消毒技术规范（五）
医学检验信息网
检验医学
2007-2-8 14:19:22
2.1.7 抗（抑）菌试验
2.1.7.1 目的
测定抗（抑）菌产品对细菌和真菌的抗（抑）菌作用。
常使用的方法有抑菌环试验、最小抑制浓度测定试验、滞 留 抑 菌 效 果 测 定 试 验 、洗衣粉抗菌效果测定试验、振荡烧瓶试验、浸渍试验与奎因试验, 可视情况选用。
2.1.7.2 抑菌环试验
2.1.7.2.1 原理
利用抑菌剂不断溶解经琼脂扩散形成不同浓度梯度，以显示其抑菌作用。试验通过抑菌环大小以判断其是否具有抑菌能力。本试验适用于抑菌剂与溶出性抗（抑）菌产品的鉴定。
2.1.7.2.2 试验器材
(1)金黄色葡萄球菌 (ATCC 6538)、大肠杆菌(8099)、白色念珠菌 (ATCC 10231) 菌悬液(见 2.1.1.2)及根据抑菌剂特定用途所用的其他菌悬液。
(2)抑菌剂载体 (5 mm 直径园形新华一号定性滤纸片,经压力蒸汽灭菌处理后，置 120℃ 烤干2h, 保存备用)。
(3)活菌培养计数所需器材(见2.1.1.3)。
(4)微量移液器(5μl～50μl, 可调式)。
(5)游标卡尺。
(6)营养琼脂培养基、胰蛋白胨大豆琼脂培养基与沙堡琼脂培养基
2.1.7.2.3 操作程序
(1)抑菌片的制备:对液体抑菌剂, 取无菌并干燥的滤纸片。每片滴加实际使用浓度抑菌剂溶液 20μl, 然后将滤纸片平放于清洁的无菌平皿内,开盖置温箱(37℃) 中烤干, 或置室温下自然干燥后备用。
溶出性抗（抑）菌产品, 可直接制成直径为 5mm, 厚不超过 4mm圆片(块)，每 4 片(块) 一组。
(2)阴性对照样片的制备:取无菌干燥滤纸片,每片滴加无菌蒸馏水 20μl，干燥后备用。
溶出性抗（抑）菌产品的阴性对照样本, 应取同种材质不含抑菌成份的样品，制成与试验组大小相同的样片(块)。
(3)试验菌的接种:用无菌棉拭子蘸取浓度为 5×105cfu/ml～5×106cfu/ml 试验菌悬液，在营养琼脂培养基平板表面均匀涂抹3次。每涂抹1次, 平板应转动 60°, 最后将棉拭子绕平板边缘涂抹一周。盖好平皿，置室温干燥 5min。
(4)抑菌剂样片贴放:每次试验贴放1个染菌平板,每个平板贴放4片试验样片, 1 片阴性对照样片, 共 5 片。用无菌镊子取样片贴放于平板表面。各样片中心之间相距 25mm以上, 与平板的周缘相距 15 mm 以上。贴放好后，用无菌镊子轻压样片,使其紧贴于平板表面。盖好平皿，置37℃温箱, 培养16h～18h 观察结果。用游标卡尺测量抑菌环的直径 (包括贴片) 并记录。试验重复3次。
测量抑菌环时, 应选均匀而完全无菌生长的抑菌环进行。 测量其直径应以抑菌环外沿为界。
2.1.7.2.4 评价规定
(1)抑菌作用的判断:
抑菌环直径大于 7mm 者, 判为有抑菌作用。
抑菌环直径小于或等于 7mm 者, 判为无抑菌作用。
(2) 3 次重复试验均有抑菌作用结果者, 判为合格。
(3)阴性对照组应无抑菌环产生。否则试验无效。
2.1.7.2.5 注意事项
(1)每次试验均应设置阴性对照, 不可省略。在报告中亦必须将对照组的结果列出。
(2)接种用细菌悬液的浓度应符合要求。浓度过低,接种菌量少,抑菌环常因之增大; 浓度过高, 接种量过多, 抑菌环则可减小。
(3)应保持琼脂浓度的准确性, 否则可影响抑菌环的大小。
(4)培养时间不得超过 18h。培养过久, 部分细菌可恢复生长, 抑菌环变小。
(5)抑菌环直径可受抑菌剂的量、抑菌性能和干湿度影响。故抑菌剂滤纸片应在试验当天制 备。
2.1.7.3 最小抑菌浓度测定试验
2.1.7.3.1原理
本试验采用琼脂稀释法将不同浓度的抑菌剂混合溶解在琼脂培养基中，然后点种细菌，通过细菌的生长与否，确定抗（抑）菌物质抑制受试菌生长的最低浓度，即最小抑菌浓度
(Minimal Inhibitory Concentration,MIC)。
2.1.7.3.2 试验器材
（1）菌株
金黄色葡萄球菌 ATCC 6538 ，大肠杆菌 8099或ATCC 11229。
（2）MH琼脂 将38gMH琼脂干粉培养基溶干1000ml水中， 加热至沸腾溶解， 然后121℃
高压灭菌15min，置45℃～50℃水浴备用， 此培养基将用于对照试验。
（3）0.03mol/L磷酸盐缓冲液pH7.2
（4）加样器（1μl～10μl）
（5）45℃～50℃水浴恒温箱
（6）吸管、试管、平皿
（7）37℃培养箱
2.1.7.3.3 操作步骤
（1）抗（抑）菌溶液的配制：以无菌操作取5ml或5g（固体研磨后）样品，放入45ml灭菌磷酸缓冲液中，充分震荡溶解，配成10%的均匀分散的溶液或悬液。
（2）含抗菌剂培养基配制：将已配成10%的抗（抑）菌溶液或悬液用PBS做对倍系列稀
释成不同浓度的受试液，置45℃～50℃水浴恒温备用。
（3）双倍浓度培养基配制： 将76gMH琼脂干粉培养基溶于1000ml水中。加热至沸腾溶解。然后121℃压力蒸汽灭菌15min，置45℃～50℃水浴备用。此培养基将用于稀释抗（抑）菌溶液或悬液。
（4）含抗（抑）菌液培养基的配制：分别取10ml系列稀释的抗菌液加入平皿内。将在45℃～50℃水浴中的双倍MH琼脂10ml，加进平皿内 ，边加边摇晃平板， 使抗（抑）菌
液和培养基充分混匀。
（5）用加样器取1μl～2μl（含菌量约为107cfu/ml）菌悬液点种于含抗（抑）菌液培养
基的平皿，接种后所形成的菌液圈直径约5mm～8mm（每个点菌量约为为104cfu）。
（6）以同样方法接种不含抗（抑）菌成分的MH琼脂平板，作为阳性对照。
（7）将接种后的平板放置35℃培养箱中，倒置培养18h～24h，观察结果。
2.1.7.3.4 评判规定
菌落生长被完全抑制的最低抗（抑）菌液浓度为该样品对受试菌的MIC。单一菌落生
长可忽略不计。
2.1.7.3.5 注意事项
(1) 接种时，应由低抗（抑）菌剂浓度向高浓度平板依次接种，最后接种对照平板。
(2)为了保证平板受热均匀，培养时平板堆放不得超过4个。
2.1.7.4 滞 留 抑 菌 效果 试 验
2.1.7.4.1 原 理
本试验通过模拟适合细菌生长、繁殖和可能产生感染的皮肤条件下，使用随机性、双盲的、配对比较的方法检测抗（抑）菌香皂和抗菌沐浴露12h或24h的滞留抑菌效果。
2.1.7.4.2试验器材
(1) 试验产品: 试验品为25套按顺序编号的香皂样品。每套2块，一块为测试样品皂，另一块为不含抑菌剂的对照皂。
(2) 不含抑菌剂的洗发水 25瓶（200ml/瓶）
(3) 不含抑菌剂的香皂 25块
(4) 胰蛋白酶大豆肉汤培养基(TSB)
(5) 胰蛋白酶大豆琼脂培养基（TSA）
(6) 0.075mol/L的磷酸盐缓冲液
(7) 70%酒精
(8) 恒温箱
(9) 金属筒 （直径2.2cm、高度3cm）
(10) 一次性接种环（直径4mm）
(11) 小塑料碗（直径2.2cm，高2.5mm,）
(12) 胶带（Darapore,3M公司生产）
(13) 尼龙刮菌棒
(14) Triton-X 100 500ml
(15) 外用抗生素软膏(例如:百多邦莫匹罗星软膏)
(16) 玻璃弯棒
(17) 羊血
(18) 金黄色葡萄球菌ATCC 27217（此株金黄色葡萄球菌是一种低毒性、对青霉素敏感、对四环素有抗药性的色素株，曾用于许多试验研究，没有任何严重副作用）。
(19) 皮肤消毒剂（例如4%葡糖酸洗必泰）
2.1.7.4.3 试验步骤
(1)调整阶段
试验开始前7d至14d，受试者使用不含抗（抑）菌成分的香皂、洗发水和沐浴液进行日常的洗手、洗澡。此阶段持续至少7d，但不超过14d。
(2)清洗阶段
清洗阶段共3d，受试者每天用抑菌皂清洗一侧前臂, 用对照皂清洗另一侧前臂，清洗过程如下:
① 先清洗左臂，用流动水（水温应保持在35℃～37 ℃）打湿前臂内侧；
② 用香皂从手腕至臂肘上下摩擦15s；
③ 用手在涂有香皂的手臂上上下摩擦泡沫45s；
④ 用流动的清水冲洗前臂15s, 不要搓擦；
⑤ 用纸巾沾干前臂. 不要搓擦；
⑥ 重复以上步骤清洗右臂；
⑦ 按上面所描述的试验步骤每日清洗前臂3次，每次间隔至少一个小时，在最后一次清洗之后，需记录好时间，在12h之后,进行滞留效果检测。在第9次清洗前臂以后，受试者不能洗澡、淋浴或洗净前臂，直到试验结束。用品包的标签上注明洗哪只手臂。清洗前后的两块香皂的重量及受试者完成清洗的情况，须记录下来。
（3）试验阶段
清洗阶段的第四天(最后一次清洗后 12h或24h)，将在受试者每只前臂上划出一个试验区，对试验区进行接种、封包和回收存活细菌,具体步骤如下:
① 将金黄色葡萄球菌（ATCC 27217）连续转种3代，取第3代培养物接种于胰蛋白大豆肉汤培养基（TSB）中，在35℃±2℃的条件下培养20h ±2h。然后用胰蛋白酶大豆肉汤适当稀释菌悬液，使菌悬液浓度约为108cfu/ml～109cfu/ml。
