医学检验信息网 检验医学 2007-1-31 12:16:42

关键词： PCR-SSP；人类血小板抗原；基因分型 摘要 目的：建立人类血小板抗原1～4系统序列特异性引物（PCR-SSP）分型方法。方法：合成14条引物，采用PCR-SSP方法对25名健康献血者的HPA-1～4系统进行基因分型；分型结果与采用等位基因特异性寡核苷酸点杂交（PCR-ASO）获得的结果进行比较。结果：以PCR-SSP方法对HPA 4个系统进行分型均取得了明确、满意的结果，且与PCR-ASO方法获得的结果完全一致。结论：人类血小板抗原PCR-SSP基因分型方法具有简便、快速、准确等优点，具有广泛的应用前景。 中图分类号 Q503 R331.1^＋43 Q343．1 Genotyping of Human Platelet Antigen Systems from 1 Through 4

Lu Zhenyu Liu Dazhuang Bao Yuqin

（Blood Group Reference Laboratory of Shanghai Blood Center）

【Abstract】 Objective:To set up the method of genotypeing the human platelet antigen(HPA)systems from 1 through 4 by sequence-specific primers(PCR-SSP).Methods:14 primers were synthesized so that the human platelet antigen systems from 1 through 4 in 25 healthy blood donors could be genotyped by PCR-SSP method.The reusults of genotyping by PCR-SSP were compared with those obtained by allele-specific oligonucleotide hybridization(PCR-ASO) Results:The results of genotyping the 4 HPA systems by PCR-SSP were definite,satisfied and in complete agreement with those obtained by PCR-ASO method.Conclusion: The PCR-SSP method of genotyping the human platelet antigen has the advantages,such as simplicity,rapidity,accuracy and so on,opening up the broad prospects for its further application.

【Key words】 PCR-SSP;Human platelet antigon;Genotyping

迄今，国际上已报道了9个血小板特异性抗原系统，包括人类血小板抗原(HPA)系统1～8以及 Nak^a抗原^［1～3］。这些抗原都是在血小板输注和怀孕介导的同种免疫过程中被发现的。在现代临床输血工作中，为了能给新生儿同种免疫血小板减少症(NAITP)、输血后紫癜(PTP)以及血小板输注无效(PTR)等患者提供正确、及时的诊断和治疗，对病人和献血者进行血小板特异性抗原的准确分型是重要的。血清学方法是现在最普遍采用的血小板抗原分型方法，但应用一直受到抗血清来源和病人血小板数量的限制。20世纪90年代后，随着分子生物学技术的不断发展和对人类血小板抗原基因结构研究的突破性进展，使血小板基因分型更为简捷准确。笔者采用PCR序列特异引物技术(PCR-SSP)对HPA-1～4这4个比较重要的血小板抗原系统进行了基因分型研究。

1 材料与方法 1.1 样本 25名健康献血者静脉采血0.5ml，ACD抗凝。 1.2 基因组DNA抽提 采用蛋白酶K消化，酚/氯仿抽提DNA。 1.3 引物 DNA序列特异性引物设计参照文献［4，5］方法，一共12条，合成序列见表1。内对照为人类生长激素（HGH）基因特异性引物，序列： HGH-1s 5' TGCCTTCCCAACCATTGCCTTA 3'；HGH-2as 5'CCACTCACGGATTTCTGTTGTGT-TTC 3'；扩增产物长度为434bp。 表1 PCR-SSP引物序列、长度及其确定的特异性

抗原系统	引物	特异性	碱基序列5'-3'	长度(mer)
HPA-1	PIA1	1a	CTTACAGGCCCTGCCTCT	18
PIA2	1b	CTTACAGGCCCTGCCTCC	18
PIAC	common	TGCTTCAGGTCTCTCCCC	18
HPA-2	Koa	2a	CCCCCAGGGCTCCTGAT	17
Kob	2b	CCCCCAGGGCTCCTGAC	17
Koc	common	TTGGAGGAGAAGGGTGTCGAGATT	19
HPA-3	Baka	3a	GGACTGGGGGCTGCCCAT	18
Bakb	3b	CAGGTGGACTGGGGGCTGCCCAG	23
Bakc	common	GAGAGCCTGCTCACTACGAG	20
HPA-4	Pena	4a	CTGGCCACCCAGATGCG	17
Penb	4b	CTGGCCACCCAGATGCA	17
Penc	common	GGTAGAAAGGAGCTATAGTTTGGC	24

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