消毒技术规范（六）
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2007-2-8 14:20:12
2.1.10.4 微生物屏障性能鉴定
2.1.10.4.1微生物屏障鉴定程序(见图2-4)
2.1.10.4.2包装材料不透气性试验—染色渗透试验
（1）器材
1)海绵：由醋酸纤维海绵制取，其尺寸为110mm×75mm×32mm，用防水胶粘剂与尺寸为110mm ×75mm ×12mm的钢板粘结，其总重控制在800g±50g。
2）平滑玻璃
3）吸纸：白色中快吸滤纸或色层分析纸
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微生物屏障评价 |
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包装材料是否透气？ |
是
否
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微生物屏障是否理想？ |
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做透气性材料微生物屏障试验 |
是
否
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所有材料是否均被认
可为微生物屏障？ |
是
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包装封口是否采用密封以提供微生物屏障？ |
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做密封的不透气性及连续性试验 |
是
否
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包装封口是否采用封闭？ |
否 是 否
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封闭目的是否为透气？ |
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做不透气封闭的微生物屏障试验 |
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做透气性封闭的微生物屏障试验 |
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所有密封和/或封闭是否都被认定为微生物屏障？ |
否
是
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包装体系不合格 |
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包装体系合格 |
图2-4 微生物屏障鉴定程序
4）染色液：浓度为1g/100ml的苋菜红水溶液，内含0.005% Cetrimide (dodecyl-, tetradecyl- and hexadecyl-,trimethylammonium bromide,-十二烷基四葵基及六葵基一三溴化铵的混合物)作润湿剂
5)浅盘：深度不小于15mm，最小面积为135mm×95mm
6)试样：每块试样面积应小于250mm×105mm
（2）操作步骤
1) 取一块面积与试样相等的吸纸，放在平坦的玻璃表面，而将待测试料的内表面与吸纸接触。
2) 将染色液倒入浅盘中，使海绵在浅盘内滞留1min，取出海绵，靠着盘的边把多余的液体挤除。
3) 将海绵放在试样上，保证海绵的边缘不在试样边部的15mm以内，并静止两min。
4) 取走海绵，检查纸的被污染情况（因颜料渗透所致），再对剩余的试样接上述程序重复进行。
（3）结果报告: 报告被沾染的吸收纸的试样数量。
（4）评价：吸收纸上不沾染颜料。
2.1.10.4.3透气性材料微生物屏障试验
（1）湿性条件下微生物屏障性能
1）器材
①试验微生物:金黄色葡萄球（ATCC 6538）
②培养基: 血琼脂、营养琼脂、葡萄糖营养肉汤
③真空干燥箱：100 mbar
2）操作步骤
①裁取5个边长为50mm的正方形试样, 于134℃压力蒸汽灭菌6min，100 mbar真空
干燥10min。
②将金黄色葡萄球接种6ml葡萄糖营养肉汤培养基，37℃培养16h后的菌悬液作活
菌计数。
③将预处理的试样外表面朝上平铺于无菌平皿内。
④用含107cfu/ml的金黄色葡萄球菌悬液滴到试样上，互不接触滴5滴, 每滴0.1 ml。
⑤将染菌试样在温度20℃～25℃, 相对湿度40%～50% 条件下放置, 液滴应在6h
内完全干燥。
⑥将染菌试样平铺于血琼脂培养基表面，完全接触，染菌面朝上，经5s～6s后将试样
移开。
⑦将血琼脂培养基于37℃培养16h～24h进行菌落计数。
3) 结果报告：每个血琼脂培养基平板上生长的菌落数以及5个平板上生长的菌落总数。
4)评价
① 5个培养基平板上均无菌生长，试验菌不能透过试样。
② 如5个培养基平板上生长的菌落总数≤5，则用20个试样复测，在20个平板上生长
的菌落数≤5为合格。
(2)干性条件下微生物屏障性能
1)器材
①试验瓶: 250 ml有盖玻璃瓶, 螺旋盖带有34 mm的孔：密封垫圈内径34 mm, 由聚四
氟乙烯(PTFE)材料制成或带PTFE覆盖层
②试验微生物:枯草杆菌黑色变种芽孢(ATCC 9372)
③培养基: 营养琼脂培养基
④铝泊、滤纸：
2)操作步骤
①将100 ml含106cfu/ml芽孢的酒精(96%)悬液与100克无菌石英粉(0.04mm～0.15mm)混合,50℃干燥16h。
