PCR银染法检测胃粘膜活检组织端粒酶活性

近几年研究表明端粒酶与肿瘤的发生发展关系密切，推测可能是一个广泛的肿瘤标志物。有关端粒酶在胃肿瘤切除组织中的表达研究已见报道。但对胃粘膜胃镜活检组织中端粒酶活性的检测国内外报道甚少。本文应用PCR银染法检测胃粘膜活检组织中端粒酶活性，探讨其临床意义。

1.1组织来源：80例组织标本为本院消化血液科电镜室，于1998年8月至1999年10月间所采取胃粘膜活检组织。每例取可疑胃粘膜组织2份，周边正常组织2份。-80℃冻存一份，送病理一份。据病理报告胃癌24例，慢性浅表性胃炎8例，慢性萎缩性胃炎32例，肠上皮化生7例，胃溃疡9例。

1.2试剂组成(北京鼎国生物工程公司产品)buffer A，buffer B， PCR液 ，Tap酶，CX引物。

1.3端粒酶提取 组织样品50mg，液氮研磨，加入lml buffer A，混匀，4℃放置15min．12000g，4℃离心5分钟，弃上清，沉淀加入100-200ulbuffer B，混匀，4℃放置30min其间振动数次。12000g，4℃离心15分钟，留上清，取上清2ul加入20ulPCR反应液中，混匀，20℃保存30min．

1.4 PCR扩增 取上述PCR反应管，置90℃保温30min。加入1u1CX引物，1u1Taq酶，2滴液体石腊，离心数秒。90℃45秒，50℃45秒，72℃60秒，35个循环。扩增仪为TM-40(美国)。

1.5产物检测 取15ulPCR扩增产物，进行8％聚丙酰胺电泳，银染观察结果。

1.6统计学分析 X＾2检验

胃粘膜活检组织端粒酶活性检测结果见表1

表1 80例胃粘膜组织端粒酶活性阳性检测结果

例数 端粒酶阳性(％)