血清HBVDNA水平的变化与慢性乙型活动性肝炎的关系

余晓林，程鹏远，刘红，陈万平，朱华锋   第四军医大学学报 2005 年 9 月 第 25 卷 第 18 期

    【摘要】 目的： 研究慢性肝炎患者HBVDNA水平与病情变化的关系. 方法： 采用荧光标记定量PCR的方法，测定慢性乙型肝炎急性发作患者（HBeAg阳性45例，抗HBe阳性30例）其活动期和恢复期的血清HBVDNA含量. 结果： HBeAg阳性组血清HBVDNA含量（Logarrithm copy/mL）在活动期显著高于恢复期［(10.2±1.6) vs (5.3±2.1), P<0.05］，抗HBe阳性组血清HBVDNA含量（Logarrithm copy/mL）在活动期显著高于恢复期［(7.6±1.3) vs (4.0±2.0), P<0.05］. 另外，活动期血清HBVDNA含量（Logarrithm copy/mL）在HBeAg阳性组显著高于抗HBe阳性组［（10.2±1.6) vs (7.6±1.3), P<0.05］. 血清HBVDNA水平与丙氨酸转氨酶（ALT）、门冬氨酸转氨酶（AST）及总胆红素（TBLLI）之间无相关性. 结论： HBVDNA复制水平与慢性乙型病毒性肝炎的活动密切相关.
 
【关键词】 肝炎，乙型；DNA复制；聚合酶链反应

0引言

在慢性乙型病毒性肝炎的自然转归过程中，病情因多种因素而难以稳定，常反复活动. 病情反复活动是慢性乙型病毒性肝炎病程中常见和重要的特征. 既往对慢性乙型病毒性肝炎患者的血清和生化等研究揭示了乙型肝炎病毒（HBV）复制与病情再活动之间的密切关系［1-4］，HBVDNA是乙型肝炎病毒复制最可靠的实验室指标. 我们采用荧光标记（AmpliSensor）方法，测定一组急性自发性的慢性乙型病毒性肝炎患者病情活动时和恢复期的血清HBVDNA含量，了解HBV复制水平与病情活动的关系，为进一步研究慢性乙型病毒性肝炎反复活动的机制奠定基础.

1对象和方法

1．1对象

全部病例来自第四军医大学门诊部，共75（男50，女25）例，平均年龄36.6±10.2（20～71）岁. 按照199505北京第5次全国传染病寄生虫病学术会议病毒性肝炎防治方案（试行）［5］诊断为慢性乙型病毒性肝炎，其中HBeAg阳性45例；抗－HBe阳性30例. 血清ALT增高2倍以上，大多数患者有2次以上的发作，且伴有不同程度的自觉症状. 患者无大量饮酒（酒精量>50 g/d）. 病情活动期患者卧床休息，给予一般的保肝治疗. 未使用过免疫抑制剂、抗病毒及抗肿瘤等药物. 全部患者抗HBsAg阳性，其它类型肝炎病毒感染标志物均阴性. 全部病例进行肝脏、胆囊、脾脏及胰腺的B超检查. 收集该组患者急性活动期和恢复期的血清. 5例健康献血员（甲、乙、丙、戊和庚型肝炎病毒标志物皆阴性）的血清作为阴性对照. 血清标本储于-30℃冰箱中备测.

1．2方法

采用美国Biotronic公司建立的荧光标记方法进行血清HBVDNA的定量检测［6］. 该方法采用巢式PCR通过荧光素标记的引物在扩增中能量的转换而检测初始HBVDNA模板数. 检测的灵敏度为500 copy/mL.
 
统计学处理： 实验数据以x±s表示，采用t检验和简单相关分析方法，所有统计学分析在SPSS10.0软件下完成.

2结果

2．1慢性乙型病毒型肝炎急性活动期与恢复期血清HBVDNA含量75例慢性乙型病毒性肝炎患者，HBeAg阳性组血清HBVDNA含量（Logarrithm copy/mL）在活动期显著高于恢复期［(10.2±1.6) vs (5.3±2.1), P<0.05］，抗HBe阳性组血清HBVDNA含量（Logarrithm copy/mL）在活动期显著高于恢复期 ［(7.6±1.3) vs (4.0±2.0), P<0.05］. 另外，活动期血清HBVDNA含量（Logarrithm copy/mL）在HBeAg阳性组显著高于抗HBe阳性组［（10.2±1.6) vs (7.6±1.3), P<0.05］，而在恢复期两者无显著性差异［（5.3±2.1) vs (4.0±2.0), P>0.05］. HBeAg阳性组中9例患者（占20.0%）及抗HBe阳性组中7例患者（占23.3%）中血清HBVDNA含量在恢复期无明显变化.