②在试验瓶内加入20 ml营养琼脂培养基并使凝固。
③将10个直径为42 mm的圆形试样分别置于试验瓶两个密封垫圈之间，并用螺旋盖适当压紧，使试样被密封垫圈紧压在瓶沿上。
④将试验瓶用铝泊包裹，于120℃灭菌20min。
⑤灭菌并冷却后，在试样上均匀撒上0.25g石英粉。
⑥将试验瓶放入培养箱加热到50℃, 再放入冷藏箱降至10℃, 如此为1次, 重复5次。
⑦将试验瓶置37℃培养24h。
3)结果报告: 每个试样透过的菌落数和10个试样透过的菌落总数。
4)评价：每个试样透过的菌落数应≤5cfu，10个试样透过的菌落总数应≤15cfu。
(3)多孔包装材料试验（暴露容器法）
1)器材
①气雾试验柜（真空泵，流量计，喷雾器，计量器，压缩空气系统）
②枯草杆菌黑色变种芽孢（ATCC 9372）
③SCDA培养基
④过滤装置: 直径47mm～50mm与孔径0.45μm的滤膜，过滤器，支架等
⑤喷雾器
⑥切割机
2）操作步骤：
①样品准备：切取与滤膜相同大小（47mm或50mm）试样3个, 于试验前放于无菌平皿内。
②在每个滤器底部放置0.45μm无菌滤膜，然后在滤膜上方放置装有测试材料样品， 同时设阴性与阳性对照及阳性对照材料各3个。
③连接试验柜及配套装置，喷雾装置。
④配制5×107cfu/ml芽孢悬液3ml放入喷雾器。
⑤打开试验柜内风扇。
⑥打开真空泵，调节流量计流速至2.8L/min，使15min回收菌量为1×106cfu/样本。
⑦调节喷雾器流量以制成合适的气溶胶。
⑧计时，作用15min后关闭喷雾器，真空泵和风扇。
⑨过滤排气15min。
⑩以无菌操作方法移去样品，取下滤膜，洗脱芽孢，30℃～35℃培养24h，活菌计数测定芽孢含量。
3)计算
微生物屏障能力 LRV = logN0 ―logN1
式中：
N0 : 对照组平均细菌菌落数（cfu）；
N1过测试样品的平均细菌菌落数（cfu）
4)结果报告：通过测试材料样品的细菌的LRV（log减少值）。
2.1.10.4.4封闭的微生物屏障试验（过滤、组合、弯道）
按2.1.10.4.3(2)的试验方法进行。
2.1.10.4.5热熔或胶粘剂密封的不透性和连续性试验
(1)器材
1)裁刀、巴斯德移吸管、橡胶手套、带针头注射器及橡胶手套
2)试剂: 0.15% Rhodamin B
0.15%表面活性剂
5.0%正丙醇
94.7%蒸馏水
3)试样：从一边的中央切下试片，取出并折叠试片，使敞开的一边位于顶部，用针筒注满后闭合包装，然后用胶粘膜封闭针孔。
(2)操作步骤
1) 透明及不透明包装
用巴斯德移溶液管或注射器将1～5（滴）试液向下流淌到每一个封闭点上并充分湿润，然后让试样在此状况下静止5min。
2) 不透明包装
与上述透明包装一样处理，但湿润后需除去过剩的试液，使试片在600C下干燥15min, 小心拨开密封处；用注射针筒注液的包装则应在干燥之前在中央剖开。
(3)结果报告: 记下颜料渗透次数及渗透在包装上的位置。
(4)评价：应无颜料完全透过密封。
(5)注意事项
小心勿接触试液，因色点一旦沾染就很难去除。
2.1.10.4.6不透气封闭的微生物屏障试验(非热熔或粘合形成的封闭、硬质容器试验程序)
(1)原理：本方法可用来测定与容器在外层超过弹性极限下至少在大气压下保持10min密封的能力，为了建立此种产品的特定弹性极限，使用与小试容器同样方法制造尺寸相同的试验容器，然后将此试验容器加压到小试中所确定的压力值。
(2)预试1
1) 器材
真空泵：抽真空能力约为20L/min
压力表：0 kPa～25kPa，精密度等级1.6
试验帽：用以复盖容器的灭菌部位
试样：选用同类中最大而且是空的容器
2) 操作步骤
将试验帽放在容器上，从而对容器构成气密。对容器抽真空，然后在其表面出现最大变形点，此时该点在大气压下开始变形。
3) 结果报告:使试样变形时的压力值（kPa）。
(3)预试2
1)器材: 同2.1.10.4.6(2)所述，再附加测量容器永久变形的体系。
2)操作步骤
将试验帽放在容器之上，以确保使它与容器之间形成气密，通过抽真空及通风的交替进行，建立起低于大气压的压力，使永久变形达到5mm ± 0.5mm。
3)结果报告: 变形量达到5mm时的负压值（-kPa）。
(4)正式试验
1) 试样：尺寸同2.1.10.4.6（2）的两个容器.
2）操作步骤
将试验帽置于容器上，以保证与容器之间形成气密，按2.1.10.4.6（2）抽真空到大气压以下2kPa关上载流阀，10min后读取负压值。
3) 结果报告: 试验条件下达到的负压值（-kPa）。
4) 评价：如果两个容器均保持负压，则测试将被视为有效。
2.1.10.5 毒性鉴定
2.1.10.5.1要求: 接触医疗用品与病人的包装材料，在灭菌前、后均应无皮肤刺激、眼刺激与致敏作用以及无细胞毒性。
2.1.10.5.2试验方法
（1）皮肤刺激、眼刺激、致敏试验， 按本规范2.3消毒剂毒理学实验技术进行。
（2）细胞毒性:按“GB/T16886.5-1997医疗器械生物学评价第五部分细胞毒性试验”方法进行。
2.1.10.6 无菌有效期鉴定
2.1.10.6.1样品放置条件
（1）自然留洋法
将试样放置室温下，模拟室内货架贮存，每周记录湿度与温度，分别于放置前与放置后第0、3、6、9、12（个月）及以后每年取样进行检测。
（2）加速老化法
把试样置于温度为60℃～65℃、相对湿度为80%±5%的干燥器内7d，分别于放置前后取样进行检测, 相当于室温下180d。
2.1.10.6.2鉴定项目
（1）微生物屏障性能：按2.1.10.4. 微生物屏障性能鉴定进行。
（2）无菌性保持：按无菌检查法进行。
