EDTAK3抗凝剂导致血小板假性减少1例报道
北京协和医院检验科 张时民
EDTAK3作为血常规检测的抗凝剂已被公认并得到广泛使用。但EDTAK3导致血小板发生聚集，并在血细胞计数仪测定中被视为非血小板而不被计数，导致血小板假性减少（Pseudothrombocytopenia, PTCP）的事偶有发生，国外曾有多例报道，国内未见类似报道，应当引起重视。
1、病例介绍和相关实验检查
患者男，43岁，因发热到医院就诊，做血常规检查红细胞和白细胞及相关参数正常，但血小板仅为14×109/L，复查后血小板依然较低，被急收入院检查治疗。患者无明显出血倾向，无鼻出血、齿龈出血、血尿、皮肤紫癜、头痛、腹痛、肝肾疾病等问题。多次复查血小板在10～30×109/L之间，初步疑为药物原因或免疫性疾病导致血小板减少，原因待查。住院期间进行骨髓检查，提示骨髓增生活跃，粒系、红系、淋巴细胞比例形态正常，巨核细胞3个，血小板数量不少。其他化验检查正常，但血清IgG18.7～18.9g/L；IgA4.46～5.36g/L；血小板抗体 PAIgG 476～581ng/107PLT，明显高于正常参考范围。
患者住院期间进行血常规化验全部采用美国BD公司生产EDTAK3抗凝管抽取静脉血，在ADVIA 120及MEK-6108型血液分析仪上测定，前者为采用激光技术和组化染色原理的五分类血细胞分析仪，后者为普通电阻式三分类血细胞分析仪，全部采用仪器原装配套试剂，并每日质控合格。
对患者的EDTAK3抗凝血进行涂片检查中发现，该患者血片中有大量聚集的血小板出现，一般以30～50个血小板聚集在一起为多见，其血小板聚集体比正常白细胞大2-5倍（图1-6），将该血样置于许汝和氏稀释液中，在计算盘上计数，同样发现多达50个以上的血小板密集聚在一起，其大小相当于白细胞的3～5倍，无法计数。而将患者的末梢血液直接稀释于许汝和氏稀释液中，经显微镜下计数得到血小板数为288×109/L，与EDTAK3抗凝血结果相差10倍以上，其血片观察，血小板数量正常、散在、无聚集现象。将不抗凝的末梢血直接予稀释液后，在SYSMEX KX-21等细胞计数仪上测定，血小板计数结果多在215～292×109/L之间，血小板数量正常。
2、讨论
EDTAK3做为抗凝剂，使得血液不凝固并保持红细胞、白细胞、血小板体积形态不发生改变，从而进行血细胞计数和分析，已被广泛应用并被作为标准执行。但是EDTAK3做为抗凝剂又确有促使或诱导导致血小板发生凝集，从而导致血小板计数假性低下的问题也偶有出现。在《诊断学》教科书上及国外出版的血液学检验书籍中都有简要说明，国外的有关文献报道也很多，而在国内检验书籍中和文献中却很少提到，值得引起检验界同行的重视。
EDTAK3导致在血细胞分析仪上血小板计数假性减少的主要原因为血小板发生了聚集。大量成堆的血小板聚在一起，超过了血小板计数阈值设定的范围，也超过了红细胞、白细胞的阈值设定范围，因此它即不被认做血小板，也不被红细胞和白细胞计数区域认定，甚至在直方图上都得不到显示和提示（图7、8），但在淋巴细胞、单核细胞、和大的不成熟细胞区出现较多信号，在粒细胞区域上方出现一排表示大细胞的、横向密集的散点。在三分类式血球分类直方图上也没有出现异常图形（图9）。
EDTAK3导致发生血小板聚集的原因可能与一种抗血小板抗体的自身抗体有关，或血小板膜表面存在的某些隐匿性抗原有关。此类患者经化验检查，常有免疫球蛋白增高、抗血小板抗体增高等问题。这些病例多出现在实体瘤、髓或淋巴系统增生症、自身免疫病、心脏疾病、干燥综合征、浓毒血症、肝硬化以及一些不明原因疾病和某些查体者身上。有关EDTAK3导致血小板假性降低的报道，这些病例提到的患者均无出血性疾病、血液病和导致血小板减少的疾病。报道中均发现经EDTAK3抗凝处理的血液，出现血小板减少问题，一般通过血片观察发现血小板大量聚集的信息，然后采用如枸掾酸盐、草酸盐、肝素钠、ACD液等方式抗凝血液，采用计数板方法或血球计数仪测定得到正确血小板计数结果。
国外使用自动血液分析仪和EDTAK3抗凝静脉血做血常规检查历史比我们长，因此发现这种问题较多、较早，发现问题和经验都较多。我国近几年才逐步推广采用静脉血做血常规检查，其中的一些问题还未注意到。例如此类问题，应该按照有关血液常规检查的基本要求，对红细胞、白细胞、血小板任何一项数值或直方图出现异常或有异常提示的标本实行推片检查，可避免此类问题发生。
