未经处理的全血或血液成分制剂中含有大量的白细胞,输入病人体内会引起许多副作用,最 常见的如非溶血性发热反应,HLA同种免疫反应以及引起CMV、HTLV-I病毒的传染和GVHD [1]。 以往采用的多种去除白细胞的方法中,以过滤法效果最好,应用最广泛。现在欧、美、日 等国至少有5种以上的滤除白细胞输血器作为商品得到很好的应用,这些滤器的滤材主要 是聚脂纤维做成的无纺布和醋酸纤维做成的片状膜[2],不仅有着很大的比表面 积,而且在成纤维生产过程中添加了精心配制的高分子聚合材料,使纤维制成的无纺布在成 膜状态下临界表面张力明显增大,滤膜浸润性好,血液容易通过。国产的同类聚脂纤维却未 经过特殊处理,成膜状态下临界表面张力低,浸润性差,血液难以通过。为此,笔者利用无 机超细 玻璃纤 维膜具有很高的临界表面张力和很好的浸润性、血液很容易通过的特点,制备玻纤膜滤除 白细胞输血器,过滤库存全血及SAGM红细胞悬液,取得了满意的效果,现报告如下。 1 材料和方法
1.1
玻纤膜滤除白细胞输血器 床边形见图1-1,血库型见图1 -2,滤器过滤膜用无机超细玻 璃纤维制成多孔网状结构膜,由入血口向出血口方向依次排列为粗滤层和精滤层,外壳为普 通塑料件见图1-3。 图1 玻纤膜滤除白细胞输血器示意图 1.2 过滤过程
从4℃冰箱取出全血或SAGM红细胞悬液,充分 混匀,按无菌操作在滤器上端分 别接生理盐水和血袋,先打开盐水通道,排除滤器及管道中的空气,然后过滤。血库型滤器 下端接收集袋,血袋与收集袋位差1米,过滤完毕用约50ml盐水冲洗 滤器,最后封好 袋口, 贴上标签送临床输用。床边型滤器下端接病人静脉,过滤和输血同时进行,输注完毕用约50 ml生理盐水冲洗管道。为了评价滤器的使用性能,笔者用血库型滤器做试验,滤前称重原血 袋,滤后称重收集袋,并从各袋中抽取血样1ml。 1.3 血样实验室检测
检测过滤前/后血样中血红蛋白、血浆游离 血红蛋白、红细胞渗透脆性 、活化部分凝血活酶时间(KPTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原 、总补体溶血活性(CH50)和C3含量,测定均采用标准技术[3]。白细胞计数:过 滤前血样采用标准技术,过滤后血样采用Naggeotte计数和流式细胞仪检测。 1.3.1 Naggeotte计数法[4] 计数池体积50μl, 样品用Turk's液按1∶10稀释(100+900μl) ,血样放置至少2min,混匀,充满计数池,静置至少1min,显微镜 下计数整个区域, 其精确 度为显微镜下所见每个白细胞相当于0.2/μl。 1.3.2 流式细胞仪计数[5] 取未处理全血及过滤后全血各2ml ,3000r/min离心100min,去除血浆保留全部血细胞,然后充分混匀,再各取血样100μl ,放入4%冰醋酸500μl稀释,使红细胞完全溶解,混匀, 再次取100ul(相当于取原血样16.6μl×2),用PBS洗涤白细胞,用PI(propidium iodid e)染色制作1ml混悬液,流式细胞仪(型号FCSA)分别计数。 1.4 滤器理化性能检测
把新鲜蒸馏水灌满滤除白细胞输血器,37℃ 放置24h,再用新鲜蒸馏 水冲洗,收集水浸液250ml,用等离子发射光谱仪(ARL3410型,仪器波长165~800nm, 分辨率0.013nm)检测。按国家标准[6]规定的方法检测pH、还原物质 、重金属、不挥发物、不溶性微粒。 1.5 滤器的生物性能检测
按国家标准[7]规定 的方法检测热原、无菌、急性全身毒性、皮内刺激、皮肤致敏、细胞毒性、溶血等试验。 1.6 玻纤膜截留细胞检查
过滤完血液打开滤器外壳,取出玻纤膜,扫 描电镜观察。 1.7 实验数据计算及数据统计
2 结果
2.1
ACD库存全血和SAGM红细胞悬液经过玻纤膜滤除白 细胞输血器过滤前后的结果 见表1。 流式细胞仪复检显示:未处理血细胞中白细胞总数107900个(相当于3250个/μl),扫描图见图2曲线(1); 过滤后血细胞中白细胞总数160个(相当于4.8个/μl),扫描图见图2曲线(2)。 表1 玻纤膜滤器滤除白细胞效率(n=50)
| | 过滤前 | 过滤后 | 去除率(%) |
| 体积 (ml) | WBC (个/μl) | WBC总数 (×108) | 体积 (ml) | WBC (个/μl) | WBC总数 (×106) |
| ACD全血 | 500 | 3800±1200 | 19.0±6 | 500±20 | 4.2±3.2 | 2.2±2 | 99 |
| SAGM-RC | 380±20 | 5050±1850 | 19.2±8.2 | 420±25 | 5.0±4.2 | 2.1±2 | 99 |
图2 流式细胞仪扫描白细胞中DNA浓度扫描积 分曲线图
2.2 库存ACD全血和SAGM红细胞悬液过滤前后部分实验结果
见表2。玻纤膜滤器红细胞回收率超过90%,红细胞膜保持原有的完整性。 表2 玻纤膜滤器对红细胞的影响(n=30)
| | 过滤前 | 过滤后 | P |
| Hb总量 |
| SAGM-RC(g/2U) | 46±8 | 42±6 | <0.05 |
| ACD全血(g/500ml) | 45±7 | 42±5 | <0.05 |
| 红细胞渗透脆性 |
| >开始溶血 NaCl(mol/L) | 95±6 | 95±6 | >0.05 |
| 完全溶血 NaCl(mol/L) | 54±6 | 54±6 | >0.05 |
| 血浆游离Hb(mg/L) |
| ACD全血血浆 | 7±5.2 | 9.6±5.6 | >0.05 |
| SAGM-RBC上清 | 1.5±0.4 | 1.2±0.3 | >0.05 |