ABO血型全自动微板检测法可靠性探讨
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2007-1-27 12:57:20
关键词：
ABO血型；血型鉴定；全自动微板检测法 中图分类号 R446 R457.1＋1 本站最近研究开发了ABO血型全自动微板检测法，并对2857名献血者进行ABO血型鉴定，一 次判读准确率达到99.83%。该法的应用大大地降低了实验者的工作强度，避免了人为因素 导致的错判血型，确保了临床输血的安全。笔者着重对该方法的可靠性和干扰因素进行研究 ，结果报告如下。 1 材料和方法
1.1 材料
2857份献血者血液标本（2.5mgEDTANa 2/ml抗凝全血）；Genesis RSP-100型全自动样本处理 系统，SLT自动扫描酶标仪及随机购置的支持软件Soft2000(瑞士TECAN公司产品)；T.S温控 孵育振荡仪（奥地利Anthos公司）；KUBOTA Ks-5000平板式离心机（日本久保田公司）；9 6孔硬质U型板（丹麦）；单克隆抗-A、抗-B血清（长春生物制品研究所）；5% 3 人份 以上混合试剂红细胞（自制）；A2亚型红细胞（Ortho公司产品），经盐水洗涤2次配成5 %的盐水悬液。 1.2 全自动微板检测法（简称微板法）
用96孔U型微量反应板，通过全自 动加样器 处理样本和试剂。正定型中，分别加入标准抗血清30μl和5%样本红细胞30μl，反定型中， 分 别加入样本血浆50μl和5%标准红细胞30μl。经孵育、离心、悬浮和静止，再用自动酶标仪 取 620nm波长对反应板进行扫描、判读，随后在电脑中进行正反定型结果配对比较，确认无误 后，将最终正确结果经站电脑网络与相应献血者资料存放在一起。经多次正交试验 检测和各参数指标间的对比试验，优化得出ABO正反定型检测最终试 验条件为，孵育：3min，500r/min，2level；离心：400g，90s；悬浮：3min，900r/min，3 level；静止：正定型1～2min，反定型5～6min；判读：620nm波长，40点扫描，Tc＞15%为凝 集反应，Tc＜10为非凝集反应，10≤Tc≤15为可疑，需手工法重新鉴定。依据Soft20 00支持软件结构，微凝板经扫描后每孔都可获得一最小透光率（minimum transmission, Tn）和最大透光率(maximum transmission,Tm)，非凝集孔Tm与Tn的差 值 （contrast transmission,Tc）较小，凝集孔Tc值较大；当Tc值超过一特定值时，提示细胞 凝集，结果判为阳性；反之，Tc值较小时表明细胞不凝集，结果判为阴性。根据ABO正反定 型原则［3］，确定其血型。 1.3 试管法，平板法
见文献［3］方法。 2 结果
2.1 方法的可靠性
2.1.1 可重复性 取8份样本，连续进行20次反定型，每次得阳性Tc 值9个，阴性Tc值7个 ，分别算出它们的平均Tc值，然后对20份阳性和阴性的平均Tc值分别进行数理统计，依次得 标准差(s)为2.091、0.295和变异系数(cv)为2.91%、8.03%，均＜10%，说明该试验 具有良好的可重复性。
2.1.2 稳定性 取48份标本，连续进行3次正反定型，每次间隔11 d,显示：正定 型凝集试验中均为4+，无任何变化;而对反定型凝集试验中的Tc值按配对资料的两两比 较进行数理统计，无显著性差别、(t＝0.387，n=62，经查表，t0.05 =2.000,故P＞0.05)。
2.1.3 准确率 通过2857份献血者样品的正反定型，得出正反定型 试验1次判读准确率 为99.83%，证明该试验方法完全可靠。异常结果主要出现在反定型中，其中3份样本为严重 脂血，2份为血型抗体极弱。
2.1.4 敏感性 将单克隆-抗A血型试剂倍比稀释，每种稀释度加样30 μl，再分别加 入5%A型和A2亚型红细胞悬液30μl，按上述3种方法进行操作，分别测得其结果（表1） 。 用B型血浆代替上述单克隆抗-A，加样量改为50μl，其余不变，分别测得其结果（ 表2）。
表1 A和A2亚型红细胞在3种方法中测得单克隆抗-A效价
| 单抗A血型试剂倍比稀释 | 效价 | |||||||||||
| 原液 | 1／2 | 1／4 | 1／8 | 1／16 | 1／32 | 1／64 | 1／128 | 1／256 | 1／512 | |||
| 微板法 | A | 58.5 | 67.6 | 77.2 | 80.5 | 82.6 | 76.7 | 60 . 2 | 26.7 | 17.6 | 5.8 | 256 |
| A2 | 58.7 | 72.4 | 78.9 | 79.8 | 74.2 | 60.1 | 51.4 | 18.0 | 6.7 | 3.1 | 128 | |
| 试管法 | A | 4＋ | 4＋ | 4＋ | 4＋ | 4＋ | 3＋ | 2＋ | ± | － | － | 128 |
| A2 | 4＋ | 4＋ | 4＋ | 3＋ | 3＋ | 1＋ | ± | － | － | － | 64 | |
| 平板法 | A | 4＋ | 4＋ | 4＋ | 4＋ | 3＋ | 2＋ | 1＋ | ± | － | － | 128 |
| A2 | 4＋ | 4＋ | 3＋ | 3＋ | 3＋ | 1＋ | ± | － | － | － | 64 |
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