血液标本的采集和抗凝
一. 毛细血管采血
操作
1. 采血部位成人以左手无名指为宜, 半岁以上儿童手指为好, 半岁以下婴 幼儿通常自拇指或足跟采血.
2. 轻轻按摩采血部位,使其自然充血,用 75%乙醇棉球消毒局部皮肤待干. 3. 紧捏刺血部位,用无菌采血针穿刺取血动作应迅速,深度约2-3mm,以稍加 挤压血液能流出为宜。
4. 用干棉球擦去第一滴血,按需要依次采血.
5. 采血完毕,用于棉球压住伤口片刻.
注意事项:
1. 耳垂采血要避开冻疮, 发炎, 水肿等部位, 以避免影响结果.
2. 进行多项检查时,采血标本次序为血小板计数, 红细胞计数, 血红蛋白 测定白细胞计数等,出血时间需另刺一针,进行观察.凝血时间需另行测定.
二. 抗凝剂的选用
临床检验常用的抗凝剂有以下三种:
(一) 掬橼酸钠(trisodijum citrate): 掬橼酸盐可与血中钙离子形成可溶性鳌合物, 从而阻止血液凝固. Na3C6H5O7＋Ca++─CaC6H5O7＋3Na+
枸橼酸钠有Na3C6H5O7.2H20和2Na3C6H5O7.11H2O等多种晶体, 通常用前者配成106mmol/L(31.3g/L)水溶液(也有用109mmol/L的浓度)与血液按1:9或 1:4比例使用. 枸橼酸钠常用于凝血象和红细胞沉降率的测定. 因毒性小, 也用于输血保养液中.
(二) 肝素(heparin):
肝素是一种含硫酸基团的粘多糖, 分子量为15000, 带强大的负电荷, 具多方面抗凝作用, 主要对抗凝血活酶和凝血酶的形成和活性, 阻止血小板聚集. 通常用肝素粉剂(每mg含100-125u)配成1g/L水溶液, 每ml含肝素1mg.取0.5ml置小瓶中, 于37-50C烘干后能使5ml血液不凝固.
(三 ) 乙二胺四乙酸(EDTA)盐
EDTA有二钠,二钾,三钾盐, 均可与血中钙离子结合成鳌合物, 从而阻止血液凝固. Na2C10H14O8N2＋Ca++─CaC10H14O8N2＋2Na+＋2H+
EDTA盐经100c干燥, 抗凝作用不变. 通常配成15g/L水溶液, 每瓶0. 4ml,经干燥后可抗凝血液5ml. EDTA盐对血细胞形态和血小板影响很小, 因此适用于血液常规检查, 特别是血小板计数. 但影响血小板聚集和白细胞吞噬功能,不适用于作凝血象检查和血小板功能试验.
附注:物理抗凝法
将血液注入含有适量玻璃珠的三角瓶中徐徐摇动, 使纤微蛋白全部粘附在玻璃珠上. 亦可使血液不再凝集, 用本法分离的抗凝血为脱纤维蛋白血.
血红蛋白测定
氰化高铁血红蛋白(HiCN)法
原理:
全血加HiCN试剂, 除Hbs及HBC外其他血红蛋白衍生物均能转化成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋白, 在分光光度计540nm处比色测定, 根据标准读数和标本读数计算其浓度. 在有条件的单位, 可根据其摩尔消光系数计算含量.
试剂: HiCN试剂的配法
氰化钾 50mg
高铁氰化钾 200mg
无水磷酸二氢钾 140mg
Trition X-100(或其他非离子型表面活性剂如乳化剂OP,Tween80等)1.0ml.
蒸馏水 加至100ml
此液为淡黄色透明液体, 用蒸馏水调零,波长540nm处的吸光度应为零. 贮 放在棕色瓶中, 放冰箱保存.
操作
1. 取血20ml, 加到5mlHiCN试剂中, 充分混和, 静置5分钟.
2. 分光光度计(带宽应小于 8nm), 波长540nm处, 光径(比色杯内径)
1.000cm, 以HiCN试剂或蒸馏水液为空白, 测吸光度(A).
3. 计算
血红蛋白(g/L)=测定管吸光度x64458/44000x251=测定管吸光度x367.7
式中:
1)64458是目前国际公认的血红蛋白平均分子量
2)44000是1965年国际血液学标准化委员会(ICSH) 公布的血红蛋白 摩尔吸光度
3)251稀释倍数
由于仪器的差异, 性能不一, 任以采用HICN参考标准液绘制标准曲线的方法为妥, 以血红蛋白参考值为横坐标, 以吸光度为纵坐标, 绘制曲线, 实际应用比较方便.
参考值:
男: 120-160g/L(12-16g/dl)
女: 110-150g/L(11-15g/dl)
新生儿: 170-200g/L(17-20g/dl)
附注:
1) 血红蛋白测定方法很多, 但无论采用哪一种方法, 都必须以HiCN法标本绘制标准曲线.
2) HiCN法结果准确可靠,操作也简便, 但试剂中KCN为剧毒药用于日常大量标本应注意废液处理, 可用Fe2SO43消毒
临床意义:
生理性增加: 新生儿 高山居住者
病理性增加: 真性红细胞增多征, 代偿性红细胞增多征( 如先天性心脏病, 漫性肺脏疾病, 脱水)
减少: 各种贫血, 白血病, 产后, 手术后, 大量出血.
红细胞计数
原理:
用等渗稀释液将血液稀释并充入计数池后, 于显微镜下计数.
试剂:
赫姆氏液(Hayem):
氯化钠(NACL) 1.0g
结晶硫酸钠(Na2SO4.10H2O) 5.0g (或无水硫酸钠2.5g)
氯化高汞 0.5g
蒸馏水 加至 200ml
溶解后加2%伊红水溶液1滴, 过滤后用.
操作:
1.取小试管一支, 加红细胞稀释液压1.99ml
2. 自指尖采血, 擦去第一滴血后, 再使流出血液形成较大的血滴, 勿 过分挤压.
3. 用一次性消毒微量吸管取血10ml.
4. 擦去管坚外部余血, 轻轻吹入红细胞稀释液底部, 再轻吸上部 清 液, 洗吸管2-3次, 然后立即混匀.
5. 充池后待2-3分钟, 用低倍镜依次计数中央大方格内四角和正中五 个大方格内的红细胞
计算 5个中方格内的红细胞数×5×10×200×106=红细胞数/L
参考值:
男: (4-5.5)×1012/L (400万-550万/uL)
女: (3.5-5)×1012/L (350万-500万/uL)
