(Cepheid Genexpert)
? 预测妇女分娩时感染婴儿危险程度
? 能更有针对性、有效地进行抗生素预防
? 对于未感染的妇女减少不必要的抗生素使用
? 预防大部分婴儿得病– 确定真阳性
? 提供给未进行产前（孕前）检查妇女的结果，可提高新生儿的存活率
? 代替培养方法
? 因周转时间仅1小时，病人仍在诊所时即可获得结果
人获得性免疫缺陷病毒（HIV）
HIV 分子检测
? HIV定性测定可检测母体与新生儿细胞内前病毒DNA
? 决定传播的危险性
? 决定新生儿是否已感染病毒，因为抗体试验无用的
? HIV 病毒负荷量检测
? 通过病毒RNA基因的检测来决定血流中循环病毒的含量
? 可用于测出新生儿HIV
禽流感
结核分枝杆菌
2002年分枝杆菌感染率
分子检测
? 1天之内可提供结果，而培养方法需7天
如何用分子检测进行监测治疗
如何用分子检测进行监测治疗
? HIV 感染
? HCV 感染
分子检测与非分子方法用于检测HIV 感染
? 初始治疗- 选择一个方案以避免治疗的失败，以及尽可能长的抑制病毒的复制
? 病毒抑制丧失-治疗以获得抑制
? 在高CD4 计数情况下病毒没有被抑制- 继续监控治疗
? 在低CD4 计数情况下病毒没有被抑制– 维持治疗直至使用新药
决定点
? 定量检测血液 HIV/病毒负荷量或病毒数量
? 目标是将病毒负荷量控制在检测限以下 (<50 or 75 copies/ml)
***抑制丧失表明出现了耐药
如何根据分子检测选择治疗?
如何根据分子检测选择治疗?
? HIV 耐药性
? 结核耐药性
? 宫颈癌（肿瘤）测试
? HPV 基因分型
耐药性试验
何时采用耐药检测以改善治疗效果…
? 临床标准
怀孕
治疗无效
新感染
急性感染
在近12个月内感染
治疗8-12周不理想
? IC50 = 50% Inhibitory Concentration
? IC50 PT / IC50 WT = Fold change
? Example: IC50 PT 5μM, IC50 WT 0.5μM => Fold change = 10
敏感性和耐药性图谱
检测耐药的方法
? 培养病毒，了解其对药物的反应－－表型分析
? 用测序方法寻找突变－－基因分型
表型
ANTIVIROGRAM?: 易感性测定
? IC50 = 50% Inhibitory Concentration
? IC50 PT / IC50 WT = Fold change
? Example: IC50 PT 5μM, IC50 WT 0.5μM => Fold change = 10
表型分析
优点
? 直接检测耐药 –检测在体外不同药物浓度下患者病毒生长的能力。
? 计算任一个或全部耐药突变的净有效率。
? 阐明或预测 已经内在的耐药或易感性 而无需进一步解释。
? 提供关于新药、药物联合应用及非B亚型的资料
表型分析
局限性
? 代价较高并需要较长的周转时间 。
? 不能鉴定混合物
基因分型: 步骤
对 Viroseq, 我们从7个不同引物获得序列
基因分型-优点
? 与培养检测耐药性(表型分析)相比更加快速、成本较低
? 对检测耐药(混合物)是敏感的，可以提供全面发生的耐药早期预警信号
? 许多商业和医院实验室可提供检测
基因分型-局限性
局限性
? 不能直接检测病毒的耐药性
? 需要对药物耐受性和敏感性的预测进行解释
? 对新药、新的联合用药及非B亚型提供信息有限
? 结果只为 “可能”而不是“耐药”或“非耐药”
基于软件的解释
-未来非感染性疾病检测的模型
? 专家观念－－传统的
? 基于一定规则
? 相关数据库
不是所有的突变都是相同的