② 微生物接种: 在受试者的每只前臂中间部位（不要在手腕和肘皱褶处），用带有印墨直径为3.0cm的玻璃量筒扣在皮肤上，划分出一个试验区。使用加样器取10μl上述菌悬液，接种于前臂试验区（菌落数为106 cfu/试验区～107 cfu/试验区），用一次性接种环，把接种物涂成一圆形，使其与试验区边缘应有4mm～5mm的距离。
③ 封包:细菌接种后立即用小塑料碗扣于染菌区上面 ，再用胶带将小塑料碗固定在皮肤上，记录封包的时间。
④ 回收存活细菌: 接种后2h±5min 对前臂上接种的区域进行取样。将金属筒放置于试验区中间部位，不要接触到盖有印墨的边缘。将1ml含0.1% triton-X100的0.075mol/L磷酸盐缓冲液吸移至金属筒内，用尼龙刮菌棒刮洗金属筒罩住区域内的皮肤60s,将筒内液体吸移至试管内，再加1ml含0.1%triton X-100的0.075mol/L磷酸盐缓冲液，对该区域内的皮肤进行第二次刮洗30s，将第二次擦洗的液体，注入含第一次刮洗液体的试管中。
⑤ 实验区试验后的消毒处理: 一个实验区采样之后，需用70%的酒精对其进行消毒。然后对另一个实验区以同样方法进行采样，采样结束后，先用70%的酒精,然后用皮肤消毒剂对两只前臂进行消毒处理，处理后清水冲洗，擦干，再涂少量的抗生素软膏。
⑥ 平皿接种与培养:对每一个取样进行平皿接种，以0.0375mol/L磷酸盐缓冲液对样品进行10倍系列稀释，选适当稀释度取0.1ml接种于2个含5%羊血的TSA平板表面，用玻璃弯棒涂匀，在35℃±2℃的培养箱中培养48h ±4h,计数菌落数。
⑦ 抑菌率的计算
抑菌率=[ （对照平均菌落数－试验平均菌落数）/ 对照平均菌落数] ×100%
2.1.7.4.4 判定标准
试验不得少于16人次，抑菌率≥ 50%，可判定该产品在规定的时间内有滞留抑菌作用。
2.1.7.4.5注意事项
（1）受试者录用标准
①年龄介于18岁至65岁的男性或女性；
②受试者应身体健康；
③前臂应完好无损且没有皮肤病及其它皮肤问题；
④同意在整个试验期间，避免使用抗（抑）菌洗液和乳膏、局部类固醇类药和全身或局部使用抗生素，除非因为并发病症医生要求使用；
⑤同意在清洗阶段使用非药物香皂或洗液洗澡和淋浴，但受试者不能清洗前臂。在第9次洗完前臂以后，不洗澡，淋浴或洗净前臂，直到试验结束。
（2）排除受试者的标准 如果受试者有下列情况之一，不能被录用参加试验
① 同时参加另外一个临床试验
② 在过去的14d中，参加过任何一种形式的关于清洁手或手臂的试验
③ 对香皂、去污剂、香水或青霉素过敏
④ 怀孕妇女
⑤ 诊断患有糖尿病、肝炎、艾滋病（HIV阳性）、器官移植者，
（3）其它试验限制
① 受试者不得使用其它清洁用品；
② 受试者应避免洗热水盆浴和游泳；
③ 受试者应避免接触未干的油漆、涂料或者其它溶剂；
④ 受试者应避免在手腕处和前臂上喷洒香水。
（4）在试验完成后的48h～72h内，需检查前臂上有无小脓疱、水疱，隆起的红色痒疱。出现这些情况的受试者应尽快通知检验单位。
2.1.7.5洗衣粉抗（抑）菌效果鉴定方法
2.1.7.5.1 原 理
本 方 法 通过 模 拟 洗 衣 机 的 洗 衣 过 程 , 检 测 抗 （抑）菌洗 衣 粉（剂）的 抗 菌 作 用 。
2.1.7.5.2 试 验 器 材
（1） 试 验 菌株
大 肠 杆 菌 A T C C 1 1 2 2 9，金 黄 色 葡萄 球 菌 A T C C 6 5 3 8。
（2）培养 基
营 养 琼 脂A (琼脂含量为1.5%)
营 养 琼 脂B ： 在 营 养 琼 脂A 中 另 加 入1.5 % 的 琼 脂
营 养 肉 汤：胰 蛋 白 胨大 豆 琼 脂 培 养 基（TSA）
（3）牛 血 清 白 蛋 白（ 过 滤 除 菌）
（4）烷 基 酚 聚 氧 乙 烯 醚 （Tergitol ）
（5）碳 酸 钠
（6）标准 硬 水
（7）非 离 子 浸 湿 剂 ： 见 测 试 棉布 制 备 部 分
（8）冲 洗 溶 液
（9） 中 和 剂（经 中 和 剂 鉴 定 试 验 合 格）
（10） 吐 温80 (过滤 除 菌)
（11）去 离 子 水 或 蒸 馏 水灭 菌
(12)不锈钢转轴（由 一 条 直径0.16cm 不 锈 钢 丝 制 成, 如 图2-2）
俯 视 图 侧 面 图
图2-2 缠 绕 测 试 布 条 的 不 锈 钢 转 轴
|
|
（14）转 动 速 度 为45 r/ min～6 0 r/ min 的 滚 动 摇 床
（15）可 调 恒 温 水 浴 箱
（16）吸 管 ( 1ml, 5ml, 和 10 ml)
（17）培 养 皿
（18）铺 有 滤 纸 的 玻 璃 培 养 皿。
（29）菌 种 保 存 管
（20）细 菌 培 养 箱
（21）涡 流 振 荡 器
（22）细 菌 比 浊 仪
（23）棉布（32只纱/cm × 32 只纱/cm 平 织 棉 布）
（24）别 针、镊 子、无 菌 手 套 、3mm～5 mm玻 璃 珠 、秒 表、载 体 布片2.5cm×3.75cm ，见 测 试 棉布 准 备。
2.1.7.5.3实 验 准 备
（1）测 试棉布的制备
①非 离 子 浸 润 剂 的 制 备：取5g烷 基 酚 聚氧 乙 烯 醚 ，5 g 碳 酸 钠 加 入 到1 L 去 离子 水 中 。
②洗 涤 液 的 制 备 ： 1.5g 非 离 子 浸 润剂 ， 1.5g 碳 酸 钠 ，加 入 到3 L 去 离 子 水中 。
将 大 约3 0 0 g 测 试 棉 布 加 入3 L 洗 涤 溶 液 。 加 热 煮沸 1h 。 取 出 棉 布 在 煮 沸 的 去 离 子 水 中 清 洗 5 m i n 。 然 后 放 入 凉 去 离 子 水 中 5 min 。 以 去 除 残 留 的 浸 润 剂 。 然 后 将
棉布 晾 干。
（2）测试 棉 布 和 转 动 支 架 的 准 备 ：取处 理 过 的 棉 布，剪 成5 cm 宽 ， 重 量 为15g 1 g的 布 条,将 其 一 端 插 入 固 定 在 测 试 转 动 支 架 的 水 平 方 向 的外 边， 然 后 在 三 条 水 平 支 架
间 以 足 够 的 张 力 缠 绕12个整 圈 , 将 布 条 的 另 一 端 用 不 锈 钢 别 针 固 定 在 前 一 圈 布 条 上。最后以121℃ 压 力 蒸 汽 灭 菌15 mi n ，备 用 。
（3） 细 菌 悬 液 的 制 备 ：取0. 5 ml营 养 肉 汤 冻 干 的 菌 种 溶 解，接 种于含10 ml 的 营 养 肉 汤 的 试 管 ， 于3 5 C 2 C培养2 4 h。 然 后， 振 荡 混 合 均 匀 。 用10μl 接 种 环 在 营养 琼 脂 平 板 上 划 线 ， 置 于35 C 2C培养2 4h。 然 后 ， 从 平 板 上 挑 取 单 个 菌 落 种 入 菌 种 保 藏 管 中 ，上 下摇 动10次 ， 吸 弃 多 余 液 体 ， 置－8 5 C冰箱 保 存。 试 验 前 ，从 菌 种 保 藏 管 中 取 出 一 粒 带 菌 小 颗 粒 放 入 营 养 琼 脂 斜 面 ， 晃 动 斜 面 。 将 斜 面至3 5℃ 培 养2 4 h 。 每 天 转
种1 次 ，连 续 传三 代 。
第 四 天，用5 m l P B S洗 脱 斜 面 上 的菌 苔， 取0.5 ml加 入 到 含9.5 ml PBS的 试管 中 ， 混 匀 ， 取1 ml～2 ml 加 入 含 有2 0 m l 营 养 琼 脂B的 细 胞 培 养 瓶 中 ， 晃 动 培养 瓶 使 菌 液 覆 盖 整 个 琼 脂 表 面 。 吸 弃 多 余 菌 液 ，然 后 将 培 养 瓶 倒 置 平 放 在3 5 ℃ 培 养 箱 中 ，培 养2 4小 时。
用5 m l PBS和3g 灭 菌 玻 璃 珠洗 脱 细 胞 瓶 中 的 菌 体 , 用PBS调整 浓 度 至1×10 8 c f u /m l～ 5 ×10 8 c f u / m l，然 后 加 入 3% 的 牛 血 清 白蛋 白 。
（4）染 菌 载 体 的 制 备 ：每片 载 体 接 种20μl菌 悬 液 ，放 回 培 养 皿 中 ， 加 盖 ，于3 5℃ 2℃在 培 养 箱 中干 燥2 0 min 。
（5）测试 样 品 的 制 备 ：至 少 在 实 验 开 始 前2 0 m i n ， 将 盛 有 2 6 5 ml 硬 水 的 玻 璃 罐 在水 浴 箱 中 恒 温 至 测 试 温 度(25℃ 1℃ )。加 入 被 测 试 样 品 混 合 溶 解。
2.1.7.5.4 试 验 步 骤
