绿脓假单胞菌的耐药质粒血清型与耐药性
我国绿脓假单胞菌(PA)的血清型各地分布差异较大，对我省PA血清型的分布与耐药性的研究也有重要意义。
一、材料与方法
1.菌株：前瞻性调查收集近期一年内我省不同地区6家医院住院肺心病急性发作期病人痰标本。筛选出来自下呼吸道的PA197株。
2.药敏试验：采用纸片扩散法，按美国临床实验室标准化委员会文件处理和判断结果并用质控菌监控。
3.质粒DNA检测：提取按改良后Kado-Liu法进行。标准分子量：V517λ-DNA hindⅢ。
4.血清学分型：应用成都生物制品研究所的IATS-20型分型血清，玻片凝集法。
二、结果
1.药敏试验：耐药结果见表1。
表1 197株PA对18种抗生素的耐药结果(μg/片)
| 抗生素 | 纸片 含量 | 耐药 株数(%) | 抗生素 | 纸片 含量 | 耐药 株数(%) |
| 多粘菌素B | 300 | 0(0.0) | 妥布霉素 | 10 | 45(22.8) |
| 哌拉西林 | 100 | 18(9.1) | 庆大霉素 | 10 | 47(23.9) |
| 环丙沙星 | 10 | 17(8.6) | 头孢噻肟 | 30 | 104(52.0) |
| 头孢他啶 | 30 | 18(9.1) | 拉氧头孢 | 30 | 112(56.9) |
| 舒巴坦/ 头孢哌酮 | 30 | 17(8.6) | 头孢三嗪 | 30 | 121(61.4) |
| 头孢哌酮 | 75 | 19(9.6) | 头孢唑肟 | 30 | 160(81.2) |
| 阿米卡星 | 30 | 19(9.6) | 复方新诺明 | 25 | 181(91.9) |
| 氧氟沙星 | 10 | 32(16.2) | 氨苄西林 | 10 | 187(94.9) |
| 亚胺培南 | 10 | 42(21.3) | 头孢唑啉 | 30 | 192(97.5) |
注：括号内数为耐药率 2.质粒检测：取耐6种以上抗菌药物的100株(耐8种以上88株，耐6、7种中随机抽取12株)多重耐药菌做质粒检测、分析。97株中除1株未检出外，96株(99%)检出2～5条质粒带。第1～5条质粒带的分子量约为18500、17 000、15 000、14 000和4 000。
3.血清型：97株菌做血清分型，87株均能明确分型，分型率89.7%。共分13个血清型，依次为1型(20.6%)、3型(14.4%)、9型(13.4%)、2型(10.3%)、10型(8.2%)、4和16型(5.2%)、17型(4.1%)、6和8型(3.1%)、5和12、19型(1.0%)。贵阳地区以1、2、4型为主，遵义地区以9、3、10型居多。其中各家医院的主要型别也不相同。
三、讨论
6家医院肺心病患者下呼吸道PA对18种抗菌药物的药敏提示，197株中无1株对全部抗菌药物敏感，耐药最多的达16种。耐1～5种占18.7%，耐6～10种占71.6%，耐11种以上占9.5%。由于抗菌药物的广泛应用质粒介导的耐药菌株迅速播散，耐药日趋严重，病人往往死于多重耐药株的感染［1］。97株PA由于选择了多重耐药株，其质粒检出率达99%。1993年吴桐等［2］报告PA质粒检出率为24.2%，1995年缪竞智等［3］报告检出率为45%。随着耐药性的增强，质粒图谱分析已被广泛应用于细菌性感染的分子流行病学研究［4］。97株PA中99%的菌株带有分子量18500、14 000的两条质粒带，其中39.2%的菌株还带有分子量为4 000的质粒带。表明近几年本地区流行的多重耐药PA，大多数在遗传学上具有同源性相关。研究发现本组PA对抗菌药物耐药的种类数与质粒数无明显关系。具有相同质粒的菌株与血清型之间也无明显相关性。
世界各地PA血清型分布不均。我国的分布也不均衡。西藏、昆明以6、11、3型为主［5］，北京地区以6、11、17和2型为主［3］。而我省却以1、3、9型居多。分型结果提示我省不同地区有差异，而且同一地区不同医院的血清型也不相同，这种差异不能完全用地理环境来解释。是否与医院交叉感染和用药有关，有待进一步研究。但其分型可为肺心病PA感染的流行病学调查提供依据。结果提示，血清型与耐药有一定相关性，1型对氧氟沙星耐药相对较多，3型对妥布霉素、庆大霉素耐药较明显，9型对头孢噻肟、拉氧头孢、头孢三嗪耐药也较突出。但血清型与细菌耐药的种类数无明显关系。
基金项目：贵州省科委科技基金资助项目(933067)
参考文献
1 王辉，谢秀丽，徐英春，等.革兰阴性杆菌对12种抗生素的耐药监测——Etest法.中华医学检验杂志，1997，5：265-267.
2 吴桐，史俊华.120株绿脓杆菌的质粒图谱分析.中华流行病学杂志，1993，5：304-305.
3 缪竞智，张秀珍，李焕娄，等.肺心病患者绿脓杆菌分型耐药质粒DNA分子杂交的临床意义.中华结核和呼吸杂志，1995，6：357-359.
4 包其郁，周丽萍，吴淑珍，等.志贺菌的质粒谱及耐药性分析.中华医学检验杂志，1999，4：235-237.
5 何代平，车应龙，曾桂茹，等.西藏51株铜绿假单胞菌的血清型及药敏谱的检测.中华微生物学和免疫学杂志，1994，6：129.
