医学检验信息网 检验医学 2007-2-9 13:10:37

B族链球菌(GBS)是孕妇生殖道主要携带菌之一。孕妇生殖道有多种细菌存在，在普通培养基中这些细菌生长速度快，常使比较娇嫩GBS菌生长受到抑制，造成GBS菌漏检。我们在普通培养基(THB)基础上，加入结晶紫、萘啶酮酸、多粘菌素，其目的为抑制其他细菌生长，而不影响GBS生长，其结果报告如下。 一、材料

1.菌株来源： 标准GBS族和Ia、Ib、Ic、Ⅱ、Ⅲ型菌株由俄罗斯圣彼得堡实验医学研究所提供。临床分离10株GBS和凝固酶阳、阴性葡萄球菌、大肠埃希菌、变形杆菌、绿脓假单胞菌各1株均为北京儿童医院微生物室提供。

2.培养基：（1）普通培养基：THB培养基(Difco公司)；（2）选择性培养基：在THB培养基基础上，加入萘啶酮酸15 μg/ml，多粘菌素1～2 μg/ml，结晶紫0.1～0.2 μg/ml。

二、方法

1.细菌鉴定： 根据菌落形态、β溶血、CAMP、马尿酸水解试验阳性初步鉴定为GBS菌，最终以协同凝集试验进行。

2.选择性THB体外抑菌试验：所有菌株分别配制成0.5个麦氏管浓度的菌悬液后，稀释到10⁵浓度菌悬液；分别取0.1 ml菌悬液接种到选择性THB和普通THB培养基中，37℃，5% CO₂孵箱过夜后转种到5%羊血Todd-Hewitt(TH)血平皿中，37℃，5%CO₂孵箱过夜观察。

3.普通和选择性THB培养基临床标本分离培养： 取自300例孕妇后穹窿双份拭子，分别置于普通和选择性THB培养基中，培养方法同上。

三、结果

1.选择性THB不同浓度抗菌物质作用：结晶紫浓度为0.1 μg/ml浓度时，明显抑制葡萄球菌生长，在0.15～0.2 μg/ml时，基本抑制葡萄球菌生长，GBS生长不受影响，而在＞0.25 μg/ml，在抑制葡萄球菌同时，能够轻度抑制GBS生长；多粘菌素浓度1～2 μg/ml，GBS菌生长良好，明显抑制绿脓假单胞菌、变形杆菌、大肠埃希菌。当浓度＞2 μg/ml，可轻度抑制GBS生长；萘啶酮酸15 μg/ml不抑制GBS生长，但对革兰阴性杆菌抑制作用弱，而当与多粘菌素结合应用抑制杆菌作用明显增强(表1)。

表1 不同浓度抗菌物质的抑菌作用

结晶紫+多粘菌素+萘啶酮酸 (μg/ml)	细菌生长情况
葡萄球菌	革兰阴性杆菌	GBS(族和型)
＜0.1+1.5+1.5	++	-	+
(0.15-0.2)+1.5+1.5	-	-	+++
＞0.2+1.5+1.5	-	-	+
0.15+＞2+15	-	-	+
0.15+＜1+15	-	++	+

1.革兰阴性杆菌包括大肠埃希菌、变性杆菌、绿脓假单胞菌 2.-：无菌生长；+：采用三区划线法，少数散在菌落，菌落直径＜0.5 mm ++：主要分布在一和二区，菌落较大，直径0.5～1 mm；+++：分布在三区，菌落生长茂盛，直径为1～2 mm 2.标准菌株在普通和选择性THB培养基生长情况：在选择性THB中，凝固酶阳性和凝固酶阴性葡萄球菌、大肠埃希菌、变形杆菌、绿脓假单胞菌生长均被抑制，而GBS生长良好；在普通培养基中，GBS生长常常被轻度抑制，其他菌生长旺盛。 3.普通和选择性THB对临床标本分离情况：普通THB培养基GBS分离阳性率为22/300），且GBS菌落小和数量少，多为2～5个菌落，常常与其他细菌混合生长；选择性THB培养基GBS分离阳性率10%（31/300），且血平皿中几乎均为GBS菌生长，其他细菌被抑制。两种培养基分离阳性率经配对卡方检验，P＜0.01，结果差异有非常显著意义。 三、讨论

孕妇生殖道GBS细菌分离培养的敏感性和准确性主要取决于所使用的培养基和培养方法、标本采集部位。1996年美国疾病控制中心(CDC)^［1］推荐使用含有庆大霉素(8 μg/ml)和萘啶酮酸(15 μg/ml)或多粘菌素（1～2 μg/ml）和萘啶酮酸（15 μg/ml)作为GBS分离选择性培养基(简称SMB)；Dunne等^［2］证明SMB培养基是适宜GBS分离培养的理想培养基。Gray等^［3］认为，在SMB选择性培养基基础上加结晶紫来抑制葡萄球菌更为理想。体外试验表明，结晶紫具有主要抑制葡萄球菌作用，而多粘菌素和萘啶酮酸主要抑制革兰阴性杆菌，结晶紫浓度控制在0.1～0.2 μg/ml，多粘菌素在1～2 μg/ml，萘啶酮酸在15 μg/ml范围内，可有效抑制其他细菌生长，而GBS菌生长不受影响；当抗菌物质浓度增高时同样可抑制GBS菌生长，这与Gray等^［3］研究结果相似。因此在配制选择性THB培养基时，应注意控制抗菌物质浓度在有效的范围内。临床结果发现选择性THB能够明显抑制杂菌生长，而GBS菌生长不受影响，分离GBS阳性率也高于普通THB培养基，说明选择性THB培养基是一种更适合于临床GBS菌分离培养的较理想的培养基。

参考文献

[1] Centers for Disease Control and Prevention. Prevention of perinatal group B sreptococcal disease: a public health perspective. Morbid Mortal. Weekly Rep，1996，45(RR-7)：1-24.

[2] Dunne WM, Holland-staley CA. Comparison of NNA Agar culture and selective broth culture for detection of group B streptococcal colonization in women. J Clinic Microbiol，1998,8：2298-2300.

[3] Gray BM, Pass MA, Dillon HC. Laboratory and field evaluation of selective media isolation of group B streptococcus. J Clinic Microbiol，1979，9：466-470.

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