（3）包装完整性：按2.1.10.2.7包装完整性试验进行。
（4）封口强度：按2.1.10.2.8封口强度试验进行。
（5）机械性能：按2.1.10.7.特殊性能鉴定进行。
2.1.10.7 特殊性能鉴定(EN 868)
2.1.10.7.1化学指示物鉴定
印刷于包装上的灭菌过程化学指示物，按ISO 11140/GB 18282-2000测试。
2.1.10.7.2抗静电性能（表面阻力）鉴定
低阻力可避免吸引气载颗粒；当激光外科时，避免手术室内电场干扰的危险。如制造商特指材料具有抗静电性能,可按下述方法测试。
(1)器材
1）电极：由大小不同的环形电极呈同心圆样套叠
2）平底盘：不小于1014Ω，尺寸：250mm×250mm×10mm，试验中用来放置样品
3）欧姆计：在500V时满刻度偏转不小于1014Ω，精确度±5%
4）薄纸
5) 清洁剂：丙醇、三氯乙烷或三氯乙烯
(2)操作步骤（试验环境条件为温度20℃±2℃，相对湿度40%±2%）
1）制备三份样品，每份尺寸≥250mm×250mm。
2）用薄纸沾清洁剂清洁电极下表面和底盘上表面。
3）测试空白试验的电阻（Ω）。
4）将试样受试面朝上放在底盘中，电极放在上面。通过500V电流15s±1s，测定表面电阻（Ω）。
5）重复测定三份样品，计算结果与三份样品平均值：
表面阻力（ρ）= 2πR
log（r2/r1）
式中：
R：测试的电阻值（Ω）
r1：电极内径（mm）
r2：电极外径（mm）
(3)结果报告：三份试样表面电阻力（Ω）和平均值。
(4)评价：条件灭菌包装的表面阻力应<1×1013Ω。
2.1.10.7.3对醇（低表面张力液体）的抵抗性
制造商特指材料可接触低表面张力液体，需进行本试验。
(1) 器材
1）水-醇溶液：70%乙醇，30%蒸馏水
2）滴管：0.05ml/s
3）透明塑料板：250 mm ×1000 mm ×0.63mm
4）三个环状三脚支撑架
5）四块玻璃
6）高强度光源，放于板于玻璃之间
7）计时器
8）试样：200 mm×200 mm ，按EN 20187 在标准气温下至少放置4h
(2) 操作步骤
1）将塑料板放在环状三脚支撑架上，玻璃放在其下，观察板下面。
2）将4个试样平放在板上，用滴管将3滴试液分别滴在每个试样的不同位置。
注：滴管应靠近样品，并轻轻滴在材料上。
3）最后一滴开始计时，5min后通过玻璃和光源观察试样，记录渗透情况。
注：正常情况下，完全或部分渗透的证据为立即在材料另一面观察到试液。
(3)评价:有渗透：对醇抵抗率<7
无渗透：对醇抵抗率为>7
2.1.10.7.4平纹纸（plain paper）
(1) 条件包装的撕裂抗力
1）器材
①Elmendorf撕裂测试器
②摆锤
③裁剪工具或刀
2）操作步骤
①试样制备：对试样两面进行标识。在同份试样中切割出4个相同尺寸的矩形，宽度为50mm±2mm～76mm±2mm，未撕裂长度为43.0mm±0.5mm。将切割后的4片试样为一次，制备十次试验试样。
②升起摆锤至初始位置，用摆锤释放装置将其固定。
③将试样放入卡钉中，操作刀在试样上产生裂缝。调整指针。突然压下摆锤释放装置，垂下摆锤，记录刻度读数。
④将摆锤和指针回复到原位，并取出撕裂的试样。
⑤在主要方向上重复上述试验步骤，共10次。
⑥结果计算：以每个方向试验刻度读数求平均刻度读数，计算撕裂抗力（F）与：
F（mN） = F P/ n
式中：
F：平均刻度读数（mN）
P：直接的撕裂抗力读数（mN）
n：同时撕裂纸的张数（通常为4）
3）结果报告：撕裂抗力（mN）
4)评价：条件包装的撕裂抗力应≥500mN。
(2)条件包装的透气性
1) 器材
①气压机(产生127 kPa的空气)
②压力稳定性存储器(10 L容积,安装在气压机和流量计之间)
③压力控制装置
④气流计
⑤测试器
2) 操作步骤
①试样10份,标识正反面,面积≥50mm×50mm。
②调试气流计,选择变化区域>1.47 kPa的20%。
③把阀们放在气流计的出口，使空气流过正确的出口。
④在测试器上夹住试纸>5秒钟后，记录读数。
⑤结果计算：透气性 P=0.0113q ；q：通过测试区域空气的流速，用ml/s表示。
3）结果报告：透气性P（um/Pa·s）。
4) 评价：包装材料在1.47 kPa气压下的透气性应≥1.7um/Pa·s。
(3) 条件包装的爆裂强度
1）器材
①夹钳装置：上位夹钳最小为6.35mm。连续的螺旋形60°V形槽，至少0.25mm深，
螺距0.9mm槽起始于环形孔边3.2mm，孔径4mm。夹钳压力不低于430 kPa
②隔板：圆形，弹性材料制成, 用夹钳夹住夹钳下3.5mm，使用30kPa±10kPa压力可使隔板凸起超过夹钳上表面9mm
③液压体系：提供隔板下面的受控液压，直至试验纸破裂。由活塞推动液体（化学纯甘油，含腐蚀抑制剂的低黏度硅酮油）产生压力，推动隔板。泵速率为95 ml/mim±15ml/mim
④压力表：标尺最小直径95mm，最小弧度270°，刻度容量精确到0.5%，刻度为70格。满刻度时，液压液体容量不超过0.4ml
⑤试样：面积大于夹钳面积，试验纸不能有水印、折痕或可见的破损
2）操作步骤
标准大气压下试验，选择合适压力表。用夹钳夹住试验样本,按规定速率给于液压，直至试验样本破裂，读取压力表上压力（三位有效数字）。如需要每个表面的单独结果，每个结果应进行20次试验。
②计算
爆裂强度P（kPa） = B
N
式中：
B：最大液压平均值
N：同次试验样本数
③ 结果报告：爆裂强度P（Kpa）。
④评价：条件包装的爆裂强度应≥110 kPa。
(4)装的湿爆裂强度测定
1)器材
①爆裂试验装置：见2.1.10.6.4(3).