（1）将 两 片 染 菌 载 体 放 入 转 动 支 架 的 第 六 和 七 层 布 条 之 间 ， 将 第 三 片 放 入 第 七 和 八 层 布 条 之 间 。
（2）以无 菌 操 作 方 式 将 转 动 单 元（ 支 架、 布 条 和 染 均 载 体）放 入 含 有 测 试 产 品 的 玻 璃 罐 中 ， 加 盖 。
(3)玻璃 罐 固 定 在 摇 床 上 ，滚 动 旋 转 洗 涤20 m i n , 取 下 玻 璃 罐。
(4) 以 无 菌 操 作 方 式，取 出 转 动 单 元 ，取 出 3片染 菌 载 体，放入 到 含 有 3 0 ml中 和 剂（在测试抗菌 产品 的抗菌作用 时,不 加 中 和 剂 只 加 入 含0.5% 吐 温8 0 的PBS ）的 试 管 中 ， 在 振 荡 器 中 混 合10s。然 后 振 打2 0 0次 ， 用PBS做10倍系 列 稀 释 ， 并 选 择 适 宜 稀 释 度 样 液 接 种TSA平 板 。 每 个 稀 释 度 接 种两 个 平 板 。
（5）对 照 组 除 用 0.5 %（ V/V） 的 吐 温8 0替 代 测试 产 品 外 ， 其 它 实 验 条 件 和 步 骤 均 与 试 验 组 相 同 。
（6）菌 数 对 照: 将3片染 菌 载 体 加 入含 有3 0 ml 0.5 % 吐 温8 0 的 PBS试 管 中 ，在 振 荡 器 振 荡10s ，然 后 振 打2 0 0次 , 用PBS做10倍 系 列 稀 释 ， 并 取 适宜 稀 释 度 样 液 1.0ml, 以 倾 注法 接 种TSA平板， 每 个 稀 释 度 接 种 两 个 平 板。
（7）将 试 验 组、对照 组 和 菌 数 对 照 组 平板 倒 置 于3 5 ℃ ± 2℃ 培 养 箱 中 ，培 养4 8 h ± 4 h, 计 数 菌 落 数 。
（8）结果计 算
试 验 重 复3次 。 记 录 并 计 算 测 试 样 品的 细 菌 总 数 的 对 数 值 , 求其 平 均 值.。
2.1.7.5.5 评 价 规 定
按2.1.7.4.3.(7)的 方 法 计 算 抑 菌 率 ,抑 菌 率 达 到5 0 % 可 判为 该 抗 菌 合 格 ；
按 2.1.1.7.4(6)方 法 计 算 杀 灭 对 数值。杀 灭 对 数 值 ≥ 3 ，可 判 定 该 产 品为 消 毒 合 格 。
2.1.7.5.6注意事项
（1）将旋转单元放入玻璃罐后应将盖子盖紧，以防转动时漏水。
（2）试验时应严格无菌操作，以防止杂菌污染。
2.1.7.6 振荡烧瓶试验
2.1.7.6.1 原理
在液体中通过快速长时间振荡, 增加微生物与抗（抑）菌产品内抑菌剂的接触以显示其抑菌作用。试验根据抑菌率大小判断其是否具有抑菌能力。本试验适用于对非溶出性抗（抑）
菌织物的鉴定。
2.1.7.6.2 试验器材
(1)金黄色葡萄球菌 (ATCC 6538)、大肠杆菌(8099)、白色念珠菌 (ATCC 10231) 菌悬
液的制备方法见2.1.1.2.3。根据抑菌剂特定用途也可用其他菌悬液。
(2)磷酸盐缓冲液(PBS,0.03mol/L,pH值7.2～7.4)
(3)振荡摇床 (300r/min)
(4)三角烧瓶
(5)营养琼脂培养基、胰 蛋 白 胨大 豆琼 脂培养 基（TSA）与沙堡琼脂培养基
2.1.7.6.3 操作程序
（1）将抗菌物品剪切成10mm×10mm样片,称取0.75g分装包好。
（2）将0.75g样片放入250ml的三角烧瓶中,分别加入70ml PBS和5ml菌悬液, 使菌悬
液在PBS中的浓度为1×104 cfu/ml～5×104 cfu/ml。
（3）将三角烧瓶固定于振荡摇床上, 在作用温度为20℃～25℃的条件下，以300r/min振摇2min。吸取1.0 ml用PBS作适当稀释只至10-2，作为试验组震荡前样液。
（4）将0.75g样片放入上述含有70 ml PBS和5ml菌悬液的三角烧瓶中，然后将三角烧瓶固定于振荡摇床上，在作用温度为20℃～25℃的条件下，以300r/min振摇取0.5ml振
摇1h。吸取1.0 ml样液，或用PBS作适当稀释后作为试验组振荡后样液。
（5）分别吸取振荡前和振荡后样液各1.0ml，以琼脂倾注法接种平皿，每个样液接种两
个平皿，按照2.1.1.3规定的方法进行活菌培养计数。
（6）试验同时设阴性对照样片和不加样片组。对照样片组以不含抗菌剂的材质、大小相同的样片代替抗菌样片外, 其它操作程序均与试验组相同。 不加样片组分别取5ml菌悬液 和70ml PBS加入250ml三角烧瓶中,混匀,分别于振荡前和振荡后1h， 各取1.0ml菌悬
液与PBS的混合液做适当稀释。 按2.1.1.2.3法进行活菌培养计数。
（7）试验重复3次,按下式计算抑菌率
2.1.7.6.4 评价规定
(1)不加样片组活菌计数在1×104cfu/ml～5×104cfu/ml, 且样本振荡前后平均菌落数
差值在 10% 以内, 试验有效。
(2)试验样片抑菌率与对照样片抑菌率的差值 > 26%, 即可认定该样片具有抗菌作用。
2.1.7.6.5 注意事项
(1) 振荡前须将振荡摇床上的三角烧瓶固定牢, 以免碰破。
(2) 试验中，在实验误差允许的范围内，如果试验组和对照组出现振荡后菌落数高于振荡前菌落数的情况，其抑菌率可按“0”计算。
2.1.7.7 浸渍试验
2.1.7.7.1原理
将试样和对照织物分别放于三角瓶中，用含有肉汤培养基的试验菌悬液接种于试样和对照织物上，经培养后，分别将培养前后试样上的细菌洗下，测定细菌的数量，可计算出试样上细菌减少的百分率。该方法适用于溶出性抗菌织物的检测。
2.1.7.7.2试验器材
(1)试验菌株 金黄色葡萄球菌ATCC 6538
(2)试样 将抗菌织物剪成直径为5cm的圆形样片
(3)肉汤培养基
(4)胰蛋白胨大豆琼脂培养基
(5)0.03mol/L磷酸盐缓冲液 pH7.2
(6)恒温水浴箱
(7)37℃培养箱
2.1.7.7.3试样和菌悬液的制备
（1）试样的制备：
距布边10cm以上，离布端1m以上，剪直径为5cm的圆形试样若干，（需用试样数量要根据纤维类别及织物织法而定，以能吸收1ml 菌液且三角瓶中不留残液为度）。另剪取对照织物若干，取3份试样和2份对照织物分别装于三角瓶中，该好瓶口，121℃ 15min灭菌备用。
(2) 菌悬液的制备
用接种环将保存的菌种以划线法接种到营养琼脂平皿上，在37℃培养箱中培养24h ，取平皿上典型的菌落移种到肉汤培养基的三角瓶中，在37℃条件下培养24h ，用肉汤进行系列稀释，使菌悬液的含量为1×105cfu/ml～5×105cfu/ml。
2.1.7.7.4试验步骤
(1) 分别取1ml菌悬液加在三个准备好的三角瓶内的织物上，确保其均匀分布，且三角瓶中不留多余液，封好瓶口，以防蒸发。
(2) 分别在一个盛有试样和对照织物的三角瓶中加入100ml缓冲液，剧烈摇晃1min洗涤细菌，取1ml做10倍系列稀释，选适当稀释度以倾注法接种平皿，作为“0”接触时间样品和对照织物上的细菌数。
(3) 将另一个装有接种试样的三角瓶在37℃培养箱中培养20h±2h，然后加入100ml缓冲液，剧烈摇晃1min洗涤细菌，取1ml做10倍系列稀释，选适当稀释度以倾注法接种平皿，作为试验组。
(4)阴性对照 试样不接种菌悬液，在“0”接触时间加入100ml缓冲液，剧烈摇晃1min取样，接种平皿。
(5)阳性对照 另取1个装有对照织物的三角烧瓶，接种1ml菌悬液后,在37℃培养箱中培养20h±2h，然后加入100ml缓冲液，剧烈摇晃1min洗涤细菌，取1ml做10倍系列稀释，选适当稀释度以倾注法接种平皿。
(6)将阴性和阳性对照样本与试验组样本一并放入37℃培养箱中，培养48h，计数菌落数。
(7)试验重复3次。
(8)结果计算
B或C或(B＋C)/2-A
抑菌率（%）= ×100
B或C或(B＋C)/2
A-试验组试样上的细菌数；
B-“0”接触时间试样上的细菌数；
C-“0”接触时间对照织物上的细菌数；
如果“B”和“C”差别较大时，取较大值；如果“B”和“C”差别不大时，取平均值。
2.1.7.7.5评判规定
(1) “0”接触时间对照织物上的平均菌落数应在1×103cfu/ml～5×103cfu/ml。
(2) 阴性对照应无菌生长，阳性对照菌数比0接触时间的菌数明显增加。
(3) 各次试验的抑菌率均≥50%, 即可认定该样片具有抗菌作用。
2.1.7.7.6 注意事项
(1) 对织物进行染菌操作时，应确保其均匀分布，且三角瓶中不沾染或存留多余菌液。
(2) 三角瓶内的织物染菌后，应将瓶口封好，以防液体蒸发，造成细菌死亡。
2.1.7.8 奎因试验
2.1.7.8.1原理
将菌悬液直接滴于抗（抑）菌产品上, 覆盖以培养基, 加强微生物和抑菌剂的接触以显示其抑菌作用。试验根据抑菌率大小判断其是否具有抑菌能力。本试验适用于对非溶出性硬
