分子生物学实验室质量保证和能力比对
?扩增
?DNA/RNA分离
?引物、探针的使用
?循环
?检测
?阴性对照检查污染
?阳性对照确保敏感性
DNA/RNA分离
?细胞裂解：蛋白酶K从染色质中释放DNA，破坏会降低DNA产量的核酸酶
?离心：温度、转速、和持续时间影响用于DNA的提取的WBCs
?抑制Taq酶：残留的乙醇、RBCs、去污剂（NP40，SDS）
?RNA酶
PCR影响因素
?探针和引物
?G+C含量在40％~60％
?无稀有碱基/重复序列
?引物之间3’端不互补
?循环
?循环仪内温度一致
?变性、退火、延伸温度
分析后质量保证
?数据解释
?结果要结合家族史
?复杂实验结果需要病理学家的验证
?结果报告
?探针、引物、和所使用限制性内切酶的信息
?与临床友好的报告格式
影响结果的最大因素是什么？
?样品收集时机影响检验结果是否临床有用
?标本的收集和处理是分子实验质量保证的最薄弱环节
如何防止不合格标本
?培训收集标本的员工
?临床实验室内的宣传资料
?营销人员
?实验室内
?实验室提供收集标本的器具
?实验室工作人员收集标本
如何检测不合格的标本
?样品稳定性/重复性的研究
?决定报告前,要与临床相关
?进行检验并包括使用FDA未批准产品
对分析方法评估
CLIA规则要求实验前必须先评估：
?精密度
?准确度
?灵敏度
?特异性
?报告范围
?参考范围
保证分子实验室的QA
?建立定性和定量实验的参考范围
?商业和患者标本库的质控趋势
?实验室手册
?运行失败记录
?员工的受继续教育机会
审 核
?工作审核
?实验室信息系统(LIS)反映的异常结果
?两种方法互相比较对照
?用异常患者标本做新的患者质控
?操作者轮流使用已知定值的能力比对样本
沙眼衣原体和淋病奈瑟菌的PCR阳性率（％）（ST.Luke’s Hospital )
影响实验结果的因素
标本 检验
? 它是什么 -- 设备
? 如何收集 -- 试剂
? 如何运输 -- 仪器
? 如何处理 -- 程序
? 如何贮存 -- 员工培训
-- 结果解释 -- -- 结果报告
结论：质量保证和能力比对
包括分析前、分析中、分析后的可变因素
综合所有影响实验结果准确度、稳定性、及时性的因素
你们的分子实验如何？
