医学检验信息网 检验医学 2007-1-28 12:50:13

关键词： Duffy血型；基因分型；人类学 中图分类号 R457.1^＋1 Q343．1^＋2 20世纪80年代我国已有Duffy血型系统血清学分型研究报告，进入90年代后，分子生物学技术为深入研究血型提供了新方法。1999年3月，笔者对广州地区汉族人群进行了Duffy基因型分型研究，现报告如下。 1 材料与方法 1.1 受检样本 102名无亲缘关系随机人群，汉族，来自广州地区。静脉取血，ACD抗凝，用盐析法提取DNA，A230／A280≥1.70。析出DNA丝保存于－30℃以下备用。 1.2 Duffy血型基因分型试剂 由美国G&T公司提供(美国马利兰州政府批准文号1998，643259)试剂混合液中含有PCR缓冲液，dNTP，特异性的Fy基因引物，内对照引物，以及染料，PCR产物见表1。 表1 Duffy基因分型PCR产物及其检测的基因

混合液标记	PCR产物片段长度（bp）	检测的基因
Duffy-Fya	711	Fya
Duffy-Fyb	711	Fyb

1.3 Duffy基因型分型方法 采用PCR-SSP法。将抽提好的DNA从冰箱中取出溶解，稀释至0.1～0.3μg/μl浓度。取2支0.2ml塑料小试管，标记并分别加入 duffy-Fy^a和Duffy-Fy^b分型试剂8μl，每管各加入1μ1 DNA样品和1 μ1已稀释的DNA Taq酶。混匀并加1滴石蜡油覆盖反应液。在PCR扩增仪(德国Biometra-Ⅱ)95℃5min，95℃30s→58℃30s →73℃90s，共循环30次；72℃延伸5min，降温至4℃，完成扩增。将PCR扩增产物直接点样到2%琼脂糖凝胶上，在0.5×TBE缓冲液条件下，以10v/cm电泳15～20min。电泳后在紫外灯下拍照记录。 2 结果

带有Fy^a基因的个体，与Duffy-Fy^a分型混合液反应出现特异性带；带有Fy^b基因的个体，与Duffy-Fy^b分型混合液反应出现特异性带；同时带有Fy^a和Fy^b的基因的个体，与两种混合反应液都产生711特异性扩增片段；非常罕见的Fy(a-b-）个体，与两种反应液都不产生特异性的PCR扩增片段，而只有429bp的内对照产物(表2)。

表2 广州地区汉族人群Duffy基因型分布

Duffy基因型	观察值(%)	期望值(%)	χ2	基因频率
Fya	91(91.00)	90.25(90.25)	0.0062	Fya＝0.95
Fyb	8(8.00)	9.50(9.50)	0.2368	Fyb＝0.05
Fyab	1(1.00)	0.25(0.25)	2.25
Fy	2*
合计	100	100	2.493	P＞0.25

*试剂盒只针对Fy^a、Fy^b基因设计，故Fy 2例不统计在内

3 讨论

Duffy血型在不同种族中的分布差异甚大，在人类学研究中也是一个有用的工具。1950年发现抗-Fy^a,1951年发现了抗-Fy^b，这是Duffy血型系统中最常见的两个抗体；1955年发现Fy和另一等位基因Fy^x［1］。扩展后的Duffy血型系统包括抗-Fy^a、Fy^b、Fy、和Fy^x等4个基因。

抗-Fy^a和抗-Fy^b都能引起溶血性反应，严重者可死亡。绝大多数的中国人都带有Fy^a基因，但产生抗-Fy^b的可能性不容忽视，因为其抗原不合的机会约为0.117^［2］。

采用DNA技术对Duffy基因型分型，一是检测水平达到基因水平，试剂成本低且易于购到；二是标本不受新鲜或陈旧样品限制，抽提DNA后可长期保存、复查。三是结果易于判定，也便于各实验室质量控制及互相比较。

国内血清学报告未见Fy(a-b-)个体。上述2例标本PCR扩增产物结果观察，内对照正常，而未出现Fy^a和Fy^b特异带，暂判定为Fy(a-b-)。由于其遗传背景不明，尚需进一步做DNA测序分析，故未统计在分布表中。

致谢：血型协作组其他单位成员：重庆市血液中心毛伟，合肥市红十字会中心血站刘忠，成都军区昆明总医院输血科胡宗煌，中国医学科学院输血研究所陈强，大连市红十字血液中心胡荣花，青岛市红十字会中心血站郭一鸣，西安市中心血站刘孟黎，徐州市红十字中心血站孟庆宝。

参考文献

1，赵桐茂.人类血型遗传学.北京：科学出版社；1987，113～115

2，赵桐茂，张工梁.中国人Duffy血型分布.中华血液学杂志，1982，3(1)∶32

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