目的：
探讨服用抗血小板药物后血小板微粒膜蛋白的动态变化，为心血管疾病的抗血小板治疗的疗效观察提供新的手段。
方法：
心肌梗塞病人9例，口服抵克利得，每次250mg，第一、二天每天2次，以后每天一次，持续服药6天。在服药前、服药后4d、服药后5d、服药6d、停药后3d、停药后4d收集标本，以20μM ADP为血小板激活剂，激活血小板，分析其血小板微粒表达PAC-1和CD62p的变化。
结果：
服药前、服药后4d、服药后5d、服药6d、停药后3d、停药后4d CD62p
+PMP的百分率分别为84.3%±3.6%、81.4%±3.4%、70.3%±2.7%、70.6%±3.2%、83.5%±2.8%、85.4%±2.1%，PAC-1
+PMP的百分率分别为85.3%±3.5%、82.5%±2.2%、72.3%±3.5%、72.4%±3.3%、85.4±3.4%、86.0±3.8%。服药后4d CD62p
+PMP、PAC-1
+PMP的百分率有所降低，但t检验无显著性；服药后5d显著性降低（P<0.001），停药后3d基本恢复。同一时间点，CD62p
+PMP、PAC-1
+PMP的百分率无显著性差异。
结论：
在心肌梗塞病人服用抵克利得这一抗血小板药物的的不同时相，血小板微粒膜上的CD62p、PAC-1表达呈现一定规律的变化，检测血小板微粒膜蛋白有助于抗血小板药物疗效观察。
关键词
血小板 微粒 流式细胞术 CD62p PAC-1 Ticlid
抵克利得为心血管疾病中常用的抗血小板药，其抗血小板的主要机理为拮抗血小板膜上的ADP受体。血小板微粒（Platelet Microparticle, PMP）是血小板在活化过程中释放的一种超微膜性囊泡。我们对心肌梗塞病人服用抵克利得后的血小板微粒膜蛋白进行检测，旨在为心血管疾病的抗血小板治疗的疗效观察提供新的手段。
材料与方法
1.材料
1.1 仪器：流式细胞仪（型号FACSort Calibur, 美国Becton Dickion公司）1.2 试剂1.2.1 荧光标记的抗血小板糖蛋白抗体（美国Becton Dickion公司提供）：异硫氰标记的抗血小板GPⅡb/Ⅲa上纤维蛋白原结合位点抗体（PAC-1 FITC）、藻红素标记的抗血小板GMP140抗体（CD62p PE）、多甲藻素-叶绿素标记的抗血小板GPⅡb/Ⅲa抗体（CD41a PerCP）、藻红素标记的鼠IgG（MIgG PE）。1.2.2 血小板激活剂（美国biopool公司）：20μM ADP。
2.方法
2.1 标本采集2.1.1 标本来源：根据WHO制定的诊断标准（1979年）诊断的9例心肌梗塞病人（平均年龄54岁，均为男性），口服抵克利得，每次250mg，第一、二天每天2次，以后每天一次，持续服药6天。在服药前、服药后4d、服药后5d、服药后6d、停药后3d、停药后4d收集标本。2.1.2 抽取标本来源者静脉血2ml（0.109M枸橼酸钠溶液1:9抗凝）。350×g离心10分钟，取上层75%的富血小板血浆。用乏血小板血浆调整富血小板血浆血小板浓度为3×10
6/μl。2.2 血小板激活：在450μl富血小板血浆内加入一定浓度的激活剂，轻轻摇匀；室温孵育5分钟。2.3 染色2.3.1 流式细胞仪专用试管编号；2.3.2 在对照管中加入PE同型对照、CD41a PerCP、PAC-1各20μl，RGDS加10μl；在试验管中加入三种抗体各20μl。见表1。
表1 对照管与试验管加入试剂种类
| 荧光抗体 | FITC | PE | PerCP |
| 对照管 | PAC-1+RGDS | IgG1 | CD41a |
| 试验管 | PAC-1 | CD62P | CD41a |
2.3.3 在对照管和试验管中各加入激活的标本5μl。 2.3.4 轻轻混匀，室温暗处孵育15～20分钟。 2.3.5 各管中加入1ml冷的固定液1%多聚甲醛溶液 (2～8℃)，充分混匀，2～8℃阴暗处放置30分钟。 2.4 上机分析 2.4.1 运行FACSComp，校正仪器。 2.4.2 打开CellQuest，调出获取条件，根据血小板微粒比血小板体积小且CD41a
+, 在FSC和CD41a PerCP的直方图上选血小板微粒。 2.4.3 在PAC-1-FITC和CD62p-PE的直方图中获取血小板微粒PAC-1和CD62p的表达。 2.4.4 结果表达：以PAC-1阳性血小板微粒、CD62p阳性的血小板微粒占总血小板微粒的百分率来表达结果。
结 果
9例心肌梗塞病人口服抵克利得后不同时相的血小板微粒上CD62p、PAC-1表达的动态变化如表1所示。
表1 心肌梗塞病人口服抵克利得后表达CD62p、PAC-1血小板微粒的百分率
| 时 间 | CD62p+PMP(%) | PAC-1+PMP(%) |
| 服药前 | 84.3±7.2 | 85.3±7.0 |
| 服药后4d | 81.4±6.8 | 82.5±4.4 |
| 服药后5d | 70.3±5.4 | 72.3±7.0 |
| 服药后6d | 70.6±6.4 | 72.4±6.6 |
| 停药后3d | 83.5±5.6 | 85.4±6.8 |
| 停药后4d | 85.4±4.2 | 86.0±7.2 |
