医学检验信息网 检验医学 2007-2-26 16:16:49

单位：陈元 郭辉玉 (510089 广州 中山医科大学微生物学教研室)；曹虹 (第一军医大学微生物学教研室)；汪慧民 (中山医科大学肿瘤医院)

关键词: Epstein-Barr病毒；鼻咽癌；潜伏膜蛋白1基因；DNA测序 【摘要】 目的 研究广东地区鼻咽癌(NPC)细胞株SUNE1中EB病毒LMP1基因的结构特征。方法 利用聚合酶链反应从SUNE1细胞基因组中扩增LMP1全长DNA，并克隆到pcDNA3载体中，采用Sanger双脱氧末端终止法测定SUNE1-LMP1 3个外显子及2个内含子覆盖的序列，并与病毒原型B95-8-LMP1进行比较分析。结果 克隆到pcDNA3中的SUNE1-LMP1全基因长度为2.6 kb，测序长度为1 312 bp，与B95-8-LMP1比较，核苷酸与氨基酸的同源性分别为98.5%和96%，核苷酸及氨基酸变异主要在第3外显子，但无C端343～352密码子30个碱基的缺失，第1外显子上有XhoⅠ酶切位点的丢失。结论 广东地区NPC细胞株SUNE1中，病毒LMP1基因与原型株之间尽管致瘤性存在差异，但仍具有较高的同源性。提示NPC细胞中LMP1的致瘤特征可能并非由于LMP1基因某些特定核苷酸突变所致。 DNA cloning and partial sequence analysis of EBV LMP1 gene isolated from human nasopharyngeal carcinoma cell line SUNE1

CHEN Yuan^*, GUO Huiyu, CAO Hong, et al.

(Department of Microbiology, Sun Yat-sen University of Medical Sciences, Guangzhou, 510089)

【Abstract】 Objective To study the variation of EBV LMP1 encoding gene isolated from human nasopharyngeal carcinoma cell line SUNE1 in Guangdong.Methods The EBV LMP1 gene was amplified from the SUNE1 cell genome by PCR and then the recombinant vector was constructed by inserting the PCR fragment into pcDNA3. The encoding EBV LMP1 spanning from exon1 to exon3 in recombinant vector was sequenced by the Sequence Analyzer.Results The 1 312 bp encoding EBV LMP1 pieces in 2.6 kb PCR fragments were compared with the same EBV segments in B95-8 cell line. The data indicated that the rate of nucleotide sequence homology between the two fragments is 98.5% and the rate of amino acid is 96%. The restricted enzyme site of XhoⅠ in exon1 was deleted in SUNE1 but the 30bp deletion at the carboxyl terminus in most Chinese NPC LMP1 gene was not present.Conclusion Although the LMP1 gene derived from SUNE1 had greater tumorigenicity than that derived from B95-8 cell, the high homology rate of nucleotide and amino acid sequences between them indicated that it was not the result from the variation of certain nucleotide sites but the change in amino acid domain. 【Key words】 Epstein-Barr virus Nasopharyngeal carcinoma Latent membrane protein 1 gene DNA sequencing EB病毒(Epstein-Barr Virus, EBV)与鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma, NPC)的关系一直是人们研究的一个热点问题。EBV在人群中普遍易感，且可终生携带，但NPC的发生却有明显的地区性^［1］。对于NPC细胞中EBV的基因及病毒的存在状况，是长期以来未能解决的问题。LMP1基因由于它在EBV转化B淋巴细胞中起关键作用，而受到人们的普遍关注。目前，已有报道指出，EBV LMP1基因转染细胞接种裸鼠后可以形成肿瘤^［2］，同时LMP1基因在不同地域来源的NPC组织及不同分化程度的NPC之间，在序列上存在一定的差异。而来源于NPC组织的EBV LMP1的致瘤能力也明显高于EBV原型细胞株B95-8中的LMP1^［3］。因此，研究不同地区来源的NPC细胞中EBV LMP1核酸与蛋白的差异，对于更全面地了解EBV与NPC之间的关系具有重要的意义。 我国广东是NPC的世界最高发地区，为此我们选用了一株从广东地区NPC活检组织细胞中建立的NPC传代上皮细胞株SUNE1，对其进行EBV LMP1序列的测定，推导了其氨基酸序列，并与B95-8细胞中EBV LMP1基因进行了比较，以了解广东地区NPC病人中EBV LMP1的基因状况和变异特点。 1 材料和方法 1.1 细胞 SUNE1细胞由中山医科大学肿瘤研究所惠赠，本室保存。建株过程，按参考文献［4］进行。 1.2 质粒和菌株 克隆质粒载体pcDNA3由广州暨南大学移植免疫研究所惠赠。DH5α菌株为本室保存。 1.3 主要试剂

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