医学检验信息网 检验医学 2007-1-30 14:08:40

血小板在人体血栓与止血中发挥重要作用，活化后其膜上表达CD62p及活化糖蛋白Ⅱb/Ⅲa（GPⅡb/Ⅲa），实验室通常通过检测这两项指标来评价血小板的活化状态。真空采血管的“死腔”即采集完样本后试管中未被填满的空间, 死腔的存在有可能导致血小板的活化，进而影响活化血小板CD62p和 GPⅡb/Ⅲa的测定结果，本文将就这一问题进行探讨。

1 材料与方法

1.1 仪器：流式细胞仪（型号FACSort Calibur, 美国Becton Dickion公司）

1.2 真空采血管：含量0.5mL的3.2%枸橼酸钠真空采血管(美国进口，硅化内壁，试管容量5mL，加入4.5mL血液后管内完全充满5mL标本,为符合NCCLS的国际标准的凝血试验真空采血管，下称“无死腔”的真空采血管)；含0.2mL3.2%枸橼酸钠真空采血管(奥地利进口，硅化内壁，试管容量4mL,血液被加入后,管内仍有2mL的空间未被填满,下简称“有死腔”的真空采血管)。

1.3 试剂：

1.3.1 荧光标记的抗血小板糖蛋白抗体（美国Becton Dickion公司提供）： 异硫氰标记的抗血小板GPⅡb/Ⅲa上纤维蛋白原结合位点抗体：PAC-1 FITC；藻红素标记的抗血小板GMP140抗体：CD62p PE；多甲藻素-叶绿素标记的抗血小板GPⅡb/Ⅲa抗体：CD61 PerCP；藻红素标记的鼠IgG：MIgG PE。

1.3.2 20μM血小板激活剂ADP（美国biopool公司）

1.4 方法

1.4.1 标本采集：由解放军总医院随机选取的根据WHO制定的诊断标准（1979年）诊断的急性心肌梗塞患者15例。采用真空采血技术，同时在同一患者肘部静脉取血，弃去第一管标本，取4.5mL血液加入“无死腔”的真空采血管及取血1.8mL加入“有死腔”的真空采血管。350×g离心10分钟，取上层75%的富血小板血浆。用乏血小板血浆调整富血小板血浆血小板浓度为3×106/μl。

1.4.2 血小板激活：在450μl富血小板血浆内加入一定浓度的激活剂，轻轻摇匀；室温孵育5分钟。

1.4.3 染色

1.4.3.1 在对照管中加入PE同型对照、CD61 PerCP、PAC-1各20μl，RGDS加10μl；在试验管中加入三种抗体各20μl。见表1。在对照管和试验管中各加入激活的标本5μl。

表1 对照管与试验管加入试剂种类

荧光抗体	FITC	PE	PerCP
对照管	PAC-1+RGDS	IgG1	CD61
试验管	PAC-1	CD62P	CD61

1.4.3.2 轻轻混匀，室温暗处孵育15～20分钟。各管中加入1ml冷的固定液1%多聚甲醛溶液 (2～8℃)，充分混匀，2～8℃阴暗处放置30分钟。

1.4.4 上机分析：运行FACSComp，校正仪器。打开CellQuest，调出获取条件， 在PAC-1-FITC和CD62p-PE的直方图中获取血小板PAC-1和CD62p的表达。以PAC-1阳性血小板、CD62p阳性的血小板占总血小板的百分率来表达结果。

2 结果

15例病人标本的PAC-1阳性血小板、CD62p阳性的血小板百分率如表2所示：

表2 两种采血管采集的标本，表达CD62p或PAC-1阳性的活化血小板百分率比较
标本编号	无死腔采血管	有死腔采血管
	PAC-1	CD62p	PAC-1	CD62p
1	82.00	71.75	83.66	71.83
2	67.42	70.61	69.80	73.97
3	80.53	75.80	89.56	75.87
4	86.79	70.19	89.72	76.51
5	64.10	70.58	85.90	80.48
6	57.16	42.47	62.29	44.65
7	68.24	50.12	86.80	73.22
8	55.86	56.51	73.63	60.06
9	53.84	39.54	60.28	45.14
10	70.23	68.59	85.45	78.65
11	72.15	68.33	87.28	82.55
12	84.12	70.15	89.68	84.26
13	59.17	54.13	69.24	67.74
14	68.28	62.05	72.39	68.95
15	66.86	60.11	70.86	67.28

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