2．2血清HBVDNA含量与肝功能部分指标的关系全部患者肝炎急性活动时血清HBVDNA含量与血清ALT, AST及TBLLI之间无数量上的统计学相关.

2．35例献血员对照组检测全部献血员的血清HBVDNA为阴性.

3讨论

有研究人员认为，慢性乙型病毒性肝炎自发性再活动，与HBV复制有关［4］. 但也有不同的观点，Khakoo等［7］报道，在许多高水平病毒血症的患者并没有血清ALT升高. 本研究测定了CHB患者活动期和恢复期的血清HBVDNA含量，结果无论是HBeAg阳性组还是在抗HBe阳性组，发作期均显著高于恢复期（P<0.05）. 两组病例的血清HBVDNA含量均随肝功能的恢复而下降. 抗HBe阳性慢性乙型病毒性肝炎是由HBV前C区基因突变株感染引起，在我国抗HBe阳性反复复发的慢性肝炎和慢性重性肝炎极为常见. 无论是HBV野生株还是变异株感染，HBV复制水平与慢性肝炎的再活动密切相关. 提示，CHB患者由于某些不明诱因（如感染等），HBV开始大量复制，启动了机体的免疫反应，结果导致肝脏的损伤，临床上出现急性再活动. 血清和细胞中增加的病毒复制和病毒抗原的累积及继发的免疫反应在慢性乙型病毒性肝炎肝损害的急性发作中具有重要意义［5］.
 
研究中还发现HBeAg阳性组中的9例患者及抗HBe阳性组的7例患者，其血清HBVDNA并没有向大多数病例所显示的那种模式，血清HBVDNA水平在恢复期与活动期相比无显著变化或反而升高. 因为乙肝病毒导致人体肝细胞损伤主要是通过复杂的免疫机制介导造成的免疫损伤，而非乙肝病毒直接损害肝细胞. 乙肝病炎的轻重与HBeAg阳性与否、血液中乙肝病毒含量的多少无明显的直接关系，提示慢性乙型病毒性肝炎发病机制的复杂性. 有研究认为转氨酶越高、黄疸越深是肝细胞破坏较多、肝损害严重和病情越重的表现，并不能表示患者体内病毒复制的活跃程度. 因为乙型肝炎患者肝细胞在遭到破坏的同时，乙肝病毒亦同时被清除［8］.

我们未发现血清HBVDNA含量与血清ALT, AST和TBLLI等肝功能指标有数量上的相关联系. HBV不直接致肝脏损害，须经宿主的免疫应答，一般认为是肝细胞损伤程度的决定性因素. 而机体的免疫反应和肝细胞的凋亡是一系列的体液和细胞免疫介导的反应所决定. 这些反应受许多因素影响，如宿主基因的异质性、病毒免疫反应的能力等，有待进一步研究.

【参考文献】

［1］  Raj V. Treatment of hepatitis B［J］. Clin Cornerstone, 2001; 3(6):24-36.

［2］  Juszczyk J. Clinical course and consequences of hepatitis B infetion［J］. Vaccine, 2000;18 (Suppl 1): S71-S74.

［3］  Ciocca M. Clinical course and consequences of hepatitis B infetion［J］. Vaccine, 2000; 18 (Suppl 1):S23-S25.

［4］  Lai CL, Yuen MF. Profound suppression of hepatitis B virus replication with lamivudine［J］. J Med Virol, 2000;61(3):367-373.

［5］  病毒性肝炎防治方案（试行）［J］. 中华传染病杂志, 1995;13(4):241.

［6］  Chen S, Yee A, Giffiths M, et al. A rapid, sensitive and automated method for detetion of Salmonlla species in foods using AG9600 AmpliSensor Aanlyzer［J］. J Appl Microbiol, 1997;83(3):314.

［7］  Khakoo SI, Soni  PN, Brown D, et al. A clinical evaluation of a new method for HBV DNA quantitation in patients with chronic hepatitis B［J］. J  Med Virol, 1996;50(3):112.

［8］  Zhou P, Cai Q, Guan J, et al. Relationshio between the concentration of HBV DNA and liver damage in serum of the patients of chronic hepatitis B［J］. J Gastroenterol  Hepatol, 2001; 16(Suppl): A302.

作者简介：余晓林(1962)，男（汉族），重庆市人. 学士，主治医师，讲师. Tel. (029)83373717Email.liuhong@fmmu.edu.cn

（第四军医大学： 1校直门诊部， 2西京医院血液科，陕西 西安 710033）