医学检验信息网 检验医学 2007-2-26 16:16:50

单位：陈心春 (518020 深圳市东湖医院)；简少文 汪慧民 曾木圣 (中山医科大学肿瘤研究所)

关键词: 鼻咽癌；人疱疹病毒6型；EB病毒；LMP1 【摘要】 目的 探讨人疱疹病毒6型(HHV-6)与鼻咽癌(NPC)发病的关系。方法 采用聚合酶链反应(PCR)和原位杂交同时检测正常鼻咽组织和NPC癌前鼻咽组织以及NPC组织中HHV-6和EBV DNA的存在情况。采用免疫组化检测36例NPC组织的EBV LMP1 蛋白表达。结果 在42例NPC组织、21例鼻咽癌前病变组织中，经PCR检出HHV-6 DNA，阳性率分别为30.9%(13例)和4.7%(1例)。EBV DNA为95.2%(40例)和66.6%(14例)。27例正常鼻咽组织未检出HHV-6 DNA， EBV DNA为25.9%(7例)。经ISH，仅在13例PCR HHV-6 DNA阳性的NPC组织中检出11例阳性，36例NPC组织、10例鼻咽癌前病变组织ISH EBV DNA阳性。NPC组织的EBV LMP1蛋白阳性率为47.2%(17/36)。结论 鼻咽癌组织中存在HHV-6感染，提示HHV-6感染与NPC有关。HHV-6感染与EB病毒LMP1蛋白表达上调呈正相关，提示在NPC的发生中HHV-6可能直接参与和(或)通过上调EBV LMP1的表达而起一定作用。 The study on clinical significance of human herpesvius 6 infection of NPC tissues

CHEN Xinchun^*, JIAN Shaowen, WANG Huiming, et al.

(Shenzhen Eastlake Hospital, Shenzhen, 518020)

【Abstract】 Objective To study the infection of human herpesvirus 6(HHV-6) in NPC and its role in the carcinogensis of NPC.Methods By using polymerase chain reaction (PCR) and in situ hybridization (ISH) HHV-6 and EBV DNA to from the paraffin-embedded tissues of normal nasopharynx precancerous nasopharynx and nasopharyngeal carcinoma. EBV LMP1 was also detected in 36 tissues of NPC by immunohistochemistry (IHC).Results HHV-6 DNA PCR were detected in 30.9%(13/42) of tissues of NPC, 4.7%(1/21) of precancerous nasopharynx and non in the normal nasopharynx. Within the same tissues, EBV DNA positive rates were 95.2%(40/42), 66.6%(14/21) and 25.9%(7/27), respectively. By using ISH, HHV-6 DNA were detected only in 11 NPC tissues out of 13 HHV-6 DNA positive NPC cases and EBV DNA were detected in 47.6%(10/21) of precancerous nasopharynx tissues and 85.7%(36/42) of NPC cases. EBV LMP1 expression were detected in 47.2%(17/36) of NPC tissues.Conclusion NPC tissues can be infected with both HHV-6 and EBV, HHV-6 infection is correlated with the expression of EBV LMP1, suggesting that HHV-6 plays a direct/or indirect role in carcinogenesis of NPC via upregulating the expression of EBV LMP1. 【Key words】 NPC HHV-6 EBvirus LMP1 鼻咽癌(NPC)的发生是一多因素多阶段的结果，EB病毒(EBV)感染与NPC发生密切相关，其他病毒的感染及其对EBV的激活作用也越来越受到重视。近年来的研究发现人疱疹病毒6型(HHV-6)与多种免疫疾病及恶性肿瘤的发生有关^［1，2］。1993年Kositantent^［3］首先报道NPC组织存在HHV-6的感染。其后Flammand等^［4］报道HHV-6能激活EBV。鉴于NPC和EBV的密切关系及HHV-6恶性转化的潜能，NPC中HHV-6的感染及其反式激活EBV可能具有十分重要的意义。对NPC中HHV-6能否感染鼻咽上皮细胞，HHV-6是否在体内同样能激活EBV，并协同EBV在NPC癌变过程中起作用等诸多方面的研究，将有助于阐明NPC发生的生物因素机制，并为NPC的防治提供依据。 1 材料和方法 1.1 PCR扩增组织切片中HHV-6SalI-L-B片段和EBV BamHIW片段 本组的27例正常鼻咽(No)21例重度异型增生和化生鼻咽(Pc)、42例鼻咽癌(Cc)石蜡包埋组织取自中山医科大学肿瘤医院病理科和鼻咽癌科。K₅₆₂细胞及携带EBV的B_95-8细胞株由该大学肿瘤研究所传代培养。HSB-2细胞及HHV-6GS毒株来自香港中文大学。TAQ酶、dNTP购自华美生物工程公司。PCR引物由加拿大真达公司合成。PCR扩增的HHV-6片段长186 bp，序列源于已克隆的HHV-6恶性转化序列pZVH14^［5］。EBV片段长129 bp，位于EBV的W片段^［6］。引物序列如下：HHV-6引物：H1：5′-CCCATTTACGATTTCCTGCACCACCTCTCTGC-3′，H2：5′-TTCAGGGACCGTTATGTCATTGAGCATGTCG-3′；EBV引物：EB1：5′-CCAGACAGCAGCCAATTGTC-3′，EB2：5′-GGTAGAAGACCCCCTCTTAC-3′。 每例组织切片2片，放入预先消毒好的离心管内。脱尽石蜡，去除残余的二甲苯，自然干燥后，加入含100 μg/ml蛋白酶K的PCR裂解缓冲液200 μl，置55℃水浴中消化过夜。煮沸10分钟。稍事离心即可取上清作PCR，亦可进一步酚仿抽提纯化。培养细胞则直接加裂解液消化，随后用酚仿抽提纯化。取上裂解液5 μl或纯化的DNA1 μl(1 μg)，于反应体积50 μl，在PE9 600扩增仪中PCR扩增，反应条件见参考文献［6-7］。反应结束后，取PCR产物10 μl于2%的琼脂糖凝胶电泳，溴乙淀染色，紫外光下观察并拍照记录。 1.2

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