重组人白细胞介素10在毕赤酵母中的表达及生物学活性测定

井申荣 邹全明 曾韦锟 毛旭虎 刘开云

【摘要】目的 在毕赤酵母中分泌表达具有生物学活性的重组人白细胞介素10(rhIL-10),用于IL-10的生理功能研究和动物试验.方法 通过PCR扩增IL-10基因,插入到重组质粒α∕Puc1的α因子信号序列的Xho I和EcoR I酶切位点处,再将融合基因aIL-10重组到表达质粒Ppic9K的BanH I和EcoR I之间,Sa1 I酶切线性化重组质粒IL-10/Ppic9K,电穿孔转化毕赤酵母,营养缺陷型培养基MD和G418筛选含量拷贝表达盒的酵母转化子,PCR鉴定是否含有目的基因IL-10,甲醇诱导rhIL-10的表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定目的蛋白,用ELISA定量测定及MC/9细胞分析IL-10生物学活性,结果 成功构建了重组表达质粒IL-10/pPIC9K,获得了4个含IL-10基因的高拷贝毕赤酵母转化子,甲醇诱导后,在摇瓶水平的IL-10表达量为(0.627±0.09)mg/L,比活性为1.5×105U/mg.结论 毕赤酵母分泌表达的IL-10具有良好的生物学活性.

摘自: 《中华微生物学和免疫学杂志》2005年9月第25卷第9期