医学检验信息网 检验医学 2007-2-8 12:40:47

我国四株狂犬病毒糖蛋白基因序列分析和位点比较

中国病毒学 2000年第1期第15卷 研究报告

作者：唐青 Lillian A Orciari Charles E. Rupprechti 赵秀芹 李志刚 杨为松

单位：唐青 赵秀芹(北京中国预防医学科学院流行病研究所，北京 102206)；Lillian A Orciari(美国疾病控制中心，美国)；Charles E. Rupprechti(美国疾病控制中心，美国)；杨为松(第四军医大学唐都医院传染科，西安 710038)；李志刚(宁夏自治区卫生防疫站，银川 750004)

关键词：狂犬病毒；糖蛋白；基因；同源性；致病性；嗜神经性

摘 要： 测定我国人用狂犬疫苗株(aG)、减毒株(CTN-181)及两株街毒 糖蛋白(GP)基因cDNA的核苷酸序列及推导氨基酸序列。结果两株街毒仅相差两个碱基和一个氨基酸残基；两株街毒与CTN的同源性(85.9%)高于aG株(81.9%)；聚类分析将街毒和固定毒分为两支。比较GP嗜神经位点的氨基酸序列与蛇神经毒素同AChR结合部位高度同源。被认为决定毒力的333位Arg，CTN发生了Q替换，其它毒株均为Arg333。所比较的毒株均存在319位糖基化位点，此外37位糖基化位点也相对保守；GP两个主要抗原表位，GⅡ的氨基酸构成完全一致，GⅢ只在一些减毒株中发生与毒力密切相关碱基的替换。 分类号： R373.9 文献识别码： A 文章编号： 1003-5125(2000)01-0022-12 Sequencing and Position Analysis of the Glycoprotein Gene of Four Chinese Rabies Viruses

TANG Qing, YANG Wei-song

(Epidemiology and Microbiology Institute of National Academy

of Preventive Medicine, Beijing 102206, China)

Lillian A Orciari

(National Center for Infectious Diseases Control, 1600 Clifton Road,

N.E. Atlanta, Georgia 30333, USA)

Abstract： The glycoprotein gene of human rabies vaccine strain (aG), one attenuated fixed strain (CTN-181) and two street viruses were sequenced and the amino acid sequences were deduced. The result shows that two street strains have two differences in nucleotide sequences and one in amino acid sequences, the nucleotide homology was higher compared with CTN (85.9%) than with aG (81.9 %). Phylogenetic tree divided the street strains and the laboratory strains into two branches. High amino acid sequence similarity was present between the segments of the viral GP which may function as a recognition site for AchR and the receptor-binding region of the neurotoxins; CTN strain had Q substitution at position 333 and the other virulent strains preserved 333 Arg. In all strains 319 glycosyl ation was existed, glycosylation on 37 is also relatively conserved. The amino acid constitution of antigenic site Ⅱ is identical in all compared strains, but on site Ⅲ some attenuated strains have amino acid substitution on position 333 and other sites which related with pathogenicity. Key words ： Rabies virus; Glycoprotein; Gene; Homology; Pathogenicity; Neurotropic▲ 狂犬病毒糖蛋白(GP)是嵌在病毒粒子表面形成棘状突起的结构成分，它既可以诱导宿主免疫反应产生中和抗体和刺激细胞免疫，又作为媒介使病毒吸附在宿主细胞表面进而侵入细胞，因此无论是在病毒的免疫原性或病毒的组织嗜性和毒力方面，GP都起着决定性作用。目前一些实验室固定毒株的GP基因序列测定已相继完成^［1，2］。我国到目前为止仅进行过广西一只疯犬分离毒株和中国人用疫苗株(3aG和5aG)的GP基因序列测定^［3，4］。通过对这些毒株的序列测定和分析已知狂犬病毒GP基因由1650个核苷酸残基组成，完整阅读框(ORF)从起始密码(ATG)到终止密码(TGA)共1575个核苷酸残基，编码524个氨基酸。流行于不同地区、不同宿主的狂犬病毒，其GP基因的变异远远大于核蛋白基因。由于GP与狂犬病的预防和致病密切相关，我国狂犬病流行严重，宿主动物种类又多，对本国分离毒株GP基因的分析和研究，有助于深入了解我国狂犬病毒致病和保护性免疫的机理，为此在对我国四株狂犬病毒GP基因序列测定的基础上进行了有关GP基因与致病性、免疫原性及组织嗜性关系的分析和研究。 1 材料与方法 1.1 病毒 aG为中国人用地鼠肾细胞疫苗株，因分离自北京也称北京株(PG)，由中国预防医科院流研所严玉辰老师提供。CTN-181为实验室减毒株，由中国药品生物制品检定所严子林老师提供。CNX8511和CNX8601是我国宁夏省卫生防疫站收集的两例临床诊断为狂犬病的死亡病人脑组织标本，两份标本冻存于-20℃经多年后送至流研所经乳鼠脑传代，冷冻切片后用抗狂犬病毒荧光抗体染色鉴定为狂犬病毒并分离得到病毒，均为街毒。 1.2 PCR及序列反应引物

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