医学检验信息网 检验医学 2007-2-26 16:16:40

的抑菌环直径，加克拉维酸和不加克拉维酸的抑菌环直径之差≥5 mm，即确认为ESBLs菌株。质控标准大肠埃希菌ATCC25922结果之差≤2 mm。单纸片加抑制剂舒巴坦扩散法：选用CAZ、CTX和AZT纸片，并另外在3种纸片上分别加舒巴坦10 μg，培养条件、方法及结果判断同单纸片加抑制剂克拉维酸扩散法。 4.双纸片扩散法：阿莫西林双纸片协同扩散法：培养接种方法同单纸片扩散法。阿莫西林纸片贴于平皿中央。 周围分别贴CAZ、CTX和AZT纸片，每种纸片与中央纸片分别选取 15mm和20 mm两种间距。结果以周围纸片与中央纸片间出现协同抑菌环为ESBLs菌株。氨苄西林双纸片协同扩散法：氨苄西林纸片贴于平皿中央。其余条件、方法及结果判断同阿莫西林双纸片协同扩散法。 结果 1.初步筛选试验：110株大肠埃希菌可疑产ESBLs菌26株，84株肺炎克雷伯菌可疑产ESBLs菌20株（表3）。 2.不同检测方法对产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌检出的比较：见表1～3。 表3 产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌检出的比较(阳性例数)

方 法	产ESBLs
大肠埃希菌	肺炎克雷伯菌
ESBLs初筛试验	26/110	20/84
Etest法	16/26	4/20
单纸片扩散法加克拉维酸	16/26	12/20
单纸片扩散法加舒巴坦	14/26	12/20
阿莫西林双纸片协同法	14/26	8/20
氨苄西林双纸片协同法	8/26	4/20

3.5种确证检测方法对产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌检出的差异性 Etest法对产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的检出差异有非常显著性，确切概率法P＜0.01，对后者的检出率明显低于前者。单纸片扩散法加克拉维酸对两种菌的检出无差异，且有较好的一致性。其余方法对两种菌的检出率也无明显差异。

4.5种确证检测方法对产ESBLs大肠埃希菌检出的相互比较。统计学检验表明在检测产ESBLs大肠埃希菌时，5种方法除氨苄西林双纸片协同法检出率低以外，其他4种方法的检出率差异无显著性意义（P＞0.05)，5种方法在检测产ESBLs大肠埃希菌时有较好的一致性。

5.5种确证检测方法对产ESBLs肺炎克雷伯菌检出的相互比较：检测产ESBLs肺炎克雷伯菌时，单纸片扩散法加克拉维酸或舒巴坦与Etest法、氨苄西林双纸片协同法检出率存在差异（P＜0.05)，并且前两种方法与后两种方法在检测产ESBLs肺炎克雷伯菌时存在不一致性。

讨论

耐药菌株产生的ESBL及ESBLs主要是TEM类和SHV类，迄今为止TEM类ESBLs已增加到TEM-52，SHV也由SHV-2增加到SHV-24，目前临床实验室还在不断地发现新的TEM类和SHV类ESBLs，这给临床检测不断出现的新的耐药菌株带来巨大的挑战，也要求临床有对ESBLs耐药菌株灵敏、特异、稳定、易行的检测方法。

本试验对目前临床已采用的5种检测ESBLs耐药菌株的确证试验方法进行比较，表明5种方法对产ESBLs大肠埃希菌平均检出有较好的一致性，但氨苄西林双纸片协同法检出率低于其他4种方法。检测产ESBLs肺炎克雷伯菌时，单纸片扩散法加克拉维酸或舒巴坦检出率高于Etest法和氨苄西林双纸片协同法。经多次重复试验显示，在检测ESBLs肺炎克雷伯菌时Etest法检出率明显低于单纸片扩散法和阿莫西林双纸片协同法，这可能与目前用于临床检测产ESBLs细菌Etest纸条的单一底物有一定关系，也可能与临床分离的肺炎克雷伯不同菌株对抗生素所产生的耐药性酶的种类及产酶量有关。

为了提高耐药菌株的检出率及增加试验结果的稳定性，我们建议首选单纸片扩散法加克拉维酸的表型确证试验，并严格遵循克拉维酸现配现用的原则，这与许多试验结果及试验要求相吻合^［6，7］。

参考文献

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2，Palucha A, Mikiewicz B, Gniadkowski M .Diversification of Escherichia coli expressing an SHV-type extended-spectrum beta-lactamase (ESBL) during a hospital outbreak: emergence of an ESBL-hyperproducing strain resistant to expanded-spectrum cephalosporins. Antimicrob Agents Chemother, 1999, 43:393-396.

3，Wiener J, Quinn JP, Bradford PA, et al. Multiple antibiotic-resistant Klebsiella and Escherichia coli in nursing homes. JAMA, 1999,281:517-523.

4，National Committee for Clinical Laboratory Standards. Performance srandards for antimicrobial susceptibilitz testing. M100-S9, Pennsylvania: NCCLS, 1999,19:36,75.

5，Leblebicioglu H, Nas Y, Eroglu C, et al. Detection of extended spectrum beta-lactamases in Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae. J Chemother 1999,11:103-106.

6，Pai H, Lyu S, Lee JH, et al.Survey of extended-spectrum beta-lactamases in isolates of Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae: prevalence of TEM-52 in Korea. J Clin Microbiol, 1999,37:1758-1763.

7，Ho PL, Chow KH, Yuen KY,et al. Comparison of a novel, inhibitor-potentiated disc-diffusion test with other methods for the detection of extended-spectrum beta-lactamases in Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae. J Antimicrob Chemother, 1998,42:49-54.

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