维生素E对4℃贮存红细胞保护作用的实验研究

本课题为山东省科委资助项目(No.961226817) 血液在4℃贮存期间，随着时间的延长，红细胞腺苷三磷酸(ATP)含量降低，微囊形成和磷脂丢失，致使红细胞的活力降低，红细胞膜结构和功能发生改变，输血后红细胞存活率降低^［1］。这些变化与氧化物质对红细胞的氧化损伤有关^［2］。笔者在枸橼酸-枸橼酸钠-葡萄糖(ACD)溶液保存的血液中加入维生素E，观察其抗氧化作用对4℃贮存红细胞的影响，为应用于血液贮存提供依据。 1 材料和方法

1.1 仪器 FG－300型发光光度计(中科院上海植物生理研究所)；721型分光光度计(上海分析仪器三厂)。

1.2 试剂 ATP生物发光测定试剂盒(中科院上海植物生理研究所)；邻甲苯胺(分析纯，上海试剂三厂)；超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒(南京建成生物科技研究所)。

1.3 ACD－B血袋(威海市高分子材料厂)。内含50mlACD溶液。

1.4 维生素E乳剂制备 参考苗林^［3］的维生素E静脉乳剂制备方法经改进。取注射用维生素E经过研磨，12000r/min高速搅拌、GB滤器过滤和流通蒸气灭菌等步骤制成粒径在1μm左右，维生素E含量为2g/L的乳剂。

1.5 血样本 全血采自10名健康献血者，平均年龄28岁，每名采血200ml。

1.6 血样本的保存与处理 以血库技术标准每名献血者采血200ml于含50mlACD溶液的采血袋中，并立即以10ml分别分装于24只无菌的PVC塑料小袋中，取12只分装的血样品，平均分配为维生素E组和对照组，采自10名献血者的血液均作同样处理，分装后剩余的样品用作其它实验。用微量加样器将维生素E组每10ml血液中加入维生素E(2g/L)乳剂20μl，使ACD血液中的维生素E终浓度为40mg/L。然后各组血液均置于(4±2)℃冰箱内保存35d。分别在采血当天，贮存的第7、14、21、28、35天测定各组来自于10个献血者血液样品的红细胞超氧化物歧化酶(SOD)活力、红细胞ATP和血浆游离血红蛋白浓度。

1.7 红细胞ATP测定 参照文献［4］的方法，提取含ATP的上清液为U，按ATP试剂盒说明书的方法配制好ATP标准液和发光素酶系统。取U 0.2ml或不同浓度的ATP标准液0.2ml加至发光反应杯内并置于发光光度计反应暗室中，通过连通管路准确注入0.8ml荧光素酶液，并记录发光强度。以gHb表示，将标准品和U样品所得发光值进行计算得出ATP浓度(μmol/gHb)。

1.8 血浆游离血红蛋白测定^［5］ 取ACD全血离心，取上层血浆0.02ml和血红蛋白标准应用液0.02ml，依次加入2%邻甲苯胺溶液及1%H₂O₂溶液各1.0ml。放置10min，分别加入10%乙酸溶液10ml混合，在435nm进行比色，计算得出血浆游离血红蛋白含量(mg/L)。

1.9 红细胞SOD测定 黄嘌呤氧化酶法(按试剂盒说明书的步骤进行检测)。

1.10 统计学处理 所得数据以平均数±标准差(±s)表示，组间均值差异比较用t检验。

血液在4℃贮存的35d期间，红细胞ATP浓度，血浆游离血红蛋白浓度和红细胞SOD活力的变化情况以及维生素E组与对照组比较结果，见附表。