医学检验信息网 检验医学 2007-2-8 12:40:47

乙型肝炎表面抗原疑难判定血清的研究

中国病毒学 2000年第1期第15卷 研究报告

作者：林京香 王佑春 张华远

单位：中国药品生物制品检定所，北京 100050

关键词：乙肝表面抗原；S基因突变；诊断试剂

摘 要： 用中国药品生物制品检定所检定合格的国内外HBsAg EIA试剂及ABBOTT抗-HBs、抗-HBc EIA试剂，对所收集的13份HBsAg疑难判定血清进行检测，并用PCR方法检测血清中HBV DNA，结果显示国内外HBsAg试剂对部分HBV DNA阳性样品的检出率差异较大，提示这些样品可能为S基因突变株或HBsAg含量较低，因此，HBsAg EIA试剂的敏感度仍有待进一步提高，并应进一步研制检测S基因突变株的HBsAg诊断试剂。 分类号： R373.21 文献标识码： A 文章编号： 1003-5125(2000)01-0008-03 Study on Indeterminate HBsAg Samples

LIN Jing-xiang, WANG You-chun, ZHANG Hua-yuan

(Dept. of Hepatitis, National Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products，Beijing 100050, China)

Abstract： Thirteen indeterminate HBsAg samples were tested with 21 sorts of HBsAg kits, anti-HBs and anti-HBc kits. HBV DNA was detected with nested PCR. The results showed that all of HBsAg kits can not easily detected HBsAg from some HBV DNA positive samples.It indicated that HBsAg concentration may be lower or HBV may be Smutants in those samples. So it is necessary to improve the sensitivity of HBsAg and to develop the diagnostic kit to detect HBV Smutants. Key words ： HBsAg; Sgene mutant; Diagnostic kit▲ 近年，国内外均有许多关于乙型肝炎病毒(HBV)基因突变的报道，HBV S基因突变可以逃避机 体抗-HBs免疫，使乙肝疫苗免疫失败^［1～3］。通过对HBsAg突变体基因表达产物 的抗原性分析，显示不同突变体之间存在着抗原性的差异^［4，5］。因此，用不同 HBsAg酶联免疫(EIA)试剂检测同一份血清，其结果有可能截然不同，即临床上发现HBsAg指 标漏检。我们从国内不同地区收集用两种以上试剂检测结果不一致的血清，分别用ABBOTT等 4家 进口和17家国产HBsAg EIA国家批批检定合格试剂及ABBOTT抗-HBs、抗-HBc EIA试剂进行 检测，并用PCR方法检测血清中的HBV DNA，以便确诊是否为HBV感染，现将结果报告如下： 1 材料和方法 1.1 血清 13份HBsAg疑难判定血清，分别来自于北京血液中心、武汉生物制品研究所、成都生物制品研究所、兰州生物制品研究所、厦门新创科技有限公司、洛阳华美生物工程公司。 1.2 试剂 17家国产HBsAgEIA试剂为国家批批检定合格产品；4家国外HBsAgEIA诊断试剂分别来自美国亚培制药有限公司、美国强生傲拓诊断系统有限公司、荷兰阿克苏若贝尔公司和美国Geneticsystems公司；抗-HBsEIA和抗-HBcEIA为美国亚培制药有限公司产品。 1.3 免疫学检测方法 国内外HBsAgEIA试剂及抗-HBc试剂对13份血清样本的检测，均严格按使用说明书操作及判断结果。HBsAg阳性样品以实际OD值与试剂临界值(cutoff value)之比(S/C)表示。 1.4 HBV DNA PCR检测 按华美公司D NA提取试剂盒操作说明书提取DNA，取5μL DNA提取液，加5μL 10×buffer，4μLMgCl₂(25mmol/L)，1μLdNTP(10mmol/L)，25pmol/L外引物，2.5uTaqDNA聚合酶，加去离子水至50μL反应体积。扩增程序为：94℃1min,55℃1min,72℃1min,30个循环，最后72℃延伸10min。取第一轮PCR产物5μL，内引物各25pmol/L，其它试剂量及反应程序同上，进行第二轮PCR扩增。 2 结果 2.1 国外四种HBsAg试剂的检测结果 用四种进口HBsAg试剂检测13份血清，结果有4个样品，即1、2、3和13号(占4/13)为四种试剂全部阳性；有1个样品，即3号(占1/13)，为三种试剂阳性；有1个样品，即9号(占1/13)，为二种试剂阳性；有4个样品，即5、6、7和10号(占4/13)，为一种试剂阳性；有3个样品，即8、11和12号(占3/13)，为四种试剂全部阴性(见表1)。 表1 13份HBsAg可疑样品的检测结果 Table 1 Detection of 13 indeterminate HBsAg samples

编号 No.	ABBOTT*	Aks*	Or*	Gen*	PCR	cAb	SAb*	国内# In C hina
1	3.7	1.3	13	28	+	-	-	5/17
2	1.9	1	2.5	2	+	+	-	1/17
3	30	3.9	41	-	+	+	-	3/17
4	2.2	8.5	5.4	2	-	-	-	0/15
5	29	-	-	-	+	+	-	0/15
6	14	-	-	-	+	+	1.5	0/15
7	27	-	-	-	-	+	1.4	0/15
8	-	-	-	-	+	+	23	7/17
9	-	1.1	41	-	+	+	16	6/17
10	-	-	-	2.7	+	+	-	7/17
11	-	-	-	-	+	+	-	6/15
12	-	-	-	-	+	+	3.8	3/15
13	9.5	4.1	26	13	+	+	-	10/14

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