参考文献：
1.戚仁铎主编：《诊断学》第四版，人民卫生出版社，P351，
2.John.V. Dacie and S.M. Lewis: Practical Heamatology,6th edition, P82
3.Christopoulos CG,Machin SJ. A new type of pseudothrombocytopenia:EDTA-mediated agglutination of platelets bearing Fab fragments of a chimaeric antibody. Br J Haematol 1994,87(3),650-652
4. Bizzaro N, Brandalise M. EDTA-dependent pseudothrombocytopenia. Association with antiplatelet and antiphospholipid antibodies. Am J Clin Pathol 1995 ;103(1):103-107
5. Wilkes NJ, Smith NA, Mallett SV. Anticoagulant-induced pseudothrombocytopenia in a patient presenting for coronary artery bypass grafting. Br J Anaesth 2000 ;84(5):640-2
6. Bragnani G, Bianconcini G, Brogna R, Zoli G. Pseudothrombocytopenia. Clinical comment on 37 cases. Minerva Med 2001 ;92(1):13-7
讨论议题：
1.请广大血液学工作者及有关专家教授协助解答发生此现象的机理。
2.在日常工作中如何发现这种问题。
EDTAK3作为血常规检测的抗凝剂已被公认并得到广泛使用。但EDTAK3导致血小板发生聚集，并在血细胞计数仪测定中被视为非血小板而不被计数，导致血小板假性减少（Pseudothrombocytopenia, PTCP）的事偶有发生，国外曾有多例报道，国内未见类似报道，应当引起重视。
1、病例介绍和相关实验检查
患者男，43岁，因发热到医院就诊，做血常规检查红细胞和白细胞及相关参数正常，但血小板仅为14×109/L，复查后血小板依然较低，被急收入院检查治疗。患者无明显出血倾向，无鼻出血、齿龈出血、血尿、皮肤紫癜、头痛、腹痛、肝肾疾病等问题。多次复查血小板在10～30×109/L之间，初步疑为药物原因或免疫性疾病导致血小板减少，原因待查。住院期间进行骨髓检查，提示骨髓增生活跃，粒系、红系、淋巴细胞比例形态正常，巨核细胞3个，血小板数量不少。其他化验检查正常，但血清IgG18.7～18.9g/L；IgA4.46～5.36g/L；血小板抗体 PAIgG 476～581ng/107PLT，明显高于正常参考范围。
患者住院期间进行血常规化验全部采用美国BD公司生产EDTAK3抗凝管抽取静脉血，在ADVIA 120及MEK-6108型血液分析仪上测定，前者为采用激光技术和组化染色原理的五分类血细胞分析仪，后者为普通电阻式三分类血细胞分析仪，全部采用仪器原装配套试剂，并每日质控合格。
对患者的EDTAK3抗凝血进行涂片检查中发现，该患者血片中有大量聚集的血小板出现，一般以30～50个血小板聚集在一起为多见，其血小板聚集体比正常白细胞大2-5倍（图1-6），将该血样置于许汝和氏稀释液中，在计算盘上计数，同样发现多达50个以上的血小板密集聚在一起，其大小相当于白细胞的3～5倍，无法计数。而将患者的末梢血液直接稀释于许汝和氏稀释液中，经显微镜下计数得到血小板数为288×109/L，与EDTAK3抗凝血结果相差10倍以上，其血片观察，血小板数量正常、散在、无聚集现象。将不抗凝的末梢血直接予稀释液后，在SYSMEX KX-21等细胞计数仪上测定，血小板计数结果多在215～292×109/L之间，血小板数量正常。