②恒温水浴箱: 可使试样处于垂直位
③浸泡液: 蒸馏水或去离子水
④试样: 10份
2）操作步骤
①浸泡：将试样浸泡于23℃±1℃水中。试样长轴应垂直，顶端在水下距水面
(25mm±mm)。浸泡10min后，取出试样，吸干水份后立即测试。
②测试：浸泡后试样按2.1.10.6.4（3）进行，每个表面重复测试5次。
③计算：浸泡10min后的平均爆裂强度（P）
爆裂强度P = B
N
式中：
B：最大爆裂强度（kPa）
N：同次试验样本数
3)结果报告：浸泡10min后的平均湿爆裂强度（P）
4)评价：浸泡10min，包装材料的湿爆裂强度应≥35 kPa。
（5）包装对水的抵抗性
1) 器材
①紫外线光源和光度仪
②平盘：200mm×150mm×15mm
③干燥器
④计时器
⑤粉末分配器：孔隙 0.125mm～0.150mm，另一边关闭
⑥干指示粉：至少10g经研磨的干蔗糖（含10mg钠荧光）, 通过0.063mm～0.075mm微孔筛至少混合5次, 使粒径0.063mm～0.075mm, 于1100C～1050C下烘干，最后将干指示粉移入粉末分配器。在粉末分配器内的干指示粉应贮存于干燥器或1050C～1100C烘箱内
2) 操作步骤
取10张试纸，每张60 mm×60mm，分成两组，每组5张，一组为边朝上,另一组为顶角朝上。每个样品折叠两次，沿两个直角边缘，每个10mm高。在规定温度下，将纯水放入平盘至10mm深。开启紫外灯，并使达到满输出，调节灯的距离使平盘水中的辐照强度为300μw/cm2±20μw/cm2。将分配器内的指示粉稀散地喷于试样表面。在紫外灯下，将试纸漂浮于水上，记录出现荧光的时间。用其余9个试样重复这一操作。
纸对水的抵抗性受水温影响，应控制在230C±10C。
3)结果报告: 纸每边的平均渗透时间以秒(s)报告。
4) 评价：试验条件下, 包装透过水的时间应≥30s。
(6) 包装材料的孔径
1) 器材
①实验液体: 乙醛-R(能彻底浸湿纸，低溶解检验材料，纤维不涨大，表面张力恒定，
无毒性，可燃性低，无泡沫)
②表面张力测定计
③圆柱形容器: 由黄铜制成, 能放于被环状夹具和螺旋夹紧的测试材料上, 能使测试材料用内径50mm的合成橡胶垫圈密封。
④压力测量装置
⑤空气贮藏器: 容量2.5L。
2) 操作步骤
①试样制备: 从材料上取10个75mm×75mm的正方形测试样本, 尽可能短时间用手拿,不要折叠。
②操作实验在标准大气压下进行。
③以表面张力测定计测定试验液体的表面张力,使接近0.5mN/m。
④在玻璃盘中，将测试样浸到试验液15mm深处, 至少浸透3min后，用镊子将样品夹到测试头上。在试样上倒足以把材料完全覆盖的液体, 记录温度。
⑤随着试样下面空气压力增加，上表面不同位置出现气泡, 持续观察并增加压力, 即时记录第一个气泡出现时的压力
⑥结果计算
小孔半径r(μm) = 2T × 106/ρPg (或简化为r = 204×T/ P)
式中：
T: 测试温度时，试验液体的表面张力(mN/m)
g: 重力加速度(mm/s2)
ρ:测试温度时，水的密度(mg/mm3)；
P: 水泡压力(mmH2O, 1 mmH2O = 980665 Pa)
3) 结果报告：气孔直径(μm)。
4) 评价: 包装材料最大孔径应≤50 μm。
（7）条件包装的抗张强度
1) 器材
①张力测试仪
②夹钳
③切割装置
④电子积分仪
2) 操作步骤：
①取10张试样，每张宽度为15mm，长度为180mm, 试验区应无折痕、裂缝或水印。将试样放入夹钳中，调节速率为20mm/min±5mm/min。开始试验, 直至试样断裂，记录所施加的最大张力
②结果计算
抗张强度S（kN/m ）= F / Wi
式中：
F： 最大张力平均值（N）
WI：试样初始宽度（mm）
3)结果报告：试样的平均抗张强度S（kN/m）。
4)评价：条件包装的抗张强度,MD法应≥1.33kN/m,CD法应≥0.67kN/m。
（8）包装的湿抗张强度（ISO 3781）
1）器材：
①张力测试仪
②夹钳：夹钳之间距离控制在100mm
③切割装置
④电子积分仪
⑤浸泡用水：蒸馏水或去离子水
⑥试样：长度150mm
2）操作步骤：
①将试样浸泡于浅盘的蒸馏水中。对强吸水纸只要浸湿试样中心部分，而夹住部分保持
干燥。
②将试样围成环状，中心部位向下，将环顶部浸没在水中, 浸湿的长度为25mm～50mm。
③浸泡1h后，取出纸环，用吸水纸小心吸干环状试样顶部，去除残留水份。
④将纸环铺平，置张力测试仪中，使浸湿的中心部位距夹钳距离相等。在20s±1s内加压，进行张力强度测试。
⑤测试直向、横向各重复10次。
⑥结果计算：
抗张强度S(kN/m )= X
W
式中：
X：仪表读数（N）
W：试样宽度（mm）
3)结果报告：试样浸泡小时的湿抗张强度（kN/m）。
4)评价：包装的湿抗张强度,MD法应 ≥ 0.33 kN/m,CD法应≥0.27kN/m。
(9)包装材料的吸水性（Cobb试验）(ISO 535)
1)器材
①吸水性测试仪：平面，金属圆筒内径112.8mm±0.2mm，高>10mm
②金属滚筒：表面光滑，200mm宽，直径90mm±10mm，重量10kg±5kg
③天平：精确到1mg
2)操作步骤
