医学检验信息网

人肿瘤浸润性树突状细胞的表型分析及原因探讨①

中国免疫学杂志 1999年第11期第15卷 肿瘤免疫学

作者：王正昕 曹雪涛 张明徽 李 楠 王元和

单位：王正昕 王元和第二军医大学附属长征医院普外科，上海 200003；曹雪涛 张明徽 李 楠 第二军医大学基础医学部免疫学教研室，上海200433

关键词：树突状细胞；肿瘤浸润；MHC-II类分子；IL-10；VEGF；TGF-β1；免疫抑制

中国图书分类号 R73-3 摘 要 目的： 树突状细胞作为抗原提呈细胞在机体的抗肿瘤免疫反应中起重要作用，对肿瘤浸润性树突状细胞的研究有助于揭示肿瘤免疫逃逸机制。方法 ：采用酶消化、细胞分离、流式细胞仪分析等方法研究了14例胃肠道肿瘤患者肿瘤浸润性树突状细胞的表型，并用RT-PCR检测了IL-10、VEGF和TGF-β₁3种免疫抑制因子在14例肿瘤细胞中的表达。结果： 肿瘤浸润性单核细胞中有CD1a^＋的树突状细胞存在，该类细胞的表面分子如MHC-II类分子、CD80及CD54等共刺激分子和粘附分子有低表达或不表达，14例肿瘤细胞中IL-10、VEGF及TGF-β₁的表达率均较高。结论 ：肿瘤浸润性树突状细胞可能是一种无功能或功能低下的树突状细胞，肿瘤细胞在肿瘤局部分泌的免疫抑制因子可能是导致肿瘤浸润性树突状细胞功能低下的原因之一。 The phenotypes of human tumor infiltrating dendritic cells in gastrointestinal cancers

WANG Zheng-Xin,CAO Xue-Tao,ZHANG Ming-Hui et al

(Department of Immunology of Second Military Medical Uiniversity,Shanghai 200433)

Abstract Objective： As antigen-presenting cells,dendritic cells(DCs) p?ay important roles in antitumor immune response.Analysis of tumor infiltrating dendritic cells(TIDCs)would contribute to investigate the mechanisms by which tumors escape immune recognition.Methods ： Phenotypes of TIDCs were examined by methods including digestion with enzyme，cell separation and FACS.Reverse transcript-polymerase chain reaction(RT-PCR)was used to detect IL-10、VEGF and TGF-β₁ mRNA expression in the freshly isolated tumor cells of 14 patients.Results ： The expression of some molecules such as MHC class II and costimulating factors(CD80)，adhesion molecules(CD54)on the surface of TIDCs were downregulated or negative .Levels of IL-10、VEGF and TGF-β₁ mRNA expression in tumor cells of 14 patients were very high.Conclusion ： The results suggested that TIDC was a kind of dysfunctional DC and immunosuppressive factors from tumor cells could inhibit DC's function . Key words Dendritic cells Tumor infiltration MHC class II IL-10 VEGF TGF-β₁ Immunosuppression 树突状细胞（Dendritic cell,DC）是目前已知机体内功能最强的抗原提呈细胞，能在体内外直接激活静息期T细胞，促进T辅助细胞和CTL的生成。近年来关于DC在肿瘤免疫治疗中的作用研究引人注目，取得了一系列进展^［1］。但是对肿瘤微环境中浸润性DC的功能状态的研究很少，而对这部分DC的研究有助于揭示肿瘤免疫逃逸的机制。本文通过对5例胃癌、9例结直肠癌肿瘤组织中浸润性细胞的研究，证实了肿瘤浸润性树突状细胞（Tumor infiltrating dendritic cell ,TIDC）的存在，并通过流式细胞仪检测TIDC的表型，且用RT-PCR的方法检测IL-10、VEGF及TGF-β₁在14例肿瘤细胞中的表达。本结果提示肿瘤细胞局部产生的免疫抑制因子IL-10、VEGF及TGF-β₁可能是导致TIDC无功能或功能低下的原因之一。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 标本来源 胃癌标本5例,大肠癌标本9例,病理证实均为腺癌,其中直肠癌5例,结肠癌4例,标本均取自上海长征医院普外科。获瘤体重量4.40～8.10g，平均6.03g。患者年龄45～71岁，平均57.5岁，男8例，女6例。 1.1.2 主要试剂 胶原酶IV型，DNA酶I型，透明质酸酶V型，均为Sigma公司产品；淋巴细胞分离液（Histopaque，1.077g/ml）购自Sigma公司;FITC标记的抗人CD1a、抗人HLA-DR单克隆抗体、PE标记的抗人CD86、抗人CD80单克隆抗体、抗人CD54、抗人CD14单克隆抗体、同亚型对照抗体及FITC标记兔抗鼠IgG荧光二抗均购自PharMingen公司。完全培养基包括：RPMI1640，10％小牛血清，2mmol/L谷氨酰胺，0.01mmol/L丙酮酸钠，0.05 mmol/L 2-巯基乙醇，20mmol/L Hepes，1 000U/ml青霉素，链霉素1 000μg/ml,甲硝唑5μg/ml。 1.2