乙肝两对半检测中使用酶联免疫反应加速仪与传统方法的对比
关键词：乙肝两对半 酶联免疫 酶联免疫反应加速仪 快速
四川诺亚医疗科技公司即将于近期推出一种新型医疗器械—-酶联免疫反应加速仪。此仪器可广泛应用于加速酶联免疫反应。它利用免疫反应中抗原、抗体结合部分形状互补、凹腔内氨基酸侧键的位置要有利于产生各种次级键同时有序施加的高频电磁波能促使离子迁移和偶极子转动引起免疫分子振转的原理，从而使酶联免疫反应时间由原来得几十分钟甚至数小时在十分钟内完成，特作介绍。
1、材料与方法
1.1.1酶联免疫反应试剂盒（以下简称试剂盒）：
上海科华生物技术有限公司生产的科华牌“立可读”乙肝两对半检测试剂盒、河南理利生物技术公司生产的理利牌“立可读”乙肝两对半检测试剂盒、深圳月亮湾生物工程有限公司生产的月亮湾牌“立可读”乙肝两对半检测试剂盒、上海荣盛生物技术有限公司生产的荣盛牌“立可读”乙肝两对半检测试剂盒、北京科卫临床诊断试剂厂生产的科卫牌“立可读”乙肝两对半检测试剂盒、北京万泰生物药业有限公司生产的万泰牌“立可读”乙肝两对半检测试剂盒
1.1.2稀释用生理盐水（四川科伦大制药有限公司）
1.2标本来源：
HbsAg纯品：卫生部临检中心提供。随机抽样血清：四川华西医科大学附属第四医院与成都市锦江区人民医院提供43份血清标本。
1.3仪器：
高频免疫反应加速器（四川诺亚医疗科技公司）、96孔全自动酶标仪（Labsystems Multiskan）、37℃恒温水浴箱（苏州医疗仪器厂）、微量振摇器（姜堰市电子仪器厂）。
另：50-100微升加样枪数只。
1.4方法：
1.4.1使用上海科华生物技术有限公司生产的科华牌“立可读”乙肝两对半检测试剂盒。具体操作方法按《全国临床检验操作规程》及试剂盒使用说明书进行。不同处为：使用高频免疫反应加速器（以下简称快速法）第一步抚育7分钟、第二步抚育3分钟。使用37℃恒温水浴箱（以下简称传统法）第一步抚育30分钟、第二步抚育15分钟。
1.4.2线性试验：
待测样本浓度为卫生部临检中心提供高值HbsAg纯品（大于10000ng/ml），使用两种分别使用仪器后对HbsAg测定线性结果比较
|
含量 |
1/1000 |
5/1000 |
1/100 |
1/20 |
1/10 |
1/4 |
1/2 |
1 |
|
A1 |
0.22 |
0.42 |
0.72 |
1.90 |
2.26 |
2.60 |
3.14 |
3.14 |
|
A2 |
0.24 |
0.44 |
0.83 |
2.06 |
2.27 |
3.14 |
3.14 |
3.14 |
r1=0.9976 , 线性范围 10~500ng/ml
r2=0.9987 , 线性范围 5~500ng/ml
注： A1：快速法检测后的吸光度 A2：传统法检测后的吸光度
1.4.3重现性试验：
使用上海科华生物技术有限公司生产的科华牌“立可读”乙肝两对半检测试剂盒，利用阳性对照血清及卫生部临检中心提供的HbsAg质控血清进行批内及批间重现性比较，批内重现性及批间重现性重复次数均为14次，批内重现性（n=14）
| 样本编号 | 1# | 2# | 3# | 4# |
| 平均吸光度±S | 2.458±0.14 | 0.210±0.021 | 1.915±0.18 | 0 |
| RSD（%） | 4.24 | 9.79 | 7.76 | 0 |
注：1#、2#、、3#均为HbsAg阳性血清 4# 为正常人血清
批间重现性（n=14）
| 样 本 | 阳性对照 | 1ng/ml | 5ng/ml | 阴性样本 |
