HIV-1感染的检测方法
Hong-Ha M . Truong， PhD， MS， MPH和Jeffrey D. Klausner， MD， MPH
截止2003年底，据估计全球约有4000万人感染HIV/AIDS。根据世界卫生组织(WHO)和联合国艾滋病项目组统计，2003年的新增感染者超过500万，也就是说每天新增的感染者约有14000人。从1981年美国诊断出第一例HIV感染者开始，到2002年已有886，575例病人被诊断为艾滋病患者。目前美国约患者有80到90万的HIV携带者，估计每年新增40，000例感染者。
能否对HIV感染作出快速准确的诊断是阻止其流行扩散的关键，因为每个HIV感染者血清状况的了解有助于防止感染的再次传播。从1985年推出HIV抗体检测方法后，HIV感染的诊断方法已经有了很大改进。本文概述了一系列已被美国食品和药品管理局(FDA)批准在美国使用的HIV检测技术，并对新近研制出来的代表诊断技术未来发展的几种方法做了述评。
标准HIV检测方法
HIV检测应针对那些有某种危险行为因素或临床表现与HIV感染有关的病人（表1）。HIV检测已渐渐被列入常规医疗检测的范围，而不再仅仅归属于专门的机构和检测中心。感染HIV后很快会发生血清学反应。初次感染后，HIV特异性抗体的滴度会缓慢升高（图1）。抗体反应的时间会因个体差异和病毒因素的不同而有所变化。
表１：HIV检测常见指征
提示HIV感染的临床症状和体征 |
l 发热和不明原因的疾病 l 粘膜念珠菌病（鹅口疮） l 慢性复发性皮肤病（牛皮癣） l 不明原因的淋巴结病变，伴有或不伴有疲劳与体重下降 |
提示HIV感染、性传播疾病、乙型和丙型肝炎等感染风险升高的疾病 |
l 复发性肺炎或菌血症 l 结核 l 机会性感染（如肺囊虫病，隐球菌病，巨细胞病毒感染） l 宫颈或肛门癌，淋巴瘤，卡波济氏肉瘤 |
有HIV高危行为 |
l 静脉药瘾者 l 男性同性恋 l 与可能的HIV感染者进行无保护措施的阴道性交或肛交 l 与多个性伴侣进行没有保护措施的阴道性交或肛交 |
孕娠妇女 |
可能的急性职业性暴露 |
摘自：HIV咨询、检测和举荐指南修正版。MMWR，2001
图１HIV疾病进程中病毒量、CD4计数和HIV抗体滴度的变化
CD4计数 抗体滴度 病毒量 |
急性感染期 无症状期 AIDS
在美国，HIV-1病毒是绝大多数HIV感染的病原体。HIV-2病毒主要出现在非洲，尤其是在西非地区。HIV-2的传播方式与HIV-1相同，都会发生机会性感染和AIDS，但HIV-2所致的免疫缺陷发展得较为缓慢和温和。因为HIV-2在美国较为少见，所以HIV-2未被列为常规检测。HIV-2的检测对象主要包括性伙伴为HIV-2感染者的人、来自HIV-2流行地区的人、在HIV-2流行区接受过输血或与HIV-2流行区的人共用针具的人、有HIV-2高危感染风险或已感染HIV-2的妇女的孩子。
标准的HIV检测原则由两步检测方法组成。无论是血清还是血浆标本，首先需要采用酶免方法（EIA）对HIV抗体进行筛检。如果EIA检测结果为阴性，则不需要再做进一步检测。如果EIA检测结果为HIV抗体阳性，则需进行确认试验。确认试验通常采用免疫印迹(WB)或免疫荧光试验（IFA）。在一些HIV高度流行的贫困地区，会再次进行EIA并将其作为确认试验。
酶免疫检测 酶免疫检测通常将HIV-1抗原包被在微孔板上来检测HIV-1 特异性抗体。标本中的HIV抗体通过与包被在微孔板上的HIV抗原发生反应形成免疫复合物。第一代EIA试剂所用的抗原为病毒裂解产物;第二代EIA采用了重组蛋白和合成肽抗原;第三代EIA采用双抗原夹心技术来检测IgG和IgM，加强型第三代试剂还可检测HIV-1O群毒株。
目前已有多个HIV-1 EIA试剂盒得到了FDA的批准。HIVABHIV-1/HIV-2(rDNA)EIA试剂盒(Abbortt公司)采用重组的HIV-1 env和gag和HIV-2env蛋白。用于Vironostika HIV-1 Microelisa试剂盒（bioMérieux 公司）采用的HIV-1抗原是由HIV-1 病毒在T-淋巴细胞中培养增殖后经纯化和灭活后得到的。Genetic Systems rLAV EIA试剂盒（Bio-Rad公司）采用的抗原是由在CEM细胞中增殖的源于淋巴结肿大相关病毒（LAV）的HIV-1毒株和含有HIV-1包膜蛋白gp41抗原成分的大肠杆菌重组蛋白组成的。
在1990年，易变异的HIV-1 O群毒株被分离出来并确定了其特性。在美国，由O群毒株引起的HIV感染非常罕见，它主要出现在非洲，也有一些病例出现在欧洲。HIV-1 O群毒株感染最流行的国家是喀麦隆。除非是采用全病毒裂解产物和/或含有O群特异性抗原决定簇的抗原，否则一般EIA试剂盒难以检测到O群毒株特异性抗体。FDA已经批准了两种检测O群毒株的EIA试剂盒。一是Vironostika HIV-1plus O Microelisa 试剂盒（bioMérieux公司），它采用灭活及纯化的病毒溶解蛋白以及氨基酸序列与HIV-1O群毒株（ANT70）跨膜免疫显性区域相对应的合成肽制成。Genetic Systems HIV-1/HIV-2 Plus O EIA试剂盒(Bio-Rad 公司)使用的是gp160和p24重组蛋白，代表HIV-2 的跨膜糖蛋白 gp36和一个模拟HIV-1 O群毒株特异性抗原决定簇的合成多肽。
除抗体检测外，EIA技术也能检测血液中的病毒成分。HIV p24抗原检测试剂能检测血清中的病毒衣壳蛋白p24，p24通常出现在病毒感染的急性期。然而用p24抗原检测试剂检测HIV感染的结果令人失望，因为从检测p24抗原到用标准的EIA来检测HIV抗体估计平均时间仅为6天，不是所有近期感染者的p24 抗原浓度都能达到可检测水平。
Coulter HIV-1 p24抗原检测试剂盒(Beckman Coulter公司)采用抗HIV-1 p24抗原的鼠单克隆抗体包被微孔板。从被HIV-1的HTLV-IIIB株感染的人T细胞中得到的纯化HIV-1 p24抗原被用作定量标准品。尽管自2004年4月起Coulter公司已停止生产这种用于临床检测的试剂盒，但市场上仍可见到已经生产的由FDA批准的试剂盒。这种试剂盒仍会继续供研究使用。
第一，二代检测试剂能在感染后的6-12周内检测到HIV抗体。第三代检测试剂能在感染后的3-4周内检测到抗体，而p24抗原检测试剂能将窗口期缩短至2周。HIV抗体检测试剂具有高度的敏感性与特异性(表2) 。
表２，几种HIV-1酶免检测试剂的性能比较
