PCR技术简史
一、PCR技术于1985年由美国分子生物学家Kary Mullis及其同事发明。1988年该项技术正式商品化。发明人于1993年荣获诺贝尔化学奖。
二、PCR全称为Polymerase chain reaction(聚合酶链反应)，即快速体外基因扩增技术。被列为九十年代“十大生物学热点之冠”。
基本原理及步骤：
1. 高温裂解标本，经处理游离出DNA或RNA。
2. 在DNA聚合酶作用下，引物与特定DNA片段结合，并利用单核苷酸继续合成DNA链。（RNA则还需经过反转录过程）
3. 经过几十次裂解、退火、延伸的循环，复制出原有基因段1010倍量以上的相同基因。
4. 将扩增出的产物在上电泳，由此可检测出原标本中是否含有待检的特定基因（遗传病基因、病毒、病原体、肿瘤基因等）
特点：灵敏度高，特异性强，操作简便快速。
三、PCR技术应用十分广泛，可用于分子生物学、遗传工程、肿瘤学、法医学、预防医学及病毒和病原体的诊断等各个领域。
临床应用举例：
1. 遗传病诊断：α型、β型地中海贫血症，血友病以及苯丙酮尿症的产前胎儿诊断等。
2. 病毒感染疾病诊断：肝炎病毒系列(HAV、HBV、HCV、HDV、HEV等)，艾滋病毒(HIV-I)、人乳头瘤病毒(HPV)、人巨细胞病毒(HCMV)、风疹病毒(RV)、单纯疱疹病毒(HSV)、EB病毒(EBV)等。
3. 传染性病原体检测：沙眼衣原体、肺炎支原体、立克次氏体、真菌、梅毒螺旋体、疟原虫、弓形体、结核杆菌、分枝杆菌等。
4. 肿瘤基因检测：癌基因、抑癌基因、肿瘤药敏基因等。
四、PCR技术于1988年前后在中国已有少数分子生物学实验室开始应用，在医院单位作为一项检测新技术则是1992年开始出现。其发展迅速，现在在沿海地区相当多数医院及内地大城市大医院都有开展，而且有向中小型医院迅速普及的趋势。事实上，从1996年起已开始出现全国“PCR热”。
五、PCR检测项目收费标准：依各地情况不同而从60元/项到120元/项不等。不同项目亦有不同，如丙肝检查可收费高至250元。试剂、消耗品成本：DNA项目平均不超过20元/项；RNA项目平均不超过50元/项。
六、建PCR实验室所需条件：
⑴ 实验仪器：
a. PCR扩增仪
b. 台式高速离心机
c. 紫外透射反射分析仪
d. 稳压稳流电泳仪
e. 水平电泳槽
f. 无菌操作台
g. 水浴锅
h. 漩涡振荡器
i. 高精度微量移液器
j. 0.2ml或0.5ml PCR反应管、加样器吸头等
⑵ 试剂：
应用于不同项目的PCR试剂盒。
⑶ 实验室环境要求：
1－2间专用实验室，空调、冰箱等。
七、PCR技术的关键：PCR扩增仪
用户在挑选PCR仪时应注意的几个关键问题：
⑴ 控温装置先进、技术稳定可靠，
⑵ 升降温速率不能太慢(影响扩增结果、反应效率等)，也不能太快(影响酶活力等)，以0.5℃～2.0℃/秒为好。
⑶ 控温精度范围应小于±1.0℃。
⑷ 孔间温差均匀度范围应小于±1.0℃。
⑸ 电脑系统应便于操作，有记忆功能。
⑹ 使用寿命长。
⑺ 价格合理，高性能/价格比。
⑻ 生产厂家和经销公司能提供完善的质量保障及售后服务。
八、常见PCR仪所采用的控温装置：
⑴ 固定温度式
a. 水浴槽分别控温(机械臂移动、三水箱式)
b. 金属槽块分别控温(机械臂移动、三或四金属槽块式)
⑵ 热空气加热和风扇制冷
⑶ a. 电热丝加热和水循环制冷
b. 电热丝加热和压缩机制冷
c. 电热丝加热和风扇制冷
