ABO血型鉴定是常规检查项目之一。本文作者研究开发的全自动加样扫描分析系统测定ABO血型，实现了ABO血型鉴定的标准化和自动化。现将该法介绍如下。 1 材料与方法
1.1
材料 献血者血液标本(2.5 mg EDTA. Na2/ml全血)；Genesis RSP-100型全自动样本处理系统，SLT自动扫描酶标仪及支持软件Soft 2000均为瑞士TECAN公司产品；TS温控孵育振荡仪，奥地利Anthos公司产品；KUBOTA KS-5000平板式离心机，日本久保田公司生产；丹麦产96孔硬质U型板；单克隆抗A、抗B血型试剂，长春生物所生产；自制试剂红细胞。 1.2
方法 用96孔U型微量反应板，通过全自动加样器处理样品和试剂。正定型中，分别加入血型试剂30 μl和5%样品红细胞30 μl。反定型中，分别加入样品血浆50 μl和5%试剂红细胞30 μl。经孵育、离心、悬浮和静止，再使用自动酶标仪采用620 nm波长对反应板进行透光率扫描、判读，随后在电脑中进行正反定型结果自动复核。 依据Soft 2000支持软件结构，微凝板经扫描后每孔都可获得一最小透光率(Tn)和最大透光率(Tm)。非凝集孔Tm与Tn的差值(Tc)较小，凝集孔Tc值较大，当Tc值超过一特定值时，提示细胞凝集，反之，Tc值较小时表明细胞不凝集。 2 实验和结果
2.1
确定红细胞悬液的工作浓度 取10种不同浓度的红细胞悬液，每种浓度加6孔，然后加AB血浆使成非凝集试验；加O型血浆便成凝集试验。经孵育、离心、悬浮、扫描，得每种浓度的平均Tc值(见图1)。 图1
两试验中各种红细胞浓度与Tc值之间的关系 从图1中可见，两条曲线都从5%红细胞浓度以后开始走平，考虑到反定型中弱血型抗体的存在，故选择5%红细胞浓度为最适工作浓度。 2.2 最佳试验条件的确定
2.2.1
孵育条件 孵育条件由时间、振频、加速度三方面决定。将血型试剂稀释成凝集强度呈2+，然后通过三因素三水平的正交试验进行孵育，最终得出每个试验的Tc差值(见表1)。 表1
孵育条件优化正交试验结果
| 时间 (min) | 振频 (r/min) | 加速度 (Level) | 透光率Tc值 |
| 抗A＋A红细胞 | 抗B＋B红细胞 |
| 3 | 400 | 1 | 55.43 | 71.66 |
| 3 | 500 | 2 | 60.77 | 74.05 |
| 3 | 600 | 3 | 54.51 | 63.61 |
| 4 | 400 | 2 | 56.04 | 66.01 |
| 4 | 500 | 3 | 55.60 | 64.46 |
| 4 | 600 | 1 | 54.73 | 55.09 |
| 5 | 400 | 3 | 58.79 | 65.95 |
| 5 | 500 | 1 | 49.27 | 55.27 |
| 5 | 600 | 2 | 56.12 | 60.38 |
从表1中可见，最佳孵育条件为3 min，500 r/min，2 Level。
2.2.2
离心转速 将96孔U型微量板分为二组(各48孔)，一组中加入B型血浆50 μl和5%A型红细胞悬液30 μl，另一组中加入单抗A血型试剂(经1∶64稀释)30 μl和5%A型红细胞悬液30 μl，经孵育、不同转速离心、悬浮、静置、扫描，分别测得两组的平均Tc差值(见表2)。
表2
凝集试验中各种离心转速所对应的Tc值变化
| | 不同离心转速(r/min) |
| 800 | 1 000 | 1 200 | 1 500 | 1 800 | 2 000 |
| B血浆＋A红细胞 | 52.31 | 37.3 | 54.0 | 61.5 | 63.8 | 45.9 |
| 单抗A＋A红细胞 | 5.33 | 9.13 | 5.39 | 22.8 | 8.90 | 16.7 |
从表2可见，最佳离心转速为400 g(1 500 r/min)。
2.2.3
悬浮条件 此条件在选择上首先将要考虑非凝集红细胞需充分悬浮，在此前提下，才能顾及弱凝集反应不至于振频过大时消失。对此，我们将用无凝集反应，经三因素三水平的正交试验对悬浮条件进行优化(见表3)。
表3
悬浮条件优化正交试验结果
| 时间 (min) | 振频 (r/min) | 加速度 (Level) | 透光率Tc值 | 肉眼观察孔底 |
| 抗A ＋A红细胞 | 抗B ＋B红细胞 |
| 2 | 800 | 1 | 13.14 | 21.38 | 基本未悬浮 |
| 2 | 900 | 2 | 4.08 | 3.62 | 少量未悬浮 |
| 2 | 1000 | 3 | 3.68 | 3.64 | 完全悬浮 |
| 3 | 800 | 2 | 4.06 | 3.71 | 少量未悬浮 |
| 3 | 900 | 3 | 4.02 | 3.59 | 完全悬浮 |
| 3 | 1000 | 1 | 4.01 | 3.62 | 完全悬浮 |
| 4 | 800 | 3 | 3.56 | 3.58 | 少量未悬浮 |
| 4 | 900 | 1 | 3.75 | 3.31 | 完全悬浮 |
| 4 | 1000 | 2 | 3.46 | 3.43 | 完全悬浮 |
