精浆蛋白质电泳分析的两种方法探讨

蛋白质不仅是多种致病因子对机体作用最重要的靶分子，也是疾病诊断的重要标志分子和大多数药物的靶标乃至直接的药物，精液中某些蛋白质的改变可能成为男性不育的重要原因以及诊断不育的重要标志分子。现在临床对于精液检测均按WHO标准^[1]将异常原因大致分为：液化时间延长、精子数目减少、精子畸形率增高、精子运动能力降低、精子受精能力降低、果糖、酸性磷酸酶异常等。以上可看到这些指标忽略了蛋白质检测的重要性，其相关检测指标较少，不能全面地评价精液的质量。相当一部分不育患者在以上指标上没有明显的异常，给明确诊断和合理治疗带来困难。国内外已对精液中的蛋白质进行了大量的研究，但这些研究成果应用于临床还有相当的工作要做。

精液由两部分组成：精浆和精子，精浆占射出精液体积的95%，含有精液全部蛋白的85%^[2]，是附睾、输精管壶腹、尿道球腺、前列腺、精囊腺和尿道腺多种腺体分泌液的混合液。因此，分析精液的蛋白质特征重点在于分析精浆的蛋白质，充分认识精浆中的蛋白质特征，将对男性不育的原因有深刻地阐明。

本实验拟利用自动化电泳技术，对正常和常见不育男性精浆进行分离，建立精浆蛋白质的特征电泳图谱，并进行对比分析，以期探索出适用于临床常规开展的精浆蛋白质分析方法。

一、材料

1．标本来源：收集我院2003年2月至6月在门诊以不育就诊的男性精液标本101份，平均年龄28.6岁。按WHO标准进行常规和特殊检测后，按结果分类。其中无精者9份、少弱精者5份、弱畸精者19份、弱精者22份、畸精者5份、无精并液化异常者4份、少弱精并液化异常者2份、弱精并液化异常者3份、液化异常者4份，其余28份常规和特殊检测无明显异常。精液标本用90%和45%的Percoll进行处理，分离获取精浆，-70℃冻存。

2．仪器与试剂：仪器采用Sebia公司的自动化电泳仪。琼脂糖凝胶电泳试剂为：Sebia产品化8g/L琼脂糖凝胶、pH9.2±0.1Tris-巴比妥半干式缓冲条、0.1%冰醋酸脱色液、pH8.8±0.3枸橼酸钠洗液、4g/L氨基黑（含10％乙酸）或2g/L结晶紫（含10％乙酸）、质控血清。SDS(十二烷基硫酸钠)-琼脂糖凝胶电泳试剂为：Sebia产品化50g/L琼脂糖凝胶（含SDS）、pH6.9±0.1中性缓冲液(含SDS1.0g/L)、pH7.0±0.3样本稀释液(含SDS、溴酚兰)、15％甘油溶液、已知分子量的标准蛋白质混合物(免疫球蛋白G分子量为160Kd，白蛋白分子量为68kD，溶菌酶分子量为18kD)，其它试剂同琼脂糖凝胶电泳。

二、方法

1．精液常规及特殊检查：禁欲48小时后（不长于7天）留取精液标本。按WHO的标准（1999）常规检测其凝集度、粘稠度、液化时间、精子数量、存活率、畸形率、活动度、果糖、酸性磷酸酶以及白细胞情况。按常规及特殊检查结果将标本分类。