2、讨论
EDTAK3做为抗凝剂，使得血液不凝固并保持红细胞、白细胞、血小板体积形态不发生改变，从而进行血细胞计数和分析，已被广泛应用并被作为标准执行。但是EDTAK3做为抗凝剂又确有促使或诱导导致血小板发生凝集，从而导致血小板计数假性低下的问题也偶有出现。在《诊断学》教科书上及国外出版的血液学检验书籍中都有简要说明，国外的有关文献报道也很多，而在国内检验书籍中和文献中却很少提到，值得引起检验界同行的重视。
EDTAK3导致在血细胞分析仪上血小板计数假性减少的主要原因为血小板发生了聚集。大量成堆的血小板聚在一起，超过了血小板计数阈值设定的范围，也超过了红细胞、白细胞的阈值设定范围，因此它即不被认做血小板，也不被红细胞和白细胞计数区域认定，甚至在直方图上都得不到显示和提示（图7、8），但在淋巴细胞、单核细胞、和大的不成熟细胞区出现较多信号，在粒细胞区域上方出现一排表示大细胞的、横向密集的散点。在三分类式血球分类直方图上也没有出现异常图形（图9）。
EDTAK3导致发生血小板聚集的原因可能与一种抗血小板抗体的自身抗体有关，或血小板膜表面存在的某些隐匿性抗原有关。此类患者经化验检查，常有免疫球蛋白增高、抗血小板抗体增高等问题。这些病例多出现在实体瘤、髓或淋巴系统增生症、自身免疫病、心脏疾病、干燥综合征、浓毒血症、肝硬化以及一些不明原因疾病和某些查体者身上。有关EDTAK3导致血小板假性降低的报道，这些病例提到的患者均无出血性疾病、血液病和导致血小板减少的疾病。报道中均发现经EDTAK3抗凝处理的血液，出现血小板减少问题，一般通过血片观察发现血小板大量聚集的信息，然后采用如枸掾酸盐、草酸盐、肝素钠、ACD液等方式抗凝血液，采用计数板方法或血球计数仪测定得到正确血小板计数结果。
国外使用自动血液分析仪和EDTAK3抗凝静脉血做血常规检查历史比我们长，因此发现这种问题较多、较早，发现问题和经验都较多。我国近几年才逐步推广采用静脉血做血常规检查，其中的一些问题还未注意到。例如此类问题，应该按照有关血液常规检查的基本要求，对红细胞、白细胞、血小板任何一项数值或直方图出现异常或有异常提示的标本实行推片检查，可避免此类问题发生。
参考文献：
1.戚仁铎主编：《诊断学》第四版，人民卫生出版社，P351，
2.John.V. Dacie and S.M. Lewis: Practical Heamatology,6th edition, P82
3.Christopoulos CG,Machin SJ. A new type of pseudothrombocytopenia:EDTA-mediated agglutination of platelets bearing Fab fragments of a chimaeric antibody. Br J Haematol 1994,87(3),650-652
4. Bizzaro N, Brandalise M. EDTA-dependent pseudothrombocytopenia. Association with antiplatelet and antiphospholipid antibodies. Am J Clin Pathol 1995 ;103(1):103-107
5. Wilkes NJ, Smith NA, Mallett SV. Anticoagulant-induced pseudothrombocytopenia in a patient presenting for coronary artery bypass grafting. Br J Anaesth 2000 ;84(5):640-2
6. Bragnani G, Bianconcini G, Brogna R, Zoli G. Pseudothrombocytopenia. Clinical comment on 37 cases. Minerva Med 2001 ;92(1):13-7
讨论议题：
1.请广大血液学工作者及有关专家教授协助解答发生此现象的机理。
2.在日常工作中如何发现这种问题。
