医学检验信息网 检验医学 2007-2-26 16:16:50

【摘要】 目的 对细小病毒H-1用于临床的安全性作初步评估。方法 本文用Ames试验、哺乳动物细胞染色体畸变试验、小鼠骨髓细胞微核试验、过敏试验和热原试验对H-1用于肿瘤治疗的临床安全性进行了检测。结果 上述所有试验都呈阴性。同时，小鼠对H-1的最大耐受量大于5×10¹¹空斑形成单位/kg体重，相当于假定的人的临床剂量的2 500倍。对H-1的宿主NB-324K细胞，进行了软琼脂集落试验和裸小鼠体内成瘤试验，其结果也呈阴性。结论 细小病毒H-1对肿瘤治疗是安全的。 A preliminary clinical safety evaluation of parvovirus H-1 on cancer therapy

LIN Wanmin, LING Wenhai, GUO Lanping, et al.Department of Physiology and Biophysics, Fudan University, Shanghai 200433

【Abstract】 Objective To make a preliminary evaluation of parvovirus H-1 for its safety in clinical use.Methods In this study, clinical safety of H-1 in cancer therapy was examined using the Ames test, the mammalian cell chromosome aberration test, the micronucleus calculation of mouse bone marrow cells, the allergy test and the pyrogenicity test.Results Negative results were observed in all the tests. The mouse tolerance test showed that the tolerance limit was at least 5×10¹¹plaque -forming units/kg weight, which was 2500 times higher than the supposed clinical dose. The H-1 host NB-324K cells were also tested using the anchorage-independent assay and the tumour formation in nude mice. Both of the assays gave negative results.Conclusion All these results preliminarily showed that the H-1 was safe in cancer therapy. 【Key words】 Parvovirus H-1 Clinical safety Animals, laboratory Neoplasms 细小病毒(parvovirus, PV)H-1的发现，已有三十多年的历史^［1］。H-1属于自主性(autonomous)病毒，即它的增殖并不需要帮助病毒(Helper)的协同感染。PV H-1的外层无囊膜包裹，蛋白外壳内含长约5 kb的单链DNA，其序列及基因组结构均已研究清楚^［2］。H-1的增殖依赖于肿瘤或转化细胞的分裂，同时最终导致这些细胞的裂解死亡；而在正常细胞内，却观察不到这一现象。这一特性构成了H-1的抑瘤作用的基础，并已在涉及到许多(并非全部)种类的肿瘤和转化细胞的体内、体外实验中得到证实^［3～4］。因此，H-1作为一种潜在的抗肿瘤生物制剂的可能性受到了广泛的重视。但与此同时，H-1本身是一种天然病毒，且又是利用转化细胞NB-324K细胞进行增殖的，在最终的病毒制剂和细胞培养系统是否存在着对临床使用H-1不安全的因子也深为人们所关注。本文从病毒原液和细胞株两方面对一些基本指标作了检测，以期能为H-1的临床安全性评价提供有用的资料。 1 材料和方法

1.1 细胞株和病毒 用SV40转化的人胎肾细胞株NB-324K和作为种源的H-1由德国癌症研究中心的J.Rommelaere教授惠赠。细胞在含10%小牛血清的MEM培养基和37℃、5%CO₂饱和水汽的条件下贴壁生长。在本室用滚瓶培养NB-324K细胞并用种源H-1感染细胞进行H-1的制备，病毒的滴度用NB-324K细胞进行空斑测定并用空斑形成单位(plaque forming unit,pfu)/ml表示，1 pfu代表1个有活力的病毒粒子。

1.2 对H-1原液的测试 H-1是分散在TE(Tris 50mM,EDTA 0.5 mM)溶液中的。由于国家现行关于药物的法规中尚未形成对病毒这样一类制剂的剂量定义，我们根据国外同行和自己的试验，设定用于临床的H-1的给药方式为静脉注射，常规用量为2×10⁸ pfu/kg体重，若人的体重以50 kg计，则H-1一次注射量为1×10¹⁰ pfu，体内每毫升血液约含H-1 2×10⁶ pfu。以下的试验均以此设定为基础。另外，试验中若需对H-1稀释，稀释液均为生理盐水。

1.2.1 微生物回复突变试验(Ames)试验)^［5］ 所用菌株为鼠伤寒沙门氏菌组氨酸营养缺陷突变株TA97，TA98，TA100和TA102，由美国加利福尼亚大学伯克利分校Bruce.N.Ames教授赠送。H-1的剂量由高到低共设5级，每皿所含活菌数为3.5×10⁷～9.5×10⁷不等，体积为0.1 ml。每一H-1剂量均包括加和不加大鼠肝微粒体酶激活制剂S₉两种情况，每一种情况做3只平皿，实验重复一次，另设阴性组(自然回复)和阳性组(加阳性药物)，所有平皿经37℃培养48 h，计数各皿中的菌落数。

1.2.2 哺乳动物培养细胞染色体畸变试验^［5］ 选用细胞为中国仓鼠肺成纤维细胞(从第二军医大学遗传病理研究室引进)，共设3个H-1剂量组，每一剂量组均包括加和不加大鼠肝微粒体酶激活制剂S₉两种情况，另设阴性组(加S₉混合液或RMPI 1640培养液)和阳性组(环磷酰胺40 μg/ml或丝裂霉素C 0.2 μg/ml)。H-1和各种药液均加入培养基中，制片后每一样品观察100个细胞。

责任编辑: 参与评论