白介素8酶联免疫分析方法及其初步应用

颜光涛，薛辉，郝秀华，李振甲
（解放军总医院基础所生化研究室）

    摘要：建立高灵敏度和特异性的白介素8（IL-8）ELISA法。用人工重组的IL-8多次免疫兔，获取高效价抗体。纯化抗体经生物素标记，同辣根过氧化酶（HRP）标记的亲和素可特异结合。采用纯化的抗体包被96孔板，形成固相抗体。加入不同浓度标准品后，反应1.5h，洗净后再加入生物素标记抗体，以酶标记亲和素作为探针，经酶底物显色反应可获得良好的ELISA标准曲线。该方法测定范围为0.2～10.8ng/ml，最低测出值为0.02ng/ml，批内和批是CV小于8%和10%。用该法测得18名正常人血浆中IL-8水平为0.15±0.06ng/ml。18份高低不同浓度IL-8水平的血清样品经本法和RIA测定其均值为0.54±0.35ng/ml和0.63±0.59ng/ml，相关性强（r=0.819，t=5.89）。在U937细胞系体外培养液中，LPS刺激24h和48h可测出IL-8水平明显上升；而经TNF-α刺激24h和48h后同对照没有明显变化。该方法操作简便，具有较强灵敏度和特异性，可满足人血清和细胞培养液中IL-8水平的检测。

摘自：《标记免疫分析与临床》2004年第3期