质表面抗（抑）菌产品的鉴定。
2.1.7.8.2 试验器材
(1)金黄色葡萄球菌 (ATCC 6538)、大肠杆菌(8099)、白色念珠菌 (ATCC 10231) 菌悬
液(见2.1.1.2)。根据抑菌剂特定用途所用的其他菌悬液。
(2)磷酸盐缓冲液(PBS,0.03mol/L,pH为7.2～7.4)。
(3)营养琼脂培养基、沙堡琼脂培养基和半固体营养琼脂培养基。
2.1.7.8.3 操作程序
(1)倾注琼脂培养基平板。
(2)菌悬液的制备按2.1.1.2进行。将菌悬液稀释成105cfu/ml～106cfu/ml试验用菌悬液，然后做10倍系列稀释至103cfu/ml～104cfu/ml。
(3) 将测试的抗（抑）菌产品剪切成25mm×25mm大小样片。 逐片平放于无菌平皿内, 取0.1ml 不同稀释度的菌悬液滴染于样片中央, 涂匀。置37℃温箱内干燥30 min～60min, 作
为染菌的抗（抑）菌样片备用。
(4) 将染菌的抗（抑）菌样片有菌面朝上平贴于无菌琼脂平板表面。
(5) 用半固体琼脂1.0 ml～5.0ml(视样片厚度而定)均匀覆盖于染菌样片表面, 置37℃
温箱培养18h～24h, 观察结果。
(6) 另将试验用菌悬液作10-2稀释, 取其0.1ml(103 cfu/ml～104 cfu/ml)菌悬液滴染于不含抗（抑）菌剂的同质样片上, 涂匀,与试验组样片做同样处理后，同放一平板内,用半
固体琼脂覆盖培养, 作为阳性对照。
(7) 试验同时, 试验菌悬液作活菌计数, 并观察不含抗（抑）菌剂的对照样片受试菌的
培养计数。
(8)试验重复3次。
2.1.7.8.4 评价规定
定性评价时, 阳性对照生长菌数≥100cfu/片, 抑菌率≥99.00%, 判为有抑菌作用。
2.1.7.8.5 注意事项
（1）样片滴染菌悬液时, 勿溢出片外。
（2）覆盖用琼脂的温度以在45℃～50℃间为宜, 不可过热。
2.1.8一次性使用医疗用品产品细菌和真菌污染的检测实验技术
2.1.8.1 细菌或真菌污染总菌数的检测
2.1.8.1.1 目的
检测一次性使用医疗用品消毒后残存细菌或真菌状况,存放一定时间后是否被细菌或真菌污染及其污染的程。
2.1.8.1.2 适用范围
临床用于病人检查、治疗、护理用指套、手套、吸痰管、阴道窥镜、肛镜、印模托盘、治疗巾、皮肤清洁巾、擦手巾、压舌板、臀垫、中单等接触完整粘膜、皮肤的各类一次性使用医疗、护理用品。
2.1.8.1.3 试验器材
（1）营养琼脂培养基：见附录A。
（2）沙堡琼脂培养基（真菌培养用）：见附录A。
（3）无菌检查用洗脱液：见附录A。
（4）磷酸盐缓冲液（PBS，0.03mol/L,pH7.2）：见附录A。
（5）100级洁净室或100级层流超净工作台（下简称超净台）。
（6）安全操作箱（用于防止真菌孢子污染周围环境）
（7）刻度吸管（1.0mol、5.0mol）
2.1.8.1.4 抽样要求
（1） 抽样方法
为使样品具有良好的代表性，采用随机抽样方法。随机选取不同三个批号的产品。根据检验要求，从每个批号产品中随机抽取同等数量的样品，尽量选自多个大包装。不得在同一批号内的同一包装内邻近部位集中选取所需全部样品。
（2）抽样数量
①对单一品牌、型别（或规格）产品鉴定取样：随机选取不同三个批号的产品。从每个批号产品中随机抽取3个大包装。从每个大包装中随机抽取20个最小销售包装产品（每个最小销售包装产品重量应达到10g以上；棉签等每个包装内数量达到5支以上，以满足检验最低需要量。如果重量低于10g或数量少于5支时，适当增加抽取产品的最小销售包装数量。）作为该品牌、批号产品抽检样品。其中1/4样品用于首次检测，1/4样品用于留样，2/4样品用于必要时的复测。样品最小销售包装应完整无破损（包装破损即可视为不合格产品、禁止出售），检测前不得开启。
②对同一品牌、不同型别（或规格）产品鉴定取样：分别对不同型别（或规格）产品进行随机抽检。对每个型别（或规格）产品随机选取不同三个批号产品。从每个批号产品中随机抽取3个大包装。以下步骤同2.1.8.1.4（2）①。
③对不同一品牌、不同一型别（或规格）产品鉴定取样：分别对不同品牌、型别（或规格）产品进行随机抽检。对每个品牌的每一个型别（或规格）产品随机选取不同三个批号的产品。从每个批号产品中随机抽取3个大包装。以下步骤同2.1.8.1.4（2）①。
2.1.8.1.5 检测样本的制作
（1）检测数量
①每批样品首次检测时，检测5个样本，分别在所选的5个最小销售包装内抽取。
②必要时进行复测。复测时，检测10个样本，分别在所选的10个最小销售包装内抽取。
③以下的样本制作均按首次检测设计，复测时样本量加倍。
（2）样本制作
①垫单、手套等产品的样本制作：分别在所选5个最小销售包装内样品的不同部位剪取10g重样片。共5份。分别剪碎后，各放入一含100ml洗脱液试管中，震荡20s或振打80次。待样本碎片沉淀后，取各管洗液分别进行检测。
②指套等小件物品的样本制作：在所选5个最小销售包装内样品中各选一个样本，共5份。分别剪碎后，各投入含10ml洗脱液试管中，每管一个样本。震荡20s或振打80次，取各管洗液分别进行检测。
③棉签.在所选5个最小销售包装内样品中，各选5支为一个样本，共5份。分别直接投入含10ml洗脱液试管中，每管一个样本。震荡20s或振打8 0次，取各管洗脱液分别进行检测。
④对不能用上述方法采样的物品，在所选5个小包装中各选一个样本。共5份。分别用无菌棉拭子涂抹法采样。每样本涂抹采样面积25cm2。采样后，按无菌操作原则剪下棉拭采样端置于10ml采样液试管中，每管一份样本。震荡20s或振打8 0次，取各管采样液分别进行检测。
2.1.7.1.6 细菌检测操作程序
（1）样本制备后，应立即进行检测。
（2）每一样本洗脱液或采样液接种2个平皿，每个平皿接种1.0ml。当估计含菌量过高时（每平板生长菌落数超过300个），应用PBS对洗脱液或采样液作适当稀释后再接种。为取得适宜的菌落数，应接种2个～3个不同稀释度样液。每吸取一个稀释度样液，换一支无菌吸管。
（3）将45℃左右融化的营养琼脂培养基倾注于已加入样液的平皿中。每平皿约15 ml～20ml。盖好、与样液混均、平放。待培养基凝固后，翻转平板使底向上，置37℃恒温培养箱内培养48h后，计数菌落数。
（4）菌落数计算：接种洗脱液或采样液原液进行培养者，即使生长的菌落数<30cfu/平板时，仍按实际生长菌落数计算；接种不同稀释度洗脱液或采样液进行培养时、应选择生长的菌落数在30cfu/平板～300cfu/平板之间的稀释度进行菌落数计算。
（5）检测时应设阴性、阳性对照组。阴性对照组：①用同批营养琼脂培养基倾注平板直接培养；②分别吸取1.0ml同批洗脱液与PBS各2份，分别接种平皿、倾注营养琼脂培养基进行培养。阳性对照组：接种金黄色葡萄球菌（ATCC6538）18h新鲜肉汤培养物1.0ml于平皿内，倾注营养琼脂培养基进行培养。培养条件为37℃恒温培养培养48h后观察结果。若阴性对照组有菌生长，说明其中培养基、洗脱液、PBS灭菌不合格或被污染；若阳性对照组无菌生长或生长的菌落不正常，说明其中使用的培养基、培养条件可能存在问题或均存在问题。以上两种情况均需更换培养基重新进行试验。
2.1.8.1.7 真菌检测操作程序
（1）真菌的检测操作程序与细菌检测操作程序基本相同，主要区别在于所用培养基、培养温度、培养时间不同。真菌培养使用沙堡琼脂培养基。倾注法接种。20℃～25℃恒温培养72h，计数菌落数。为防止真菌孢子飞扬污染环境，真菌菌落计数应在安全操作箱内进行。
（2）检测时设阴性、阳性对照组。方法与2.1.8.1.6（5）相同。阳性对照组接种白色念珠菌（ATCC10231）。20℃～25℃恒温培养72h观察结果。
2.1.8.1.8 结果计算
将2个平板计数所得菌落数的平均值乘以稀释倍数即得洗脱液或采样液中每毫升所含菌量（cfu/mL）。根据每毫升所含菌量推算出每个样本的菌量。其表达单位可根据情况使用cfu/cm2、cfu/g、cfu/样本。
2.1.8.1.9 注意事项
（1）严格无菌操作防止污染。
（2）同批样品检验洗脱振敲次数要保持一致。振敲轻重尽量保持一致。
（3）吸量管取液量应准确，减少使用中误差。
（4）样液接种后应尽快倾注培养基，避免样液干燥于平皿上，影响结果的准确性。
（5）计算结果时，注意核对接种样液稀释倍数，以免发生计算错误。
2.1.8.2 无菌检验试验
2.1.8.2.1 目的
检测医疗用品经灭菌处理后是否达到无菌标准。
2.1.8.2.2 试验器材
（1）需氧-厌氧菌培养基：见附录A。
（2）无菌试验用真菌培养基（下简称真菌培养基）：见附录A。
（3）无菌检验用洗脱液（下简称洗脱液）：见附录A。
（4）100级洁净室或100级层流超净工作台（下分别简称洁净室与超净台）