d. 电热丝加热和Peltier元件制冷
⑷ Peltier元件加热和制冷
二、PCR全称为Polymerase chain reaction(聚合酶链反应)，即快速体外基因扩增技术。被列为九十年代“十大生物学热点之冠”。
基本原理及步骤：
1. 高温裂解标本，经处理游离出DNA或RNA。
2. 在DNA聚合酶作用下，引物与特定DNA片段结合，并利用单核苷酸继续合成DNA链。（RNA则还需经过反转录过程）
3. 经过几十次裂解、退火、延伸的循环，复制出原有基因段1010倍量以上的相同基因。
4. 将扩增出的产物在上电泳，由此可检测出原标本中是否含有待检的特定基因（遗传病基因、病毒、病原体、肿瘤基因等）
特点：灵敏度高，特异性强，操作简便快速。
三、PCR技术应用十分广泛，可用于分子生物学、遗传工程、肿瘤学、法医学、预防医学及病毒和病原体的诊断等各个领域。
临床应用举例：
1. 遗传病诊断：α型、β型地中海贫血症，血友病以及苯丙酮尿症的产前胎儿诊断等。
2. 病毒感染疾病诊断：肝炎病毒系列(HAV、HBV、HCV、HDV、HEV等)，艾滋病毒(HIV-I)、人乳头瘤病毒(HPV)、人巨细胞病毒(HCMV)、风疹病毒(RV)、单纯疱疹病毒(HSV)、EB病毒(EBV)等。
3. 传染性病原体检测：沙眼衣原体、肺炎支原体、立克次氏体、真菌、梅毒螺旋体、疟原虫、弓形体、结核杆菌、分枝杆菌等。
4. 肿瘤基因检测：癌基因、抑癌基因、肿瘤药敏基因等。
四、PCR技术于1988年前后在中国已有少数分子生物学实验室开始应用，在医院单位作为一项检测新技术则是1992年开始出现。其发展迅速，现在在沿海地区相当多数医院及内地大城市大医院都有开展，而且有向中小型医院迅速普及的趋势。事实上，从1996年起已开始出现全国“PCR热”。
五、PCR检测项目收费标准：依各地情况不同而从60元/项到120元/项不等。不同项目亦有不同，如丙肝检查可收费高至250元。试剂、消耗品成本：DNA项目平均不超过20元/项；RNA项目平均不超过50元/项。
六、建PCR实验室所需条件：
⑴ 实验仪器：
a. PCR扩增仪
b. 台式高速离心机
c. 紫外透射反射分析仪
d. 稳压稳流电泳仪
e. 水平电泳槽
f. 无菌操作台
g. 水浴锅
h. 漩涡振荡器
i. 高精度微量移液器
j. 0.2ml或0.5ml PCR反应管、加样器吸头等
⑵ 试剂：
应用于不同项目的PCR试剂盒。
⑶ 实验室环境要求：
1－2间专用实验室，空调、冰箱等。
七、PCR技术的关键：PCR扩增仪
用户在挑选PCR仪时应注意的几个关键问题：
⑴ 控温装置先进、技术稳定可靠，
⑵ 升降温速率不能太慢(影响扩增结果、反应效率等)，也不能太快(影响酶活力等)，以0.5℃～2.0℃/秒为好。
⑶ 控温精度范围应小于±1.0℃。
⑷ 孔间温差均匀度范围应小于±1.0℃。
⑸ 电脑系统应便于操作，有记忆功能。
⑹ 使用寿命长。
⑺ 价格合理，高性能/价格比。
⑻ 生产厂家和经销公司能提供完善的质量保障及售后服务。
八、常见PCR仪所采用的控温装置：
⑴ 固定温度式
a. 水浴槽分别控温(机械臂移动、三水箱式)
b. 金属槽块分别控温(机械臂移动、三或四金属槽块式)
⑵ 热空气加热和风扇制冷
⑶ a. 电热丝加热和水循环制冷
b. 电热丝加热和压缩机制冷
c. 电热丝加热和风扇制冷
d. 电热丝加热和Peltier元件制冷
⑷ Peltier元件加热和制冷
