医学检验信息网 检验医学 2007-2-26 16:16:43

关键词： 中性红染色；抗真菌药微生物敏感性试验 【摘要】 目的 为了进一步验证中性红染色方法在抗真菌药物敏感试验中的应用。方法 分别测定特比萘芬和伊曲康唑对22株临床常见皮肤癣菌(红色毛癣菌、须癣毛癣菌、石膏小孢子菌、犬小孢子菌)的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MFC)值。其中MFC值的测定用中性红染色方法与常规培养方法分别进行对比。结果 特比萘芬对皮肤癣菌MIC值与MFC值相同，为0.001～0.008 μg/ml。结论 特比萘芬有抑菌和杀菌的双重作用。中性红染色方法具有方便、快捷的特点，对于判断真菌的活性以及评价抗真菌药物的MFC较常规方法更为优越，值得进一步推广应用。 A pplication of neutral red staining in antifungal susceptibility test Wang Haiying, li Ruoyu, Wan Zhe, et al. Department of Dermatology, First Hospital, Beijing medical University, beijing, 100034 【Abstract 】Objective To evaluate the neutral red staining in the application antifungal susceptibility test.Methods The minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum fugicide concentration (MFC) of terbinafine and itraconazole to 22 strains of commonly isolated dermatophytes (T. rubrum, T. mentagrophytes, M. gypseum and M. canis) were detected in vitro. the culture-proved MFC value was compared with neutral red staining method.Results The neutral red staining method is strongly correlated with normal culture method in the judgment of MFC.Conclusion the neutral red staining method is a convenient and effective in the evaluation of antifungal effect in vitro. 【Key words 】 Neutral red staining Antifungal drugs Microbial sensitivity tests 抗真菌药物的体外药敏试验是用作测定抗真菌药物对致病真菌的敏感程度、杀灭效力的。试验结果对指导临床用药有重要价值。体外药敏试验常规测定最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（minimum fugicide concentration, MFC）。但常规方法比较费时费事。由于中性红染色法只能使活的真菌着色^［1，2］，因此我们试用中性红染色法与常规MFC测定法进行对照，一方面试验中性红染色在药敏中的应用，用以测定药物的MFC值；另一方面测定抗真菌药物的MIC和MFC值的浓度差别，测试抗真菌药物的效力。 材料和方法

一、材料

1.药品来源：（1）特比萘芬（terbinafine）纯品，山东齐鲁药厂提供。（2）伊曲康唑（itraconazole）纯品，西安杨森药厂提供。

2.菌株来源：北京医科大学第一医院皮肤科真菌和真菌病研究中心临床分离致病菌株，共22株皮肤癣菌。其中红色毛癣菌（T. rubrum）10株，须癣毛癣菌（T. mentagrophytes）8株，石膏小孢子菌（M . gypseum）3株，犬小孢子菌（M . canis）1株。

3.培养基：（1）固体沙氏培养基。（2）改良沙氏液体培养基：称取葡萄糖20 g，蛋白胨10 g，加入蒸馏水1 000 ml中高压蒸气灭菌，4℃贮存备用。

二、方法

1.制备药物保存液和工作液：称取特比萘芬、伊曲康唑各12 .8 mg，分别溶于1 ml的纯二甲基亚砜（DMSO）中即成12 .8 mg / ml，贮存在4℃冰箱内备用。试验时用50％DMSO稀释1 000倍，进一步用基础液体培养基分别稀释200倍和25倍，即试验工作浓度分别为特比萘芬0.064 μg / ml，伊曲康唑0.512 μg / ml。

2.菌悬液制备：试验前用固体沙氏培养基传代

附表 特比萘芬和伊曲康唑对22株皮肤癣菌的MIC、MFC值范围(μg/ml)

菌名	株数	MIC值范围	MFC值范围*
		特比萘芬	伊曲康唑	特比萘芬	伊曲康唑
红色毛癣菌	10	0.001～0.002	0.001～0.002	0.001～0.002	(0.001～0.002)	0.016～0.032	(0.016～0.064)
须癣毛癣菌	8	0.004～0.008	0.008～0.016	0.004～0.008	(0.004～0.008)	0.128～0.256	(0.128～0.256)
石膏小孢子菌	3	0.004	0.004～0.008	0.004	(0.004)	0.128～0.256	(0.128～0.256)
犬小孢子菌	1	0.004	0.008	0.004	(0.004)	0.256	(0.256)

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