2.1.8.2.3 抽样要求
（1）抽样方法：为使样品具有良好的代表性，采用随机抽样方法。随机选取不同三个批号的产品。根据检验要求，从每个批号产品中随机抽取同等数量的样品，尽量选自多个大包装。不得在同一批号内的同一包装内邻近部位集中选取所需全部样品。
（2）抽样数量
①对单一品牌、型别（或规格）产品鉴定取样：随机选取不同三个批号的产品。从每个批号产品中随机抽取3个大包装。敷料、手术衣等织物或纸制产品，从每个大包装中随机抽取8个最小销售包装产品作为该品牌、批号产品抽检样品；针灸针、注射器、输液器等器具，从每个大包装中随机抽取28个最小销售包装产品作为该品牌、批号产品抽检样品。其中1/4样品用于首次检测，1/4样品用于留样，2/4样品用于必要时的复测。样品最小销售包装应完整无破损（包装破损即可视为不合格产品、禁止出售），检测前不得开启。
②对同一品牌、不同型别（或规格）产品鉴定取样：分别对不同型别（或规格）产品进行随机抽检。对每个型别（或规格）产品随机选取不同三个批号产品。以下步骤同2.1.8.2.3 （2）①。
③对不同一品牌、不同一型别（或规格）产品鉴定取样：分别对不同品牌、型别（或规格）产品进行随机抽检。对每个品牌的每一个型别（或规格）产品随机选取不同三个批号的产品。以下步骤同2.1.8.2.3（2）①。
2.1.8.2.4 采样前准备
（1）采用平板尘降法检测洁净室或超净台内空气的含菌量：用φ9cm双平板暴露30min对空气采样后进行培养。平均菌落数≤1.0cfu/平板为合格。
（2）需氧-厌氧培养基培养性能检查：接种1.0ml含10个以下的藤黄微球菌[Micrococcus lutea，CMCC（B）28001]菌悬液，置30℃～35℃培养24h后，应生长良好。另接种1.0ml含50个以下的生孢梭菌[Clostridium sporogenes，CMCC（B）64941] 菌悬液，置同样条件，亦应生长良好。
（3）真菌培养基培养性能检验：接种1.0ml含50个以下的白色念珠菌[Candida albicans，CMCC（F）98001]菌悬液，置20℃～25℃培养24h后应生长良好。
（4）洗脱液无菌检查：于无菌检查前3d，向需氧-厌氧菌培养基与真菌培养基内各接种1.0ml洗脱液，分别置30℃～35℃与20℃～25℃条件下，培养72h后应无菌生长。
（5）培养基无菌检查：于无菌检查前3d，将未种菌的需氧-厌氧菌培养基与真菌培养基分别置30℃～35℃与20℃～25℃条件下，培养72h后应无菌生长。
（6）阳性对照菌悬液制备：于无菌试验前一天，取金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]普通琼脂斜面新鲜培养物1接种环，接种于需氧-厌氧菌培养基内，在30℃～35℃培养16h～18h备用。用时以无菌生理盐水稀释至1：106 。
（7）无菌室与试验台消毒：对无菌室地面与桌面以及试验台台面擦净消毒后，将无菌试验用的培养基、洗脱液、供试品及其他需用器材放妥。开启紫外线灯消毒1h。
2.1.8.2.5 操作程序
（1）工作人员穿戴无菌隔离衣、帽、口罩、鞋后进入无菌室，用70%乙醇棉球消毒双手。
（2）将供试品外包装用70%乙醇擦拭消毒后放于试验台上。
（3）取需氧-厌氧培养管与真菌培养管各一支，打开盖（或塞）置试验台上，直至样本无菌检查试验完毕。盖上盖（或塞）与供试品一起培养，作为阴性对照。
（4）按无菌操作要求打开供试品外包装，按以下规定方法制备样本接种需氧-厌氧培养管与真菌培养管。
2.1.8.2.6 检测样本的制作
（1）检测数量
①每批样品首次检测时，检测1/4样本，分别在所选的最小销售包装内抽取。
②必要时进行复测。复测时，检测2/4样本，分别在所选的最小销售包装内抽取。
③以下的样本制作均按首次检测设计，复测时样本量加倍。
（2）样本制作
①敷料、手术衣等非管道类样本。取2个包装内的样本，于不同部位剪取约1cm×3cm大小的样片21片，接种需氧-厌氧菌培养管5管与真菌培养管2管。每培养管含培养基40ml，各接种3片样片。在其中一加有样本的需氧-厌氧培养管中接种1.0ml金黄色葡萄球菌稀释悬液[见2.1.8.2.4（6）]作为阳性对照。
②注射针、针灸针、缝合针、棉签等样本。在所选7个最小销售包装内样品中，各选1支为一个样本，分别接种于需氧-厌氧培养管5管与真菌培养管2管，每管含培养基15.0ml，在其中一支加有样本的需氧-厌氧菌培养管中接种1.0ml金黄色葡萄球菌稀释悬液[见2.1.8.2.4（6）]作为阳性对照。
③输液（血）器等导管类样本。在所选7个最小销售包装内样品中，各选1支为一个样本，各以无菌注射器吸取5.0ml～10.0ml无菌洗脱液注入管内往返摇荡5次。将各样本洗脱液分别接种需氧-厌氧菌培养管5管与真菌培养管2管。培养管含培养基15.0ml，每管接种样本洗脱液1.0ml。在其中一支加有样本洗脱液的需氧-厌氧菌培养管中接种1.0ml金黄色葡萄球菌稀释悬液[见2.1.8.2.4（6）]作为阳性对照。
④注射器样品。在所选7个最小销售包装内样品中，各选1支为一个样本，各吸取经灭菌合格的洗脱液2ml～10ml，将芯杆抽取至全程刻度，振摇5次。将各管洗脱液分别接种需氧-厌氧菌培养管5管与真菌培养管2管。洗脱液接种量，对1ml注射器为0.5ml；2ml注射器为1.0ml；5ml～10ml 注射器为2.0ml；20 ml～50ml注射器为5.0ml。培养管中的培养基量，对洗脱液接种量在2ml以下者，每管为15.0ml；接种量在5ml者，每管为40.0ml。在其中一支加有样本洗脱液的需氧-厌氧菌培养管中接种1.0ml金黄色葡萄球菌稀释悬液[见2.1.8.2.4（6）]作为阳性对照，
⑤其他样本。不能用上述方法处理的，可用无菌棉拭子涂抹法采样。每个样本涂采面积不得少于25cm2。采样后将棉签直接剪入培养管中。每次检测7个样本，分别接种需氧-厌氧菌培养管5管与真菌培养管2管，每支培养管含培养基15.0ml。在其中一支加有采样棉拭子的需氧-厌氧菌培养管中接种1.0ml金黄色葡萄球菌稀释悬液[见2.1.8.2.4（6）]作为阳性对照。
⑥将上述接种样本或接种样本洗脱液、采样棉拭子后的需氧-厌氧菌培养管、阳性对照管与阴性对照管[见2.1.8.2.5（3）]同时放入30℃～35℃恒温培养箱内、连续培养5d，逐日观察培养结果。
将上述接种样本或接种样本洗脱液、采样棉拭子后的真菌培养管、阳性对照管与阴性对照管[见2.1.8.2.5（3）]同时放入20℃～25℃恒温培养箱内、连续培养7d，逐日观察培养结果。
阳性对照管应有菌生长，阴性对照应无菌生长，否则试验重做。
2.1.8.2.7 结果评价
当阳性和阴性对照管培养的结果符合2.1.8.2.6（6）所示要求，接种有样本或样本洗脱液、采样棉拭子的需氧-厌氧菌培养管及真菌培养管（不包括阳性对照管）均呈澄清（或虽浑浊但经证明并非有菌生长者），应判供试品合格。
如接种样本或样本洗脱液、采样棉拭子（不包括阳性对照管）的需氧-厌氧菌培养管及真菌培养管中有任何一管呈浑浊，并确认有菌生长时，应用同批样本进行复测。复测中，除阳性对照管外，其他各管均无菌生长，仍可判为合格，否则应判供试品不合格。
2.1.8.2.8 注意事项
（1）严格无菌操作，防止污染。
（2）试验前各项准备工作和试验中的阳性和阴性对照，均不可省略，否则难以下结论。
2.1.8.3 卫生监督抽样
2.1.8.3.1 细菌或真菌污染总菌数的检测抽样要求
(1) 抽样方法
采用随机抽样方法。随机选取同一个批号的产品。
(2) 抽样数量
1）对单一品牌、型别（或规格）产品取样：从同一批号的产品中随机抽取3个大包装。从每个大包装中随机抽取5个最小销售包装产品（每个最小销售包装产品重量应达到10g以上；棉签等每个包装内数量达到5支以上，以满足检验最低需要量。如果重量低于10g或数量少于5支时，适当增加抽取产品的最小销售包装数量。）作为该品牌、批号产品抽检样品。其中1/3样品用于首次检测，2/3样品用于必要时的复测留样。样品最小销售包装应完整无破损（包装破损即可视为不合格产品、禁止出售），检测前不得开启。
2）对同一品牌、不同型别（或规格）产品取样：分别对不同型别（或规格）产品进行随机抽检。对每个型别（或规格）产品随机选取同一个批号产品。从同一批号的产品中随机抽取3个大包装。以下步骤同2.1.8.3.1（2）1)。
3）对不同一品牌、不同一型别（或规格）产品鉴定取样：分别对不同品牌、型别（或规格）产品进行随机抽检。对每个品牌的每一个型别（或规格）产品随机选取同一个批号产品。从同一批号的产品中随机抽取3个大包装。以下步骤同2.1.8.3.1(2) 1)。
(3) 样品处理及检验操作程序等步骤同2.1.8.1.5～2.1.8.1.9。
