医学检验信息网 检验医学 2007-2-1 11:52:54

关键词： 脂蛋白类；HDL胆固醇；均相法 【摘要】 目的 研制高密度脂蛋白胆固醇均相法测定的试剂。方法 利用多聚体和聚阴离子在表面活性剂的作用下对脂蛋白进行选择性遮蔽，仅使高密度脂蛋白中的胆固醇参与胆固醇反应。结果 研制的试剂(Y)与推荐方法DS50-Mg(X₁)和PTA-Mg沉淀法(X₂)相关良好，分别为Y=1.040X₁-0.063，r=0.988 3；Y=0.944X₂+0.073，r=0.965 7。在HDL-C浓度为2.84 mmol/L以下线性良好，r=0.998 2，HDL-C低、中、高值血清标本的批内和批间(CV)值分别为2.07%、1.81%、0.80%和2.77%、1.97%、1.73%，特异性好，平均回收率为98%，胆红素、血红蛋白等干扰不明显。结论 HDL-C均相法测定结果的准确性与精密度符合临床要求。 Homogeneous assay for measuring serum high-density lipoprotein cholesterol GAO Delu^*, ZHANG Shijun, LI Peiying. ^* PLA 305^th Hospital, Beijing 100017 【Abstract】 Objective To prepare the homogeneous assay reagents for measuring high-density lipoprotein cholesterol and its analytical performance.Methods Selective inhibition assay principle was applied in the enzymatic determination of HDL-cholesterol. appropriate quantities of polymer, polyanion, surfactants, and cholesterol enzyme reagents were used in the two regent solutions.Results The directly determined HDL-C values with the home-prepared reagent (Y) closely correlated with those obtained by precipitation with DS-Mg(X₁)(Y=1.040X₁-0.063) and PTA-Mg (X₂)(Y=0.944X₂+0.073) methods. The assay was linear up to at least 2.84mmol/L(r=0.998 2).The within-run CV and between-run CV at low、middle、high HDL-C concentration specimens were 2.07%, 1.81%, 0.80%, and 2.77%, 1.97%, 1.73% respectively. The average recovery rate of the added pure HDL was 98%. Interference by bilirubin and hemoglobin was insignificant.Conclusion The precision and accuracy of HDL-C determination with this homogeneous assay method can fulfill the clinical requirement. 【Key words】 Lipoproteins, HDL cholesterol Homogeneous assay 高密度脂蛋白胆固醇均相法（HDL-C homogeneous methods）测定通称直接法(Direct Method)测定。由于标本不需预处理，可用自动分析仪检测，适合于大规模流行病学调查及工作量大的实验室使用，且具有标本用量少、快速、简便、精密度高等优点，因而日益为临床实验室采用。直接法的应用无疑是常规测定方法的革新。随着自动分析仪的普及，直接法取代沉淀法已是必然趋势。由于目前无国产试剂，所以各种类型的进口试剂价格昂贵，鉴于上述情形，我们认为应该开发国产试剂，希望能逐步地替代进口产品。经过一年半的研究，终于研制出了不同于国外试剂成分，并适合我国国情的高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)均相法试剂，经与用作参考方法的硫酸葡聚糖镁沉淀（DS-Mg）法、我国检验学会推荐的磷钨酸镁沉淀(PTA-Mg)法及日本第一化学药品株式会社（简称日化试剂）的均相法比较，基本一致（偏差＜0.68%）。 该试剂的测定原理是:第一试剂（RⅠ）中聚阴离子和多聚体在表面活性剂的作用下，使得除高密度脂蛋白(HDL)以外的脂蛋白形成稳定的复合物；第二试剂（RⅡ）中的表面活性剂、酶及色原则可使HDL释放出胆固醇(CHO)，从而测出高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）的含量。 材料与方法

1.标本：留取机关体检的正常人血清标本及部分高总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG） 患者血清96份。

2.试剂：(1) 本室研制的RⅠ液：聚阴离子、多聚体、表面活性剂、4-氨基安替比林。RⅡ液：胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶、表面活性剂、酚衍生物。校准血清：新鲜混合血清用DS-Mg法定值。(2) 日本第一化学药品株式会社生产的HDL-C直接测定试剂盒(Lot No 006RCV)，由前处理液RⅠ、酶液RⅡ组成。第一化学校准品，HDL-C测定专用(Lot No 004RBU)。 (3)TC、TG测定用酶试剂，磷钨酸镁法试剂盒，北京中生公司出品。(4)DS50（分子量50 000）法国Sochibo产品（Lot No 10003）。(5)氯化镁含6H₂O，优级纯，北京化工厂生产。(6)纯低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白(HDL)：用超速离心法从人血清中分离，由卫生部北京老年医学研究所生化室提供。

3.仪器：日本Olympus AU 600自动分析仪，日立7060 、7170 自动分析仪，BM 4010光度计，Beckman DU530 分光光度计。

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