β－内酰胺酶活性测定

北里大学医疗卫生系阿部美知子报告，用一种β－内酰胺酶检查药盒P/C(青霉素G/头孢他啶＋克拉维酸)，以溴甲酚紫做pH指标剂测定阳性分离菌株的β－内酰胺酶活性。

目前检查β－内酰胺酶的方法有：头孢菌素显色、酸定量、碘测量方法，及头孢菌素酶、β酰胺酶和P/C测定药盒法。

该文介绍了P/C测定的特点。按P/C测定来检出产A类酶的菌，如果A类酶量多，则在检查5分钟后的早期反应，不仅可检出部分青霉素酶(阳性反应)，还可检出部分头孢菌素酶(假阳性反应)。然而随着时间延长而消失，30分钟后后者呈完全阴性。

此现象的出现是由于克拉维酸(CVA)抑制青霉素酶的作用尚需要一定时间，即细菌涂片后不久，克拉维酸并不能立即抑制青霉素酶，致使少量头孢菌素水解使试纸变黄(阳性)。克抗维酸作用一开始，水解作用就终止。暂时变黄的试纸受周围试纸pH的中和而呈阴性(兰色)；产ESBL菌也有类似情况。

在实际工作中，判定早期反应，有可能将产A类酶菌当作产A类加C类酶菌，因此在观察反应时务必等待30分钟后作判断。

此外，产C类酶菌，如细菌产生C类酶较多时，亦可使青霉素酶出现假阳性反应，因此有时不能判定是产C类酶菌或产A加产C类酶菌。

由于P/C测定的特性，同一菌株在不同医院的阳性率亦有差异。阿部为验证P/C测定结果，测定β－内酰胺酶活性值(单位/mg蛋白)以头孢噻吩(CET)、氨苄西林(ABPC)、CET和CET＋CVA作基质测定比值。结果发现，P/C测定的阴性菌株中，各基质均无活性。产A类酶的大肠埃希菌株中ABPC呈明显活性；产ESBL的大肠埃希菌株中，ABPC、CET均有活性，加了CVA的基质则未见活性。

神奈川县7所医院分离的100株中，P/C测定结果同β－内酰胺酶活性值几乎一致，从P/C测定认为是产A类加C类酶菌，再经活性比值测定即可判断是A类还是C类。