①在温度23℃，相对湿度50% 的标准环境条件下, 至少制备10份样品(不用手直接接触样品), 尺寸大于圆筒10mm, 合适的宽度为125 mm。
②试样称重，精确到1mg。将试样放于底盘上。将圆筒放在试样上固定，防止水从圆筒和试样之间泄露。
③吸水：向圆筒里注水100ml±5ml，水高度为10mm，计时。按下表2-7选择试验时间。
④到下表规定时间, 去除多余水后迅速移去圆筒。取出试样，面朝上放于台面的吸水纸上，60s后将另一张吸水纸放在试样表面上，用手动式滚筒擦去多余水份。
⑤吸水后立即将试样折叠，湿的一面向内，再次称重。
⑥试验重复5次。
表 2-7 试验时间选择表
|
试验时间（s） |
标记 |
去除多余水份时间（s） |
试样吸水时间(s) |
|
30 |
Cobb30 |
20±1 |
30±1 |
|
60 |
Cobb60 |
45±1 |
60±2 |
|
120 |
Cobb120 |
105±1 |
120±2 |
|
300 |
Cobb300 |
285±1 |
300±2 |
|
1800 |
Cobb1800 |
1755±1 |
除去水分后15±2 |
⑦结果计算：平均吸水量，精确到0.5g/m2。
吸水性（g/m2）= （m2 - m1）F
式中：
m1：试样干重（g）
m2：试样湿重（g）
F：10000（通常受试面积100cm2）
3) 结果报告：在试验温度下暴露60s时的Cobb60值。
4)评价: 在试验温度下暴露60s，包装材料的表面吸收Cobb60应≤20g/m2。
2.1.10.7.5皱纹纸（Creped paper）
(1) 皱纹纸应经增加纤维而具皱纹。
(2) 包装对水的抵抗性：按2.1.10.7.4(5)的方法进行测试。
(3)包装材料的气孔大小：按2.1.10.7.4(6)的方法进行测试。
(4)条件包装的抗张强度：按2.1.10.7.4(7)的方法进行测试。
(5)包装的湿抗张强度：按2.1.10.7.4(8)的方法进行测试。
2.1.10.7.6无纺布包装材料
这里所指的无纺布为由纺织或/和无纺纤维（不包括矿物纤维）粘合而成的网状结构。
(1)条件无纺布包装的撕裂抗力：按2.1.10.7.4(1)的方法进行测试，条件无纺布包装的内撕裂抗力应≥750 mN。
(2) 条件无纺布包装的爆破强度：按2.1.10.7.4(3)的方法进行测试，条件无纺布包装的爆破强度应≥130 kPa。
(3) 无纺布包装的湿度爆破强度：按2.1.10.7.4(4)的方法进行测试，无纺布包装的湿度爆破强度应≥90 kPa。
(4) 无纺布包装对盐水的抵抗性
1)器材
①玻璃瓶: 容积1125ml, 有金属螺盖, 带有配合瓶盖的聚四氟乙烯(PTFE)垫圈和橡皮密封圈，螺纹口直径63.5mm，瓶底有一个空气释放孔
②盐水溶液: 浓度0.9%（m/v）, 温度21℃±1℃
③试样: 至少3块200mm×200mm试样, 将PTFE垫圈依次放在试样上表面，临摹圆周并切下
2)操作步骤
①确保密封圈和垫圈干燥，将PTFE垫圈放在玻璃瓶盖上，再将试样放在垫圈上，最后将橡胶放在试样上。
②用一个手指放在有金属螺盖的玻璃瓶出口孔的塞子上，倒入足量盐溶液使达114mm高度。将含有试样的瓶盖拧上并保证足以防止渗漏, 翻转玻璃瓶并小心地放于有盖平皿表面。从平皿上移去孔塞, 并记录开始时间。
③盐水一透过试样立刻停止实验并记录结束时间。
④试验至少重复3次。
3)结果报告: 在试验条件下, 无纺布包装不透过盐水的平均时间(min)。
4)评价：无纺布包装对盐水的抵抗性 应≥75min。
(5) 条件无纺布包装的透气性
1)器材: 弗雷泽空气渗透装置(或其它相似原理和性能的装置)
2)操作步
①将样品放在仪器中央的孔上（孔内径69.85mm）, 用蝶形螺母蹦紧。
②选择适当大小的9个孔(直径范围从1.0mm到16.0mm), 采用不同的气流量。
③打开发动机, 使穿过纸的气压为12.7mmH2O。
④垂直压力计压力应高于76.2mmH2O, 如小于此值，测量过程中应采用更小的孔。
⑤将刻度盘转到零，关闭发动机并移去样品。
⑥通过转换表，将气流量在垂直压力计上的度数转换成m3/min。
3) 结果报告: 条件无纺布包装在试验条件下的透气量(L) 。
4) 评价：条件无纺布包装的透气性，应≥10 L/min/100cm2。
(6)条件无纺布包装的抗张强度：按2.1.10.7.4(7)的方法进行测试，条件无纺布包装的抗张强度应≥1.00 kN/m。
(7) 无纺布包装的湿抗张强度: 按2.1.10.7.4(8)的方法进行测试，无纺布包装的湿抗张强度应≥0.75 kN/m。
2.1.11一次性使用卫生用品鉴定实验技术
2.1.11.1定义
一次性使用卫生用品（disposable sanitary products）：是指使用一次后即丢弃的，与人体直接或间接接触的，并为达到人体生理卫生或卫生保健（抗菌或抑菌）目的而使用的各种日常生活用品，产品性状可以是固体也可以是液体。例如，一次性使用手套或指套(不包括医用手套或指套)、纸巾、湿巾、卫生湿巾、卫生棉（棒、签、球）、化妆棉（纸、巾）、纸质餐饮具、电话膜、帽子、口罩、内裤、妇女经期卫生用品(包括卫生护垫)、尿布等排泄物卫生用品(不包括皱纹卫生纸等厕所用纸)、避孕套等, 以下简称卫生用品。
2.1.11.2产品卫生标准
