血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）测定-（检验SOP文件）
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***市第一医院
生化室管理操作规范文件
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责任部门:检验科
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注：本规程每2年复审一次
血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）测定
（SOP文件）
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***市第一医院
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责任部门：检验科
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1.原理 ：
在ALT速率法测定中酶偶联反应式为：
ALT
L-丙氨酸 + α-酮戊二酸 ————> 丙酮酸 + L-谷氨酸
LDH
丙酮酸 + NADH + H+ ————> L-乳酸 + NAD+ + H2O
上述偶联反应中,NADH的氧化速率与标本中酶活性呈正比,在340nm 波长处,NADH 呈现特征性吸收峰,而NAD则没有。因此，可在340nm监测吸光度的下降速率（-⊿A/min），计算出ALT的活力单位。本 实验室采用双试剂法，即血清与（缺少α-酮戊二酸的）底物溶液混合，37℃保温5分钟，使样品中所含的α-酮酸（如丙酮酸）引起 的副反应进行完毕。然后，加入α-酮戊二酸启动ALT的催化反应，在波长340nm处连续监测吸光度下降速率。根据线性反应期吸 光度下降速率（-⊿A/min），计算出ALT活力单位。
2.标本采集与处理
2.1受检者(体检对象或患者)的准备:采血前不一定空腹,对于体检对象采血前应有2周时间保持平时的饮食习惯，近期内体重稳定 、无急性病、外伤、手术等意外情况。饮酒是导致ALT升高的重要原因，因此不饮酒3天后采集血样。乳糜血可影响ALT测定，因此 采血前24小时内不可高脂饮食。睡眠不好会导致ALT升高，采血前注意休息好。注意有无应用影响ALT测定的药物，如 氯丙嗪奎宁、异菸肼、庆大毒素、氨芐青毒素等，检验前应根据所用药物的特性停止用药数天或数周，否则应记录用药请情况。应嘱体检对象在抽血前24小时内不作剧烈运动。
2.2 静脉采血：除非卧床患者，一般采取坐位。立位采血比卧位采血所测得结果明显升高，故采血前至少应静坐5分钟。一般从肘部静脉采血，使用止血带的时间不能超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
2.3 抗凝剂：我国多用血清作ALT检测，如采用肝素抗凝不影响ALT测定，如果应用EDTA血浆，则应将其结果乘以1.02将与血清标本结果相一致。
2.4标本处理：血标本应尽快送实验室，室温放置30分钟～45分钟后离心分离血清或血浆，上机测定。血清置4℃冰箱一星期，酶 活性无显著变化。血清不宜反复冻融，以免影响酶活性，不推荐冰冻保存ALT测定标本。
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3.试剂：
酶试剂：本实验室使用中生北控生物科技股份有限公司双液体试剂盒，产品注册号为京药监械（准）字2006第2400018号。
3.1主要成分如下：
R1： NADH 0.18mmol/L LDH≧5000U/L
R2: L-丙氨酸 500mmol/L α-酮戊二酸 15mmol/L
3.2 ALT校准品:无校准品,采用理论K值。
3.3试剂稳定性：原装试剂在2～8℃避光保存，有效期12个月。
4.仪器：
日立7170A和7180自动生化分析仪。
5.操作与计算：
参见日立7170ASOP文件、日立7180SOP文件，仪器参数设置见附录一。
6.操作性能:
6.1试剂空白吸光度:在主波长340nm,副波长405nm处,A≥1.0。
6.2准确性：偏差不超过士15%
6.3重复性:变异系数(CV%)≤5%
6.4批间差：随机抽取三批试剂盒的批间差≤10%
6.5线性误差：在0～800U/L（37℃）范围内，不超过士15%。
6.6干扰：乳糜达到300mg/dl时影响小于3%，溶血标本中血红蛋白达到500mg/dl时影响小于10%，黄疸标本中胆 红素达到40mg/dl时影响小于3%，标本中丙酮酸浓度达到1mmol/L时影响小于3%。
7.注意事项：
7.1当⊿A/分大于0.190时，样品用生理盐水稀释后重新测定，结果乘以稀释倍数。
7.2试剂空白吸光度小于1.000时，勿用。
7.3本产品仅用于体外诊断，内含叠氮钠。避免直接接触皮肤和眼睛，切勿吞咽。
7.4本产品应在2～8℃条件下贮存。
7.5宜用血清标本。草酸盐、肝素、枸橼酸盐虽然不抑制酶活性，但可引起反应液轻度混浊。红细胞内ALT含量为血清中3～5倍， 应该避免标本溶血。尿液中含有少量（或没有）ALT，不推荐分析尿液中ALT活性。
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秦皇岛市第一医院
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8.参考范围：
男:≤40U/L 女:≤31U/L
9. 临床意义及医学决定水平
9.1 ALT活性在下列疾病可见增高:肝胆疾病,如传染性肝炎、肝癌、肝硬变活性期、中毒性肝炎、脂肪肝、胆管炎和胆囊炎等。心血管疾 病，如心肌梗塞、心肌炎、心力衰竭时的肝脏淤血、脑出血等。骨骼肌疾病、多发性肌炎、肌营养不良等。一些药物和毒物可引起ALT 活性升高，如氯丙嗪、异菸肼、奎宁、水杨酸制剂及酒精、铅、汞、四氯化碳或有机磷等。
9.2医学决定水平及意义
10.临床危机值
10.1 结果大于1000U/L时，及时复查，经过第二次确认后，由生化室组长报告结果，并和临床医师就该结果进行沟通。
10.参考文献
中华人民共和国卫生部医政司编.全国临床检验操作规程（第二版），南京：东南大学出版社，1997.204
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