2.1.8.3.2 无菌检验试验抽样要求
（1）抽样方法
采用随机抽样方法。随机选取同一个批号的产品。
（2）抽样数量
1）对单一品牌、型别（或规格）产品取样：从同一批号的产品中随机抽取3个大包装。敷料、手术衣等织物或纸制产品，从每个大包装中随机抽取2个最小销售包装产品作为该品牌、批号产品抽检样品；针灸针、注射器、输液器等器具，从每个大包装中随机抽取7个最小销售包装产品作为该品牌、批号产品抽检样品。其中1/3样品用于首次检测，2/3样品用于必要时的复测留样。样品最小销售包装应完整无破损（包装破损即可视为不合格产品、禁止出售），检测前不得开启。
2）对同一品牌、不同型别（或规格）产品取样：分别对不同型别（或规格）产品进行随机抽检。对每个型别（或规格）产品随机选取同一个批号产品。从同一批号的产品中随机抽取3个大包装。以下步骤同2.1.8.3.2(2)1)。
3)对不同一品牌、不同一型别（或规格）产品鉴定取样：分别对不同品牌、型别（或规格）产品进行随机抽检。对每个品牌的每一个型别（或规格）产品随机选取同一个批号产品。从同一批号的产品中随机抽取3个大包装。以下步骤同2.1.8.3.2.(2)1)。
2.1.9 隐形眼镜护理液抗（抑）菌功能鉴定检验技术
2.1.9.1定义
隐形眼镜护理液（contact lens care solution）是指: 专用于隐形眼镜护理的，具有清洁、消毒、冲洗或保存镜片，中和清洁剂或消毒剂，物理缓解(如润滑)隐形眼镜引起的眼部不适等功能的溶液或可配制成溶液使用的可溶性固态制剂，包括使用时可直接或非直接接触眼球的产品。
隐形眼镜护理液可分单一功能型与多功能型。单一功能型系仅具有上述一种功能的产品；多功能型系同时具有清洁、消毒、冲洗、保存四种功能的产品。
2.1.9.2产品卫生标准：须符合表2-6规定。
2.1.9.3样品采集
随机抽取3个批号的最小容量包装产品进行测试，每个批号至少抽取3件，1/3用于检测，1/3必要时复测，1/3留样。
2.1.9.4 鉴定方法
2.1.9.4.1理化性能鉴定
（1）外观按中华人民共和国药典（1995年版二部）“澄清度检查法”测试。
（2）pH 取试样20ml，在温度25℃±1℃时用已校正的酸度计进行测定。
（3）渗透压取0.5ml试样，用渗透压计测定。以蒸馏水或已知校正值的溶液做校正，以三次读数的平均值为测定结果。
（4） 杀菌有效成份含量
按国家标准、中华人民共和国药典、行业标准的顺序选择测定方法。每份试样平均测3
次，取其平均值。
表 2-6 隐形眼镜护理液标准
|
项目名称 |
标 准 |
适 用 |
|
理化性能
外观 |
澄清液体 |
液态成品原液或固态成品使用液 |
|
*pH |
6.5～7.8 |
直接与眼接触的产品原液或使用液 |
|
*渗透压（mosm/kg.H2O） |
260～340 |
直接与眼接触的产品原液或使用液 |
|
有效成分含量 |
在标示含量范围内 |
所有产品 |
|
*过氧化氢残留量（mg/kg. H2O） |
≤30 |
以过氧化氢为有效成分的产品 |
|
微生物 |
|
|
|
活菌计数(cfu/g) |
≤100 |
不直接接触眼睛的固态产品 |
|
致病菌 |
不得检出 |
不直接接触眼睛的固态产品 |
|
无菌检查 |
无菌生长 |
直接接触眼睛的液态产品 |
|
消毒效果(杀灭率%) |
|
具有消毒功能的产品 |
|
大肠杆菌 |
≥99.90 | |
|
金黄色葡萄球菌 |
≥99.90 | |
|
绿脓杆菌 |
≥99.90 | |
|
白色念珠菌 |
≥90.00 | |
|
茄科镰刀霉菌 |
≥90.00 | |
|
安全性
急性经口毒性(mg/kg) |
>5000 |
所有产品 |
|
微核试验 |
阴性 | |
|
*皮肤刺激 |
无刺激性 |
直接与眼接触的产品原液或使用液 |
|
*眼刺激 |
无刺激性 | |
|
*皮肤变态反应 |
极轻 | |
|
*细胞毒性 |
无细胞毒性 | |
|
稳定性 |
|
|
|
成品稳定性 |
符合产品标示有效期或保质期 |
所有产品 |
|
开封产品抛弃日期 |
符合产品标示抛弃日期 |
多次量产品 |
（5）过氧化氢残留量
将护理液按说明书规定的方法和最短作用时间进行中和，取中和后样液5.0ml至150ml锥形瓶内，加入10%硫酸5ml及蒸馏水10ml，以0.002mol/L高锰酸钾标准溶液滴定，稳定摇动，滴定至粉红色并至少保持15s为终点。同时作空白对照。按下列公式计算过氧化氢残
留量：
式中：
V：样品消耗0.002mol/L KMnO4溶液的ml数
V0：空白消耗0.002 mol/L KMnO4溶液的ml数
C：高锰酸钾标准溶液的摩尔浓度
2.1.9.4.2微生物污染鉴定
（1）固态样品处理
精确称取2.000克试样，放入20.0ml 0.03mol/L磷酸盐缓冲液(PBS)内(如产品中含有抑
菌成份，则用中和剂代替PBS),完全溶解后取样按下述方法进行检测。
（2）活菌计数
取1.0ml样液接种营养琼脂培养基，每管平行接种二个平皿，于35℃～37℃培养48h,
按下列公式计算平板上平均菌落数：
活菌计数(cfu/g)=平板上平均菌落数×10
（3）致病菌
按本规范中“一次性使用卫生用品鉴定实验技术”的方法进行大肠菌群、金黄色葡萄球
菌与绿脓杆菌检测。
（4）无菌检查
按中华人民共和国药典(2000,年版二部)“无菌检查法”测试（如产品中含有抑菌成份，
须先用薄膜过滤法处理）。
2.1.9.4.3消毒效果鉴定
（1）中和剂鉴定试验(见2.1.1.5)
（2）悬液定量杀菌试验
1) 试验微生物
细菌：大肠杆菌(ATCC 8739或8099)、金黄色葡萄球菌(ATCC 6538)和绿脓杆菌(ATCC
9027)
酵母菌：白色念珠菌(ATCC 10231)
霉菌：茄科镰刀霉菌（ATCC 36031）
2) 操作程序
①取菌种第3代～14代营养琼脂斜面新鲜培养物(18-24h)，用0.03mol/L 磷酸盐缓冲液（PBS）洗下，稀释成含菌量为5×107 cfu/ml～5×108cfu/ml的菌悬液。
②从三批试样中分别吸取10.0ml加入三支灭菌试管中，置20℃～25℃水浴5min。
③在试管中分别加入0.1ml菌悬液，使最终含菌量为5×105 cfu/ml～5×106cfu/ml，混
匀，并开始计时。
④分别于4个不同作用时间(推荐最短消毒时间(T)1T、2/3T、1/2T、1/4T)，各取1.0ml
菌药混合液移入9.0ml中和剂中，混匀。
⑤中和10min后，吸取其原液或10倍系列稀释液1.0ml分别接种营养琼脂培养基（细菌）、沙堡琼脂培养基（酵母菌）或马铃薯葡萄糖琼脂培养基（霉菌），每管接种二块平板，细菌与酵母菌分别于35℃～37℃培养48h(细菌)或72h（酵母菌），霉菌于20℃～25℃培养
10d～14d，作活菌计数，取其平均值。
⑥以0.03mol/L PBS代替样品，按上述同样方法加菌进行活菌计数作为阳性对照。取PBS、中和剂各1.0ml分别接种营养琼脂培养基或沙堡琼脂培养基以及未接种的上述培养基
作为阴性对照。
⑦按下列公式计算每种菌每个作用时间点的杀灭率：
阳性对照组活菌数-试验组活菌数
杀灭率(%)= ───────────────── ×100%
阳性对照组活菌数
⑧试验所选中和剂必须通过悬液定量中和剂鉴定试验，并且阴性对照必须无菌生长，否则重新测试。
（3）有机物对消毒效果影响试验
1）试验微生物：任选上述一种细菌进行测试。
2)操作程序
①取菌种3代～14代营养琼脂斜面新鲜培养物(18-24h)，用0.03mol/L PBS洗下并稀释，加适量无菌小牛血清，使最终含血清量为10%，含菌量为5×107cfu/ml～5×108cfu/ml菌悬
液,(实际作用菌浓度为5×105cfu/ml～5×106cfu/ml)。
②以悬液定量杀菌试验确定的最低有效浓度所需的最短作用时间为试验时间起点，以后
按等差或等倍组距再选择3个作用时间取样检测。以下步骤按上述悬液定量杀菌试验方法进行。
3）评价规定
达到合格的最短有效作用时间与悬液定量杀菌试验结果相同，为有机物对产品杀菌作
用无明显影响；如最短有效作用时间延长一倍或以上为有影响。
(4）模拟现场试验(镜片定量杀菌试验)
1）试验微生物：
根据悬液定量杀菌试验结果，选择抗力最强的一种细菌与酵母菌进行测试。
2）试验镜片
镜片类型：分低含水非离子型与高含水离子型。试验镜片必须是未使用过的新镜片。
镜片应凹面向上放入无菌培养皿内，在凹凸两面顶点各接种0.01ml菌液。
3)操作程序
①将试验镜片(每组4片低含水非离子型与4片高含水离子型)以及阳性对照镜片(各2片)分别放置于灭菌培养皿中，取试验菌液0.01ml接种于镜片上(染菌量为2×105 cfu/片～
