医学检验信息网 检验医学 2007-2-26 16:16:37

关键词： β-内酰胺酶类 抗药性，微生物 大肠杆菌 克雷伯菌肺炎 【摘要 】 目的 比较3种方法检测大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌临床分离株所产的超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的敏感性。方法 首先用纸片扩散初筛法从73株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中筛选出20株可疑产ESBLs的菌株，同时用纸片扩散确证法、浓度梯度法(Etest)法和双纸片协同法进行测定比较。结果 对可疑产生ESBLs的14株大肠埃希菌和6株肺炎克雷伯菌,用纸片扩散确证法头孢噻肟和头孢噻肟-克拉维酸组检测，此20株全部为ESBLs株，而头孢他啶和头孢他啶-克拉维酸组的13株初筛株有12株ESBLs阳性。Etest法用头孢他啶和头孢他啶-克拉维酸检测，有12株ESBLs阳性。双纸片协同法用头孢噻肟检测此20株全部为ESBLs阳性，用头孢他啶检出14株ESBLs阳性。结论 头孢噻肟及头孢他啶双药检测ESBLs的3种方法证明，头孢噻肟检出ESBLs的敏感性明显高于头孢他啶。 Comparison of the sensitivity for detection of extended -spectrum beta-lactamase by three methods

XU Yingchun^*, JIN Yan, WANG Peng, et al.

^* Department of Clinical Laboratory, Peking Union Medical College Hospital, Beijing 100730

【Abstract 】 Objective To compare the sensitivity of three methods for the detection of extended-spectrum beta-lactamases(ESBLs) produced by E. coli and K. pneumoniae.Methods Fourteen strains of E. coli and 6 strains of K. pneumoniae suspiciously produced ESBLs detected by a disc diffusion screen test among 73 E. coli and K.pneumoniae clinical isolates. A disc diffusion confirmatory test, Etest, and a double-disc synergy test detected these 20 strains.Results All of the 20 strains were ESBLs-producing strains by cefotaxime and cefotaxime-clavulanic acid of the disc diffusion confirmatory test, but there were 12 ESBLs-positive strains among 13 suspicious ESBLs-producing strains tested by ceftazidime and ceftazidime-clavulanic acid. Among the 20 strains, 12 ESBLs-producing strains were detected by Etest with ceftazidime and ceftazidime-clavulanic acid. All of the 20 strains were ESBLs positive by double-disc synergy test with cefotaxime, but only 14 were the ESBLs-positive with ceftazidime.Conclusion Among the three methods, the sensitivity of cefotaxime was higher than that of ceftazidime.

【Key words 】 beta-lactamases Escherichia coli Klebsiella pneumoniae

超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)主要是质粒介导的，它们很容易引起医院感染的暴发流行，所涉菌株常多重耐药。因此实验室能否及时准确检测出产ESBLs的细菌已成为目前细菌室的重要任务之一^［1，2］。我们应用即纸片扩散初筛法选出可疑产ESBLs的14株大肠埃希菌和6株肺炎克雷伯菌，再用纸片扩散确证法、浓度梯度法(Etest法)和双纸片协同法同时检测比较其敏感性。

材料和方法 一、材料

1.菌株：系1999年1～3月从住院患者中分离的73株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌参与ESBLs检测研究。按1999年1月版美国临床实验室标准化委员会(NCCLS，M100-S9)推荐的纸片扩散初筛法超广谱β-内酰胺酶试验指南^［3］进行，当受试菌对头孢噻肟纸片(30 μg/片,Oxoid产品)的抑菌环直径≤27 mm或头孢他啶纸片(30 μg/片，Oxoid产品)的抑菌环直径≤22 mm时，视为产ESBLs可疑株，结果筛出可疑产ESBLs的14株大肠埃希菌和6株肺炎克雷伯菌。菌株均采用法国生物梅里埃公司VITEK GNI试卡鉴定确认。

2.药敏用培养基：Mueller-Hinton琼脂（英国OXOID公司产品 ）。

二、方法

1.纸片扩散确证法：按1999年1月NCCLS推荐的标准纸片扩散确证法测定ESBLs指南进行^［3］，采用头孢他啶(caz,30 μg)及头孢他啶/克拉维酸(cazl，30 μg/10 μg)组合，头孢噻肟(ctx,30 μg)及头孢噻肟/克拉维酸(ctxl,30 μg/10 μg)组合，任一组药物的抑菌环的直径差≥5 mm时，判定为ESBLs阳性株。cazl和ctxl纸片系按NCCLS规定程序本室自制。制成的纸片应在30分钟内干燥，并立即使用。

2.Etest法：头孢他啶和头孢他啶-克拉维酸Etest复合试条系瑞典AB Biodisk公司产品,按厂家检测说明书进行，当头孢他啶与头孢他啶－克拉维酸的最小抑菌浓度比值≥8倍时，判定为ESBLs阳性株。

3.双纸片协同法：参考 Jarlier等^［4］推荐的方法进行，将替卡西林-克拉维酸纸片置于头孢他啶和头孢噻肟之间，使两纸片中心间距为25 mm，如果在替卡西林-克拉维酸与任何一种纸片间出现协同抑菌现象,视为产ESBLs株。

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