三种方法检测低浓度HBsAg的评估
摘自《检验诊断与实验室自动化》2005年9月刊 第26页 （临床检验）
摘 要
目的：评估酶联免疫吸附试验一步法与时间分辨荧光法在检测低浓度HBsAg时的准确性。
方法：用全自动免疫分析（Axsym）法、时间分辨荧光（TRF）法、酶联免疫（EIA）一步法3种方法检测低浓度HBsAg，并相互比较。
结果：TRF与Axsym比较灵敏度100%，特异性97.3%，r=0.953，而EIA一步法灵敏度为64.9%、特异性为94.6%、准确性为76.6%。
结论：Axsym、TRF检测低浓度 HBsAg灵敏度高，稳定性好。采用高灵敏性和高特异性的新方法检测乙肝标志物，有助于HBsAg灰区（0.5-2.0ng/ml）检测的正确性。
关键词：HBsAg；TRF；EIA一步法
本文作者：伏春明 忻鼎广 殷观美
Experimental Evaluation of Three Kinds of Methods in Detecting Low Concentration HbsAg
伏春明 忻鼎广 殷观美
上海建工医院检验科，上海 200083
上海港医院检验科
Chun-ming FU,Ding-guang XIN, Guan-mei YIN. Department of Clinical Laboratory, Shanghai Jiangong Hospital, Shanghai 200083,China
乙型肝炎病毒(HBV)感染是我国最常见的传染性疾病之一，急慢性和隐性感染在人群中约占9%，HBV感染者在不少行业受到限制。因此，乙肝表面抗原（HBsAg）检测的准确性对不少受检者来说至关重要，对国计民生也有影响。由于操作快速简便，目前国内HBsAg检测绝大多数采用酶联免疫吸附试验（EIA）一步法，用该方法检测HBsAg时，当标本含量在临界值附近所谓灰区时就会出现假阴性、假阳性等结果不稳定现象。我们对近年来体检人群和质评标本中，用时间分辨荧光（TRF）法检测到的57例弱阳性定量标本和EIA一步法检测到的37例弱阳性标本，用雅培试剂及Axsym仪、EIA一步法试剂及酶标仪和新波试剂及TRF法进行复测，现报告结果并对其原因作一分析。
一、材料和方法
1、标本
来源于本院体检人群血清及10份室间质评血清，在TRF法检测到的HBsAg57例和EIA一步法检测到的37例弱阳性标本。
2、试剂和仪器
EIA定性一步法试剂盒购于上海科华公司，酶标仪为Lab公司MK3酶标仪。
TRF定量试剂盒购于上海新波公司，AT-2000时间分辨荧光分析仪上海新波公司产品。
雅培试剂盒购于美国Abboutt公司，Axsym全自动免疫分析仪美国Abboutt公司。
以上操作均严格按照仪器和操作说明书进行，标本无黄疸、脂血、溶血现象，并在一星期内测定完毕。
二、结果
1.37例经EIA一步法检测的弱阳性血清, 范围在S/CO≥
2.1～10.2 之间，用三种方法测定其血清HBsAg定性结果见表1。
2.TRF定量检测的57例弱阳性标本，范围在0.5～2ng/ml之间，用三种方法测定其血清HBsAg定性结果见表2。
上述方法HBsAg阳性判断值TRF法为≥0.5ng/ml，Axsym法为S/CO＞2.0，EIA一步法为S/CO≥2.1。从表1、表2数据可以看出TRF方法与Axsym方法测定结果基本一致，而EIA一步法在检测37例弱阳性标本中有2例假阳性，则在57例弱阳性样品中有20例检测出阴性。以Axsym法为标准做统计，则TRF法灵敏度为100%、特异性为97.2%，并与Abbott诊断试剂比较呈较好相关性r=0.953。而EIA一步法灵敏度、特异性和准确性分别为65%、94.6%和76.6%，在HBsAg灰区间二者结果相差很大。
三、讨论：
雅培公司Axsym免疫分析法是目前世界上检测乙肝标志物的金
标准，但由于仪器昂贵、试剂成本较高在我国应用单位很少。目前HBSAg检测方法应用较多的仍是EIA一步法，其主要缺点是：试剂的检测灵敏度低、由检测原理带来的前带现象。虽然EIA一步法在一定程度上解决了临床需求，但面对着人们日益严格的要求则显然存在差距。厂商所称技术上的改进使得其检测灵敏度从2.0ng/ml提高到了0.5ng/ml, 但从我们的实验结果中灰区部分漏检率高达35.1%来看，并没有达到理想要求。EIA一步法检测HBsAg临界值范围的不稳定性，我们认为与一步法检测试剂的灵敏度，试剂不同批号间的差异等因素有关，也和定性方法本身所固有的一些缺陷有关；如试剂盒出厂日期的长短所造成的差异；各实验室恒温水箱、移液器、酶标仪之间的差异；实验人员操作手法间的区别等。甚至加完终止液到酶标仪读测的时间长短也会造成结果的不一致性，因其吸光度会随着时间的延长而降低。这种不稳定性还可以从上海市EIA一步法的HBSAg室内质控CV达25%～28%得到证实[1]。
由于免疫学技术的不断发展，快速简便的化学发光、电化学发光、荧光免疫技术等新一代检测方法的不断推出，以满足定量检测的要求[2]。抗原、抗体检测的灵敏度、特异性明显提高，使低水平HBV感染得以检出，对临床诊断及流行病学调查有着重要意义[3]。
总之，EIA一步法检测HBSAg弱阳性存在许多问题，要排除诸多影响因素是不可能的，已不能满足社会需求。而上述不足之处都可以通过定量法的标准曲线得以解决。
因此，建议逐步取消EIA一步法，尽量采用灵敏度高、稳定性好的定量新方法或EIA二步法作乙肝标志物的检测，以提高检测的灵敏度和特异性，避免假阳性和漏检，降低隐性感染造成的输血途径传播HBV风险度，减少输血安全隐患、体检等引发的纠纷，以确保和提高检测HBSAg的准确性。
参考文献
1.市临检中心2003-2004年HBsAg室内质控统计表
2.、陶其敏 努力规范肝脏疾病的免疫学诊断 中华检验医学杂志，2003，26：69-71
3.王小光、汪萍、陈国强等 上海市闵行区饮食服务人员HbsAg、HbeAg检验结果分析 职业与健康 2005，2：105