(1) 外观必须整洁，符合该卫生用品固有性状，不得有异常气味与异物。
(2) 不得对皮肤与粘膜产生不良刺激与过敏反应及其他损害作用。
(3) 产品微生物学指标: 须符合下表2-8的规定。
表 2-8 产品微生物学指标
|
产品种类 |
初始污染菌1）
cfu/g |
细菌菌落总数cfu/g或ml |
大肠菌群 |
致病性化脓菌2) |
|
|
手套或指套、纸巾、湿巾、帽子、内裤、电话膜 |
|
≤200 |
不得检出 |
不得检出 |
≤100 |
|
抗菌（或抑菌）液体产品 |
|
≤200 |
不得检出 |
不得检出 |
≤100 |
|
卫生湿巾 |
|
≤20 |
不得检出 |
不得检出 |
不得检出 |
|
口罩
普通级
消毒级 |
≤10000 |
≤200
≤20 |
不得检出
不得检出 |
不得检出
不得检出 |
≤100
不得检出 |
|
妇女经期卫生用品
普通级
消毒级 |
≤10000 |
≤200
≤20 |
不得检出
不得检出 |
不得检出
不得检出 |
≤100
不得检出 |
|
尿布等排泄物用品
普通级
消毒级 |
≤10000 |
≤200
≤20 |
不得检出
不得检出 |
不得检出
不得检出 |
≤100
不得检出 |
|
避孕套 |
|
≤20 |
不得检出 |
不得检出 |
不得检出 |
|
注：1) 如初始污染菌超过表内数值，应相应提高杀灭指数，使达规定的细菌与真菌限值。
2) 致病性化脓菌指绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌与溶血性链球菌。 | |||||
(4) 卫生湿巾除必须达到上表微生物学标准外，对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的杀灭率须≥90%，。如需标明对真菌的作用，还须对白色念珠菌的杀灭率≥90%,其杀菌作用在室温下至少须保持1年。
(5) 抗菌（或抑菌）产品除必须达到上表同类同级产品微生物学标准外，对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌率须≥50%(溶出性)或>26%(非溶出性)，如需标明对真菌的作用，还须对白色念珠菌的抑菌率≥50%(溶出性)或>26%(非溶出性)，其抑菌作用在室温下至少须保持1年。
(6) 任何经环氧乙烷消毒的卫生用品出厂时，环氧乙烷残留量必须≤250μg/g。
2.1.11.3生产环境卫生标准
(1) 装配与包装车间空气中细菌菌落总数应≤2500cfu/m3。
(2) 工作台表面细菌菌落总数应≤20cfu/cm2。
(3) 工人手表面细菌菌落总数应≤300cfu/只手，并不得检出致病菌。
2.1.11.4消毒效果生物监测评价
(1) 环氧乙烷消毒：对枯草杆菌黑色变种芽孢（ATCC 9372）的杀灭对数值应≥3。
(2) 电离辐射消毒：对短小杆菌芽孢E 601（ATCC 27142）的杀灭对数值应≥3。
(3) 压力蒸汽消毒：对嗜热脂肪杆菌芽孢（ATCC 7953）的杀灭对数值应≥3。
2.1.11.5产品毒理学鉴定
(1) 鉴定指标
当原材料、生产工艺等发生变化可能影响产品毒性时，应按下表根据不同产品种类提供有效的(经政府认定的第三方)成品毒理学测试报告。
表 2-9 产品毒理学试验选项
|
产 品 种 类 |
皮肤刺激试验 |
阴道粘膜刺激试验 |
|
|
手套或指套、内裤 |
? |
|
? |
|
抗菌（或抑菌）液体产品 |
? |
根据用途选择* |
? |
|
湿巾、卫生湿巾 |
? |
根据用途选择* |
根据材料选择 |
|
口罩 |
? |
|
|
|
妇女经期卫生用品 |
|
? |
? |
|
尿布等排泄物卫生用品 |
? |
|
? |
|
避孕套 |
|
? |
? |
|
用于阴道粘膜的产品须做阴道粘膜刺激试验，但无须做皮肤刺激试验。 | |||
(2) 试验方法：
皮肤刺激试验、阴道粘膜刺激试验和皮肤变态反应试验方法按本规范中“消毒剂毒理学
实验技术”的相应试验方法进行。
固体产品的样品制备方法按照5.3 进行。
注： 1）用于皮肤刺激试验中的空白对照应为：生理盐水和斑贴纸。
2）在皮肤变态反应中，致敏处理和激发处理所用的剂量保持一致。
(3) 样品制备：
1) 皮肤刺激试验和皮肤变态反应试验
以横断方式剪一块斑贴大小的产品。对于干的产品，如尿布、妇女经期卫生用品，用生理盐水润湿后贴到皮肤上，再用斑贴纸覆盖。湿的产品，如湿巾，则可以按要求裁剪合适的面积，直接贴到皮肤上，再用斑贴纸覆盖。
2) 阴道粘膜刺激试验
①干的产品（如妇女经 期卫生用品）以横断方式剪取足够重量的产品，按1g/10ml 的比例加入灭菌生理盐水，密封搅拌置于37oC±1oC下24 h。冷却到室温，搅拌后析取样液备检。
②湿的产品（如卫生湿巾）
在进行阴道粘膜刺激试验的当天，挤出湿巾里的添加液做为试样。
(4) 判定标准
以按本规范中“毒理学试验结果的最终判定”的相应部分作为试验结果判定原则
2.1.11.6产品微生物污染鉴定
(1) 产品采集与样品处理
于同一批号的三个运输包装中至少抽取12个最小销售包装样品，1/4样品用于检测，1/4样品用于留样，另2/4样品（可就地封存）必要时用于复检。 抽样的最小销售包装不应有破裂，检验前不得启开。