1×106cfu/片)，于20℃～25℃吸收5min～10min。
②按生产商所提供的镜片消毒的详细说明处理试验镜片，包括清洁、消毒、冲洗、贮存
的所有步骤。
③处理完毕，立即以无菌操作方法分别将试验镜片移入5.0ml中和剂试管内，振摇，使
镜片上的残留菌被充分洗脱在中和剂中，进行活菌计数。
④将未经处理的阳性对照镜片以无菌操作方法分别移入5.0ml 0.03mol/L PBS试管内，
振摇，充分洗脱镜片上残留菌，再按2.2.3的方法进行活菌计数。
⑤取0.03mol/L PBS、中和剂各1.0ml分别接种营养琼脂培养基与沙堡琼脂培养基以及
未接种的上述培养基作为阴性对照。
⑥以下列公式计算每种镜片上每种菌的消除率：
阳性对照组活菌数-试验组活菌数
消除率(%)= ───────────────── ×100%
阳性对照组活菌数
⑦试验所选中和剂必须通过载体定量中和剂鉴定试验，并且阴性对照必须无菌生长，否
则重新测试。
4）评价规定
对细菌的消除率≥99.90%，对酵母菌的消除率≥90.00%为合格。
2.1.9.4.4安全性鉴定
（1）急性经口毒性、微核试验、皮肤刺激、眼刺激、皮肤变态反应：按本规范中“消
毒剂毒理学实验技术”的方法进行。
（2）细胞毒性：按ISO 10093/GB/T 16886.5-1997医疗器械生物学评价第5部分:细胞毒
性试验方法进行。
2.1.9.4.5稳定性鉴定
（1）成品稳定性目的是用于确定隐形眼镜护理液成品的有效期。
1) 自然留样法：将试样放置25℃±2℃室温条件下，定期(开始、3个月、6个月，以后每6个月一次)取样检测微生物污染情况，以及选择抗力最强的一种细菌进行消毒效果试验。
2) 加速试验法：将试样放置45℃±2℃与相对湿度75±5%条件下，定期(开始、3个月、
6个月)取样检测，指标同自然留样法。
3) 评价规定
①至少应进行6个月的自然留样与加速试验。
②自然留样法可直接确定产品有效期。
③加速试验可根据温度与自然留样法温度差(x)计算加速因数，计算公式为：
加速因数 = 2.0x/10(当x=20时，2.02.0=4)。
然后用加速因数乘以试验时间推测产品有效期，但不得超过2年。
（2）开封产品抛弃日期
目的：用于确定多次量隐形眼镜护理产品开封后的抛弃日期。
1）试验微生物：选择消毒效果试验中抗力最强的一种细菌与一种酵母菌。
2）接种日期：试验开始、第2周，拟抛弃日期的25%、50%、75%、100%。
3) 取样日期：第1、2、3、4（周），拟抛弃日期的25%、50%、75%、100%，拟抛弃
日期后2周。
4) 操作程序
①每种菌每批次取试样50ml于灭菌试管内，加入0.5ml含菌量为108cfu/ml菌悬液，混
匀，使最终菌量为106cfu/ml，置于20℃～25℃。如产品对光敏感，应遮光贮存。
②在上述取样日期，每管吸取1.0ml试样移入9.0ml中和剂中，混匀。
③中和10min后，取样液或10倍系列稀释液1.0ml分别接种营养琼脂培养基(细菌)或沙堡琼脂培养基(酵母菌)，每管接种二个平皿，于35℃～37℃培养48h(细菌)或72h（酵母菌），
进行活菌计数，取平均值。
④分别以0.03mol/L PBS与中和剂代替试样，按上述方法加菌进行活菌计数作为阳性对照与中和剂对照；同时分别用1.0ml 0.03mol/L PBS与中和剂接种营养琼脂培养基与沙堡琼
脂培养基以及未接种的上述培养基作阴性对照。
⑤在上述再接种日期(2周及以后)，在试样中加入0.5ml含量为105cfu/ml菌悬液，混匀，
使最终菌量为103cfu/ml。在再接种前取样进行活菌计数。
⑥计算每种菌的减少率：
阳性对照组活菌数-试验组活菌数
减少率(%)= ───────────────── ×100%
阳性对照组活菌数
5）评价规定
阴性对照无菌生长，中和剂对照活菌数达到阳性对照活菌数的50%以上，否则应重新测试。
在第14d，细菌减少率≥99.90%，酵母菌减少率≥90.0%，并且在以后至抛弃日期细菌与
酵母菌的活菌计数不再增加。
2.1.10 灭菌医疗用品包装鉴定检验技术
2.1.10.1 定义
灭菌医疗用品包装是指要求最终灭菌(即包装后进行灭菌)的医疗用品的包装，包括包装材料及封口(以下简称包装)。灭菌医疗用品包装的鉴定,包括包装的理化性能、微生物屏障性能、与灭菌系统的相容性以及毒性。
灭菌医疗用品的包装可在生产企业或医疗保健机构进行,均适用本鉴定检验技术。
2.1.10.2 理化性能鉴定
2.1.10.2.1一般检查
（1） 在正常的或校正的传播光（日光或良好的人工光源）中检查，包装应无削弱其功能的洞孔、裂缝、撕裂、皱痕或会影响其功能的局部加厚或变薄。
（2）包装内医疗用品应无未经保护的,可能会破坏包装的尖锐边缘或突出物。
2.1.10.2.2 质量测定
（1）器材
1) 天平：感量 2mg,测量精确度0.5%
2) 切割机：切割面积精确度1.0%
（2）操作步骤
1）条件：在温度23℃±1℃，相对湿度50%±2% 条件下进行;
2）取样：取5份样品，切下20片试样，每片面积为500cm2（200mm×250mm）;
3）称量：称取每片试样重量,以克为单位，保留三位有效数字;
4）计算：计算平均值与标准差。
质量（g/m2） = m × 10000 / A
式中：
m：测试片平均质量（g）
A：测试片平均面积（cm2）
（3）结果报告：在一定温湿度条件下，每平方米试样的平均重量（g）。
（4）评价：包装材料单位面积的平均质量，应在产品标准的±5% 范围内。纸质材料的平均质量应 ≥56 g/m2。
（5）注意事项：在制备样片时避免用手直接接触。
2.1.10.2.3 pH值测定
（1）器材
1）蒸馏水或去离子水: 电导率≤0.1 mS/m
2）标准缓冲溶液: pH值4.0，6.9，9.2
3）pH计：分辩率0.05
（2）操作步骤
称取样品2 g，精确到0.1 g。粉碎成约5mm×5mm大小，放入带塞细颈玻璃烧瓶内。将100ml水加入另一同样带塞细颈玻璃烧瓶内，连接回流冷凝器, 将水加热到接近沸腾。 移去冷凝器，将接近沸腾的水加入含有样品的烧瓶内，连接冷凝器慢煮1h。用冷凝器快速冷却至(20℃～25℃)。让纤维沉淀，并轻轻将抽提液倒入小烧杯内，进行pH测定。
（3）结果报告: 取两次测定结果的平均值报告。
（4）评价: 包装材料水提取物的pH值应在5～8范围内。
2.1.10.2.4氯化物含量测定
（1）滴定法
1）器材
①蒸馏水：电导率 < 0.5 mS/m
②硝酸溶液（约1.5mol/L）：将密度为1.40g/ml 的硝酸100 ml稀释到1000ml
③丙酮：不含氯化物
④乙酸铜饱和溶液：13g乙酸铜（含1分子H2O）溶解于200ml的1%m/m）的醋酸溶
⑤硝酸银标准溶液（2mmol/L）：1.70g干硝酸银溶解在100ml的蒸馏水中，取20.0ml 稀释至1000mL，避光保存。
硝酸银标准溶液浓度C（mmol/L）=2m/1.70
式中：
m为称取硝酸银的实际质量,单位为g
⑥电压计：量程0 mV～300 mV ，精确度2mV
⑦微量滴管:容量10 ml, 刻度0.02 ml
2）操作步骤：
①将样品剪切成5mm×5mm大小，充分混合。
②称取样品4.00g放入250ml的细颈烧瓶中。加入100ml水进行加热蒸馏1h±5min。快速冷却滤出液，在这一过程中避免沸腾时水有任何损失，经抽滤后收集于带塞玻璃烧瓶中。吸取50.0ml过滤液于三角烧瓶中，加入200ml丙酮，5ml硝酸和2ml乙酸铜溶液。
③用磁力搅拌器混匀溶液5min。插入电极边加硝酸银溶液边记录电位变化，直至稳定。绘制加入不同量硝酸银的电位图。滴加标准溶液速度为0.1 ml/min～0.2ml/min。
④计算
水溶性氯化物含量（mg/kg） = 35.46 V3 / V2 × c（V1-V0）/ m
简化公式 141.8（V1-V0）/ m
式中：
V1：样品消耗硝酸银溶液的毫升数；
V0：空白消耗硝酸银溶液的毫升数；
V2: 提取液的毫升数(标准为50ml)；
V3: 试验溶液总毫升数(标准为100ml)；
m：样品（烘干）质量（g）。
3）结果报告：水溶性氯化物含量（mg/kg）
4）评价：以NaCl计应≤0.05%。
5）注意事项：制备样品时戴干净的手套，防止污染样品。
(2)离子色谱法
1)器材
①蒸馏水:25℃时,电导率<0.5ms/m
②氯化物储备液:浓度为1000mg/L
③氯化物工作溶液:浓度为10mg/L
④离子色谱仪
⑤注射器:容量5ml,有一直径为0.2μm的孔
2)操作步骤
①将样品剪成5mm×5mm大小，充分混合。
②称取样品4.00g放入250ml的细颈瓶中，加入100ml进行加热蒸馏1h±5min,快速冷却滤出液,在这一过程中避免沸腾时水有任何损失。
③用注射器取蒸馏液进行离子色谱分析.