| 本法 （A） | 2.49±0.25 | 0.204±0.018 | 0.74±0.058 | 0.00±0.01 |
| RSD （%） | 9.8 | 9.1 | 6.0 | 50 |
| 常规法 ( A ) | 2.56±0.30 | 0.25±0.012 | 0.93±0.058 | 0.01±0.017 |
| RSD （%） | 11.61 | 7.53 | 6.18 | 173 |
1.4.4临界值试验
使用上海科华生物技术有限公司生产的科华牌“立可读”乙肝两对半检测试剂盒分别对卫生部临检中心提供的：HbsAg0.5ng、HbsAb、HbeAg、HbeAb、HBcAb质控血清进行两种仪器实验，测试结果如下：
|
|
HbsAg （1ng） |
HbsAb （10miu） |
HbeAg （2ncu） |
HbeAb （4ncu） |
HBcAb （2ncu） |
|
快速法 |
0.13 |
0.10 |
2.25 |
0.16 |
0.02 |
|
传统法 |
0.19 |
0.14 |
2.26 |
0.19 |
0.12 |
1.4.5临床验证
使用上海科华生物技术有限公司生产的科华牌“立可读”乙肝两对半检测试剂盒分别对43份血清标本进行乙肝两对半检测结果如下：
 |
传统法 |
快速法 |
符合率（%） |
|
HBsAg阳性百分率（％） |
20.93 |
20.93 |
100 |
|
HBsAb阳性百分率（％） |
36.59 |
36.59 |
100 |
|
HBeAg阳性百分率（％） |
4.65 |
4.65 |
100 |
|
HBeAb阳性百分率（％） |
44.19 |
44.19 |
100 |
|
HBcAb阳性百分率（％） |
41.86 |
41.86 |
100 |
（1）表面抗原测试：传统法阳性数9例，快速法阳性数9例
（2）表面抗体测试：传统法阳性数15例，快速法阳性数15例
（3）E抗原测试：传统法阳性数2例，快速法阳性数2例
（4）E抗体测试：传统法阳性数19例，快速法阳性数19例
（5）核心抗体测试：传统法阳性数18例，快速法阳性数18例
结论： 使用两种方法二者反应结果一致，而使用快速法的效率更高。
1.4.6不同厂家试剂盒对HBsAg测定结果比较
 |
1# |
2# |
3# |
4# |
| 上海科华生物技术有限公司 |
2.73 |
0.24 |
0.84 |
0.00 |
| 深圳月亮湾生物工程有限公司 |
1.90 |
0.15 |
0.66 |
0.01 |
| 河南理利生物技术公司 |
2.85 |
0.15 |
0.72 |
0.02 |
| 上海荣盛生物技术有限公司 |
2.54 |
0.19 |
0.70 |
0.02 |
| 北京科卫临床诊断试剂厂 |
2.28 |
0.23 |
0.81 |
0.04 |
| 北京万泰生物药业有限公司 |
2.44 |
0.20 |
0.77 |
0.00 |
注： 1#阳性对照原液， 2# 1ng/ml质控血清，3# 5ng/ml质控血清，4#阴性对照原液
讨论：
由上述实验结果可以看出，使用与酶联免疫反应加速仪可比使用传统水浴箱大幅缩短乙肝两对半的检验时间（由以前的45-90分钟缩短为10分钟），同时其线性更佳，特异性、灵敏度和重现性与传统方法相比无明显变化。比之目前较流行的乙肝两对半快速检测试纸（金标法）有更高的准确性和特异性。因此酶联免疫反应加速仪对临床正确、快速诊断有很大的积极的意义。
参考文献：
1、 叶应妩、王毓三主编，全国临床检验操作规程，第二版南京：东南大学出版社，1997。
2、 朱忠勇主编，实用医学检验学，北京：人民军医出版社。1992