在100级净化条件下用无菌方法打开用于检测的至少3个包装，从每个包装中取样，准确称取10g±1g样品。剪碎后加入到200ml灭菌生理盐水中，充分混匀，得到一个生理盐水样液。液体产品用原液直接作样液。
如被检样品含有大量吸水树脂材料而导致不能吸出足够样液时，稀释液量可按每次50ml递增，直至能吸出足够测试用样液。在计算细菌菌落总数与真菌菌落总数时相应调整稀释度。
(2) 细菌菌落总数与初始污染菌检测方法
1) 操作步骤
待上述生理盐水样液自然沉降后取上清液作菌落计数。共接种5个平皿 ，每个平皿中加入1ml样液，然后用冷却至45oC左右的熔化的营养琼脂培养基15ml～20ml倒入每个平皿内混合均匀。待琼脂凝固后翻转平皿置35oC±2oC培养48 h后，计算平板上的菌落数。
2) 结果报告
菌落呈片状生长的平板不宜采用；计数符合要求的平板上的菌落，按下式计算结果：
X1 = A × K / 5
式中：
X1：细菌菌落总数，cfu/g 或 cfu/ml；
A：5块营养琼脂培养基平板上的细菌菌落总数；
K：稀释度。
当菌落数在100以内，按实有数报告，大于100时采用二位有效数字。
如果样品菌落总数超过标准值，按下述方法进行复检和结果报告。
3) 复检方法
将留存的复检样品依前法复测2次，2次结果平均值都达到标准的规定，则判定被检样品合格；其中有任何1次结果平均值超过标准规定，则判定被检样品不合格。
(3) 大肠菌群检测方法
1) 操作步骤
取样液5 ml接种50 ml乳糖胆盐发酵管，置35oC±2oC培养24 h，如不产酸也不产气，则报告为大肠菌群阴性。
如产酸产气，则划线接种伊红美蓝琼脂平板，置35oC±2oC培养18h～24h，观察平板上菌落形态。典型的大肠菌落为黑紫色或红紫色，圆形，边缘整齐，表面光滑湿润，常具有金属光泽，也有的呈紫黑色，不带或略带金属光泽，或粉红色，中心较深的菌落。取疑似菌落1-2个作革兰染色镜检，同时接种乳糖发酵管，置35oC±2oC培养24 h，观察产气情况。
2) 结果报告
乳糖胆盐发酵管产酸产气，乳糖发酵管产酸产气，在伊红美蓝平板上有典型大肠菌落，革兰氏染色为阴性无芽孢杆菌，可报告被检样品检出大肠杆菌。
(4) 绿脓杆菌检测方法
1) 操作步骤
取样液5 ml，加入到50 ml SCDLP培养液中，充分混匀，置35oC±2oC培养18 h～24 h。如有绿脓杆菌生长，培养液表面呈现一层薄菌膜，培养液常呈黄绿色或蓝绿色。从培养液的薄菌膜处挑取培养物，划线接种十六烷三甲基溴化铵琼脂平板，置35oC±2oC培养18h～24h，观察菌落特征。绿脓杆菌在此培养基上生长良好，菌落扁平，边缘不整，菌落周围培养基略带粉红色，其他菌不长。取可疑菌落涂片作革兰染色，镜检为革兰氏阴性菌者应进行下列试验：
氧化酶试验：取一小块洁净的白色滤纸片放在灭菌平皿内，用无菌玻棒挑取可疑菌落涂在滤纸片上，然后在其上滴加一滴新配制的1%二甲基对苯二胺试液，30s内出现粉红色或紫红色，为氧化酶试验阳性，不变色者为阴性。
绿脓菌素试验：取2个～3个可疑菌落，分别接种在绿脓菌素测定用培养基斜面，35oC±2oC培养24 h，加入三氯甲烷3 ml～5ml，充分振荡使培养物中可能存在的绿脓菌素溶解，待三氯甲烷呈蓝色时，用吸管移到另一试管中并加入1mol/L的盐酸1ml，振荡后静置片刻。如上层出现粉红色或紫红色即为阳性，表示有绿脓菌素存在。
硝酸盐还原产气试验：挑取被检菌纯培养物接种在硝酸盐胨水培养基中，置35oC±2oC培养24 h，培养基小倒管中有气者即为阳性。
明胶液化试验：取可疑菌落纯培养物，穿刺接种在明胶培养基内，置35oC±2oC培养24h，取出放于4oC～10oC，如仍呈液态为阳性，凝固者为阴性。
42oC生长试验：取可疑培养物，接种在普通琼脂斜面培养基上，置42oC培养24h～48h，有绿脓杆菌生长为阳性。
2) 结果报告
被检样品经增菌分离培养后，证实为革兰阴性杆菌，氧化酶及绿脓杆菌试验均为阳性者，即可报告被检样品中检出绿脓杆菌。如绿脓菌素试验阴性而液化明胶、硝酸盐还原产气和42oC生长试验三者皆为阳性时，仍可报告被检样品中检出绿脓杆菌。
(5) 金黄色葡萄球菌检测方法
1) 操作步骤
取样液5ml，加入到50ml SCDLP培养液中，充分混匀，置35oC±2oC培养24 h。自上述增菌液中取1或2接种环，划线接种在血琼脂培养基上，置35oC±2oC培养24 h～48 h。在血琼脂平板上该菌菌落呈金黄色，大而突起，圆形，不透明，表面光滑，周围有溶血圈。挑取典型菌落，涂片作革兰染色镜检，金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，排列成葡萄状，无芽胞与荚膜。镜检符合上列情况应进行下列试验：
甘露醇发酵试验：取上述菌落接种甘露醇培养液，置35oC±2oC培养24 h，发酵甘露醇产酸者为阳性。
血浆凝固酶试验：玻片法：取清洁干燥载玻片，一端滴加一滴生理盐水，另一端滴加一滴兔血浆，挑取菌落分别与生理盐水和血浆混合，5min如血浆内出现团块或颗粒状凝块，而盐水滴仍呈均匀混浊无凝固则为阳性，如两者均无凝固则为阴性。凡盐水滴与血浆滴均有凝固现象，再进行试管凝固酶试验。试管法：吸取1：4新鲜血浆0.5ml，放灭菌小试管中，加入等量待检菌24h肉汤培养物0.5ml。混匀，放35oC±2oC温箱或水浴中，每半小时观察一次，24 h 之内呈现凝块即为阳性。同时以已知血浆凝固酶阳性和阴性菌株肉汤培养物各0.5 ml作为阳性与阴性对照。
