医学检验信息网 检验医学 2007-2-26 16:16:47

摘要 在无血脑心浸液卵黄琼脂培养基(BHI-EA)的基础上进行改良，建立一新型快速、简便的幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)无血脑心浸液卵黄琼脂培养基(BHI-EA)。应用此改良培养基和含血脑心浸液培养基(BHIA)分别对82例胃粘膜标本进行分离培养，对两者在Hp阳性培养率、分离时间及Hp纯培养速度方面进行比较。改良培养基分离Hp阳性率为70%(57/82)，脑心浸液血培养基阳性率为63%(52/82)。采用改良培养基分离Hp时间缩短近24 h，纯培养时间缩短近12 h，且细菌各项检测指标典型。因此，改良培养基更适用于Hp的分离培养。 An improved medium without blood for Helicobacter pylori

WANG Yichao,GUO Gang,XIE Qinghua,ZOU Quanming(Department of Clinical Microbiology,Third Military Medical University,Chongqing 400038)

Abstract Establish a rapid and easy medium without blood for Helicobacter pylori.Improve the components to the brain heart infussion-egg yolk agar medium without blood(BHI-EA).Through isolation and cultivation of the Helicobacter pylori from 82 stomach mucosas with the improved medium and brain heart infusion agar containing blood(BHIA)to compared the difference between this improved medium and BHIA on the positive rate of the stomach mucosas,isolation time and grow speed of pure cultivation.The rate of Helicobacter pylori positive with the improved mediums was 70%(57/82),but with the BHIA was 63%(52/82).The time for pure cultivation could shorten 12 h,isolation shorten 24 h.All the test indexes were typically.The improved medium is easier to isolate and culture Helicobacter pylori. Key words Helicobacter pylori； Medium Helicobacter pylori(幽门螺杆菌,Hp)是一种与人类消化道疾病密切相关的病原菌。其体外培养的方法较多^［1，3］，国内多采用含血脑心浸液培养基。由于其操作的繁琐及易污染性，近年来陆续有人采用无血培养基即卵黄培养基^［4，5］，但该培养基仍存在培养时间较长的缺点。针对此情况，我们在卵黄培养基的基础上进行改良，使培养时间缩短，且细菌的各种生物学性状均较典型。 1 材料及方法 1.1 培养基的制备 1.1.1 含血脑心浸液培养基(BHIA) 取脑心浸液(BHI)^［6］45 ml加入蛋白胨1 g、NaCl 0.5 g、Na₂HPO₄ 1.5 g、蒸馏水 55 ml，调节pH值至7.6～7.8，加琼脂粉1.5 g后高压，再加入已灭菌绵羊血5 ml，10 g/dl葡萄糖5 ml和万古霉素、磺胺增效剂(TMP)以及多粘菌素B，使其最终浓度分别达到10 mg/L、5 mg/L、0.38 mg/L，倒平板备用。 1.1.2 卵黄脑心浸液培养基(BHI-EA) 取新鲜鸡蛋于75%酒精内消毒10分钟，以无菌手续将卵黄取出放入有玻璃珠的无菌生理盐水中，使最终体积比为1∶1，摇匀备用。向45 ml牛脑心浸液中加入胰蛋白胨1 g，1 g/dl可溶性淀粉，NaCl 0.5 g、Na₂HPO₄ 1.5 g、蒸馏水55 ml，调节pH值为7.6，加琼脂粉1.5 g高压，待温度降至60°C时加入上述卵黄水30 ml，再加入20 g/dl无菌葡萄糖溶液3 ml及抗生素混悬液，使最终浓度分别为，万古霉素10 mg/L，TMP 5 mg/L，多粘菌素B 0.38 mg/L，倒平板待用。 1.2 Hp分离培养 取82例我校附属医院消化科胃镜室就诊病人胃粘膜标本，分别置玻璃匀浆器内研磨后，取等量悬液均匀涂布于上述二种培养基上。将各接种平板置于密闭玻璃干燥器内，用抽气泵抽至负压73 kPa后，灌入气体使终浓度分别达到(5% O₂、85% N₂、10% CO₂)，罐内放一盛水小瓶，使湿度＞95%，37°C孵箱内孵育1～4天，观察Hp生长情况以及检测生物学性状。 1.3 Hp纯培养 取等量已分离纯化的Hp菌液转种到上述两种培养基上，L型玻璃棒均匀涂布后培养，培养条件同上，观察长出肉眼可见菌落所需时间。 1.4 Hp鉴定 生长出的菌株用革兰染色镜检，PCR鉴定，另作脲酶、氧化酶、触酶及动力实验对其生物学性状进行检测，步骤按常规法进行。 2 结果 2.1 两种培养基上胃标本中Hp分离培养速度的比较 标本接种后，每24小时观察一次，如出现可疑Hp菌落，则取菌涂片行革兰染色镜检，并作脲酶、氧化酶、触酶和PCR鉴定。如果形态染色典型，脲酶、氧化酶、触酶及PCR阳性则确认为标本Hp分离阳性。用BHI-EA培养基培养24小时后阳性例数在总阳性例数中的比率为21%(12/57)，高于BHIA上24 h的阳性比率2%(1/52)，两者相差显著(P＜0.01)。培养48 h后BHI-EA上的阳性比率为88%(50/57)，也显著高于BHIA上的阳性比率60%(31/52)(见表1)，证明BHI-EA培养基能显著缩短胃标本中Hp的检出时间。 表1 两种培养基上不同时间胃粘膜标本分离Hp的阳性例数 Table 1

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