④配制校准液5种,包括浓度的1/10,如1mg/L～10mg/L,绘制校准溶液图。
⑤色谱分析测定校准液和样液。
⑥记录提取物中氯化物最高点。根据校准表，读出提取物氯化物离子浓度和空白值离子浓度。
⑦计算
水溶性氯化物含量（mg/kg）=100（ρ-ρ0）V/mωd
式中：
ρ：提取液氯化物浓度（mg/L）
ρ0：空白液氯化物浓度（mg/L）
V：蒸馏液的加水量（100ml）
m：样品质量（g）
ωd：样品中干物质含量（%）
3）结果报告：报告水溶性硫酸盐含量mg/kg
4）评价：以NaCl计应≤0.05%
5)注意事项:用手取样时应戴手套,以免污染样品。
2.1.10.2.5硫酸盐含量测定（ISO 9198）
(1)器材
1)蒸馏水: 25℃时, 电导率 < 0.5mS/m
2)硫酸盐储备液: 浓度（SO4-2）为1000mg/L
3)硫酸盐工作溶液，浓度（SO4-2）为10mg/L
将硫酸盐储备液稀释至工作溶液，有效期一周
4)粉碎机: 高速搅拌,能将样品彻底粉碎
5)离子色谱仪:
6)注射器: 容量5ml,有一直径为0.2μm的孔
7)茶过滤器: 具不锈钢网孔筛,防止纤维堵塞注射器
(2)操作步骤
1）称取样品2g～5g(精确到0.01g),放入粉碎机内, 加入23℃±2℃的水250ml±2ml,粉碎后浸泡2h。
2）用注射器取浸出液进行离子色谱分析，如纤维堵塞可先通过茶过滤器。
3）配制校准液5种，包括浓度的1/10, 如1mg/L～10mg/L，绘制标准溶液图。
4）色谱分析测定校准液和样液。
,
5）记录提取物中硫酸盐最高点。根据校准表，读出提取物硫酸盐离子浓度和空白值离子浓度。
6)计算
水溶性硫酸盐含量ω（,mg/kg） = 100（ρ-ρ0）V
mωd
式中：
ρ：提取液中硫酸盐离子浓度（mg/L）；
ρ0：空白液中硫酸盐离子浓度（mg/L）；
V：粉碎机中加水量（250ml）；
m：样品质量（g）；
ωd：样品中干物质含量（%）
计算平均值与最接近10mg/kg的结果，对于低于20mg/kg的结果报告 < 20mg/kg。
（3）结果报告：报告水溶性硫酸盐含量mg/kg
（4）评价：以Na2SO4计应 ≤ 0.25%
（5）注意事项
1）用手取样时应戴手套, 以免污染样品；
2）在分析前,用铝泊或塑料包裹样品。
2.1.10.2.6荧光测定
（1）1器材
1)紫外光源: 中心波长366 nm
2)照度计
（2）操作步骤
取100 mm × 100 mm大小试样,置于23℃±1℃,相对湿度50%±2 % 条件下不少于24h。打开紫外光源，调到满输出。调节光源至受试表面距离，使照射在样品表面的紫外线辐照强度为300μw/cm2±20μw/cm2。
（3）结果报告：规定面积内轴线大于1mm的荧光斑点数与有无大面积荧光。
（4）评价：包装材料无大面积荧光，轴线大于1mm荧光的斑点数应≤5个。
2.1.10.2.7包装完整性试验(ISO 11607)
（1）内部压力试验
将无菌包装浸没于水中增加其内压，观察有无气泡溢出。
（2）染色渗透试验
用含渗透性染料的液体涂满包装，观察封口区域与包装材料有无渗透现象。
（3）气体检测试验
用一种可追踪的气体对无菌包装加压，用合适的气体探头或其他测量设备检测材料与封口上有无敞开的痕迹。
（4）真空泄漏试验
将封口的包装浸没于有色试验溶液中,抽真空至-33.5kPa，维维持30s。恢复常压后观察有无试验溶液进入包装内。
2.1.10.2.8封口强度试验(ISO 11607)
（1）封口抗张强度试验(ASTM F-88)
1）器材
①拉力测试仪：牵引速度不小于10mm/min；
②样品切割器：将样品切割成宽度25mm，15mm或25.4mm，误差±0.5%。
2）操作步骤
①校准牵拉器。
②将已封口的受试样品切成25.4mm宽度，所切边缘平整并与封口方向成直角。
③将受试样品的每个底边分别夹在拉力测试仪上，样品封口应与夹子大致等距离。
④将样品侧面放到夹子中，调整位置使封口线与拉力方向垂直，允许完全放松，使试
验开始时封口不会受力。
⑤应在夹子分离速度250mm/mim～300mm/mim的条件下进行试验。
3)结果报告：报告使样品受力破损的最大力值及损坏的形式。
（2）爆裂/塑形试验(ASTM F-1140)
1）器材：
①开放性包装测试仪: 经开放一侧进行, 用于测试柔性包装
②闭合性包装测试仪: 通过穿刺内部加压, 用于测试完全密封的包装
③内部加压装置:
④压力调节器
2）操作步骤
①试验条件：将包装于温度23℃±2℃，相对湿度50%±5% 条件下至少放置24h。
②爆裂试验：将包装置于仪器中增加内部压力直到发生破损为止。
开放性包装试验：试验前先检查并记录包装内有无产品，然后将受试样品置于仪器中心调整测试仪。试验开始充气，持续加压到包装损坏为止。记录损坏位置和类型及导致损坏时的压力值。
闭合性包装试验：试验前先检查并记录包装内有无产品，然后将完全封口的包装放入试验设备中,并小心地在包装中心插入内部加压装置, 试验开始充气，持续加压到包装损坏为止。记录开始损坏时的压力值以及损坏位置和类型。
③塑形试验：
将样品放入仪器中，向其内部加压至规定压力值，保持一段时间。规定压力值通常为爆裂时压力值的80%。
开放性包装试验：将样品置于测试仪中，向包装内充气至一定压力值并保持15—30s。在加压与维持时， 检查包装封口受影响的程度或出现破裂倾向的变形。在规定时间或包装破裂时结束试验，记录经过时间与压力、包装损坏的位置与类型（材料或封口）以及导致损坏时的压力值。
闭合性包装试验：将样品置于测试仪中, 并小心地向包装中心插入内部加压装置。试验开始充气，至一定压力值, 并保持15s～30s。在加压与维持时，检查包装封口受影响的程度或出现破裂倾向的变形。在规定时间或包装破裂时结束试验，记录经过时间与压力、包装损坏的位置与类型（材料或封口）以及导致损坏时的压力值。
3）结果报告
①爆裂试验：发生破损时的压力值(kPa)及破损部位。
②变形试验：包装内部维持的压力值(kPa)与时间(s)。
2.1.10.3 与灭菌工艺的相容性鉴定
医疗用品包装，应能使灭菌因子（蒸汽、气体或辐照）穿透, 经灭菌后仍保留材料原有的微生物屏障与理化性能；对于环氧乙烷灭菌，还必须保持环氧乙烷及其衍生物低残留水平。医疗用品的包装与拟进行的灭菌工艺的相容性鉴定，包括灭菌因子穿透性能、环氧乙烷残留水平以及灭菌工艺对包装材料与封口的性能和标识的影响。
2.1.10.3.1灭菌因子穿透性能鉴定
(1)灭菌条件
1)压力蒸汽灭菌：121 0C, 20min～30 min ；134 0C, 2min～6 min。
2)环氧乙烷灭菌：温度540C, 环氧乙烷浓度600mg/L～1000mg/L, 作用至预定时间。
3)辐照灭菌：辐照剂量10kGy～30kGy
(2)操作要求
1)压力蒸汽灭菌：按ISO 11134/GB 18278-2000进行。
2)环氧乙烷灭菌：按ISO 11135/GB 18279-2000进行。
3)辐照灭菌：按ISO 11137/GB 18280-2000进行。
4)生物指示剂: 按ISO 11138/GB 18281-2000进行。
5)化学指示剂: 按ISO 11140/GB 18282-2000进行。
(3)结果报告：在灭菌条件下，化学指示剂与生物指示剂发生变化的百分率,应达100%。
2.1.10.3.2环氧乙烷残留水平测定
(1)器材
1)气相色谱仪: 配备FID检测器
2)通风橱：
3)注射针与筒及10μl微量注射器：注射筒应有良好的气密性能
4)天平: 准确至0.1mg
5)玻璃质容量瓶：带PTFE密封盖
(2)操作步骤
1)标准制备
①环氧乙烷标准的制备: 标准制备的装置见图2-3。
图2-3 环氧乙烷标准制备装置
打开阀门，量杯内水面出现气泡，以冒泡速率为1只/s，通气约15min，关闭EO气体钢瓶阀门,拔去进气针头，平衡片刻后拔去放气针头。按理想气体平衡方程计算B瓶内环氧乙烷的浓度。
CEO = 0.706p/(273+t)
式中：
CEO：环氧乙烷的浓度(μg/μl)
p：环境大气压(mmHg)
t：环境温度(℃)
②工作标准系列:
p=760mmHg, t=20℃时，CEO=1.83μg/μl
顶空法制备环氧乙烷标准:取容积为15ml（精确至0.01 ml），带有PTFE密封盖的集气瓶，用干燥纯氮吹扫1min，密闭待用。
用气密性良好的针筒，准确移取10μl贮备气，注入处理过的集气瓶中，混匀，制得环氧乙烷标准S1，内含标准条件下(ρ=760mmHg,t=20℃)环氧乙烷18.3μg。
采用逐级稀释的方法，制备环氧乙烷工作标准。
溶剂法制备环氧乙烷标准:将配置标准用的微量注射器预先低温保存，把装有环氧乙烷的气瓶置于干冰浴中，使得气态环氧乙烷转变为液态。
取装有60ml溶剂的容量瓶(100ml,带密封盖)称量（准确至0.1mg），滴入5滴液态环氧乙烷，重新称量，差减法计算环氧乙烷的质量，用溶剂定容至100ml，密封瓶口，摇匀。
逐级稀释配制不同浓度的环氧乙烷标准溶液。
③氯乙醇标准溶液的制备
取装有60ml水的容量瓶(100ml,带密封盖)称量（准确至0.1mg），逐滴加入氯乙醇（约100mg）重新称量，差减法计算氯乙醇的质量，用水定容至100ml，密封瓶口，摇匀。
逐级稀释配制不同浓度的氯乙醇标准溶液。
2) 样品采集：应具有代表性，采样量至少应满足平行测试用，产品出炉后按规范规定及时进行残留量检测。
3)仪器条件:
①环氧乙烷分析（FID检测器）
色谱柱：15%丁二酸乙二醇聚酯Chomosorb W HP 60目～80目；玻璃柱2m×3mm
柱温：120℃ 柱前压：108Psi
检测器：150℃
气化器：150℃
载气量：氮气35ml/min；氢气35ml/min；空气350ml/min
②氯乙醇分析（FID检测器）
色谱柱：CP7615 25m×0.25mm×0.2μm。
柱温：100℃(2min),40℃(1min),200℃(2min)。
进样口温度：200℃
检测器：220℃
载气：氮气
柱前压：40Psi
载气量:氦气5ml/min;氢气40ml/min;空气400ml/min 。
4)样品处理与分析（完全提取）
对于环氧乙烷残留可采用顶空提取或溶剂提取,氯乙醇残留一般采用溶剂提取，最为常用的溶剂是水。
①顶空法: 称取样品1g(准确至0.1 mg)，放入15ml的顶空瓶内，密封瓶口，置,于100℃恒温箱内，加热60min，取出冷却至室温，摇振片刻，取1μl进样。用干燥纯氮吹扫顶空瓶内容物30s，重新密封瓶口，重复以上操作，直至检测量低于首次检测量的10% ，累加环氧乙烷检测量，计算样品中环氧乙烷残留量。
②溶剂法：称取样品1g(准确至0.1 mg)，放入带密封盖的容器内，加入适量的溶剂10ml，密封瓶口，室温下放置24h。取1μl进样，计算样品中环氧乙烷与氯乙醇残留量。
③空白对照：在环氧乙烷、氯乙醇残留量的检测中，每次应按照样品处理方法加作空白样品，保证空白中无干扰峰；如果有干扰峰，需改变色谱条件，进一步分离干扰峰。
(3)结果报告：以mg/Kg报告试样的环氧乙烷残留水平。
(4)评价: 根据不同医疗用品限定标准确定环氧乙烷的安全性残留水平。。
(5)注意事项
环氧乙烷、氯乙醇对人体内脏器具有潜在毒性, 实验操作中应采取相应的防护措施，如：
在通风橱内进行，穿戴防护衣等。
2.1.10.3.3对包装材料与封口性能影响的鉴定
在灭菌前、后，测定材料的微生物屏障性能、机械性能及封口强度。
(1)对微生物屏障性能影响：按2.1.10.4.微生物屏障性能鉴定进行。
(2)对机械性能影响：按2.1.10.7.特殊性能鉴定进行。
(3)对包装完整性影响：按2.1.10.2.7包装完整性试验进行。
(4)对封口强度影响：按2.1.10.2.8封口强度试验进行。
2.1.10.3.4对包装标识的影响
(1)包装及其标识不因灭菌而变色。
(2)包装标识不因灭菌而变得难以辨认。
责任编辑:
参与评论