2) 结果报告
凡在琼脂平板上有可疑菌落生长，镜检为革兰氏阳性葡萄球菌，并能发酵甘露醇产酸，血浆凝固酶试验阳性者，可报告被检样品检出金黄色葡萄球菌。
(6) 溶血性链球菌检测方法
1) 操作步骤
取样液5mL加入到50ml葡萄糖肉汤，35oC±2oC培养24 h。将培养物划线接种血琼脂平板，35oC±2oC培养24 h观察菌落特征。溶血性链球菌在血平板上为灰白色，半透明或不透明，针尖状突起，表面光滑，边缘整齐，周围有无色透明溶血圈。挑取典型菌落作涂片革兰染色镜检，应为革兰阳性，呈链状排列的球菌。镜检符合上述情况，应进行下列试验：
链激酶试验：吸取草酸钾血浆0.2 ml（0.01g草酸钾加5mL兔血浆混匀，经离心沉淀，吸取上清液），加入0.8 ml灭菌生理盐水，混匀后再加入待检菌24 h肉汤培养物0.5 ml和0.25 % 氯化钙0.25 ml，混匀，放35oC±2oC水浴中，2 min观察一次（一般10 min内可凝固），待血浆凝固后继续观察并记录溶化时间。如2 h内不溶化，继续放置24 h观察，如凝块全部溶化为阳性，24 h仍不溶化为阴性。
杆菌肽敏感试验：将被检菌菌液涂于血平板上，用灭菌镊子取每片含0.04单位杆菌肽的纸片放在平板表面上，同时以已知阳性菌株作对照，在35oC±2oC下放置18h～24h，有抑菌带者为阳性。
2) 结果报告
镜检革兰氏阳性链状排列球菌，血平板上呈现溶血圈，链激酶和杆菌肽试验阳性，可报告被检样品检出溶血性链球菌。
(7) 真菌菌落总数检测方法
1) 操作步骤
待上述生理盐水样液自然沉降后取上清液作真菌计数。共接种5个平皿 ，每个平皿中加入1 ml样液，然后用冷却至45oC左 右的熔化的沙氏琼脂培养基15ml～25 ml倒入每个平皿内混合均匀，琼脂凝固后翻转平皿置25oC±2oC培养7d， 分别于3d、5d、7d观察，计算平板上的菌落数，如果发现菌落蔓延，以前一次的菌落计数为准。
2) 结果报告
菌落呈片状生长的平板不宜采用；计数符合要求的平板上的菌落，按下式计算结果：
X2 = B × K / 5
式中：
X1：细菌菌落总数，cfu/g 或 cfu/ml；
B：5块沙氏琼脂培养基平板上的真菌菌落总数；
K：稀释度。
当菌落数在100以内，按实有数报告，大于100时采用二位有效数字。
如果样品菌落总数超过本标准的规定，按下述方法进行复检和结果报告。
3) 复检方法
将留存的复检样品依前法复测2次，2次结果平均值都达到标准的规定，则判定被检样品合格；其中有任何1次结果平均值超过标准规定，则判定被检样品不合格。
(8) 真菌定性检测方法
1) 操作步骤
取样液5ml加入到50ml沙氏培养基中，25oC±2oC培养7d，逐日观察有无真菌生长。
2) 结果报告
培养管混浊应转种沙氏琼脂培养基，证实有真菌生长，可报告被检样品检出真菌。
2.1.11.7 产品杀菌性能、抑菌性能及其稳定性鉴定
(1) 样品采集
为使样品具有良好的代表性,应于同一批号三个运输包装中至少随机抽取20件最小销售包装样品，其中1/4留样，1/4做抑菌或杀菌性能测试，2/4做稳定性测试。
(2) 试验菌与菌液制备
试验菌：
细菌：金黄色葡萄球菌（ATCC 6538）,大肠杆菌（8099或ATCC 25922）
酵母菌：白色念珠菌(ATCC 10231)
菌液制备：取菌株第3代～14代的营养琼脂培养基斜面新鲜培养物(18h～24h), 用5 mL 0.03mol/L磷酸盐缓冲液 （以下简称PBS）洗下菌苔,使菌悬浮均匀后用上述PBS稀释至所需浓度.
(3) 杀菌性能测试方法
该试验取样部位，根据被试产品生产者的说明而确定。
1) 中和剂鉴定试验：
进行杀菌性能测试必须通过以下中和剂鉴定试验。
① 试验分组
第1组： 染菌样片 + 5 ml PBS
第2组： 染菌样片 + 5 ml中和剂
第3组：染菌对照片 + 5 ml中和剂
第4组：样片 + 5 ml中和剂 + 染菌对照片
第5组：染菌对照片 + 5 ml PBS
第6组：稀释液 + 中和剂 + 培养基 → 培养
作为试验材料阴性对照。
② 评价规定
第1组无试验菌,或仅有极少数试验菌菌落生长；第2组有较第1组为多, 但较第3、4、5组为少的试验菌落生长, 并符合要求；第3,4,5组有相似量试验菌生长, 并在1×104 cfu/片～9×104cfu/片之间, 其组间菌落数误差率应不超过15 % ；第6组无菌生长；连续3次试验取得合格评价。
2）杀菌试验
①操作步骤
将试验菌24h斜面培养物用 PBS洗下，制成菌悬液（要求的浓度为：用100μl滴于对照样片上，回收菌数为1×104 cfu/片）～9×104cfu/片）。
取被试样片（2.0cm×3.0cm）和对照样片（与试样同质材料，同等大小，但不含抗菌材料，且经灭菌处理）各4片，分成4组置于4个灭菌平皿内。
取上述菌悬液，分别在每个被试样片和对照样片上滴加100μl，均匀涂布，开始计时，作用2 min、5 min、10 min、20 min, 用无菌镊分别将样片投入含5 mL相应中和剂的试管内，充分混匀,作适当稀释，然后取其中2-3个稀释度，分别吸取0.5 ml，置于两个平皿，用凉至40oC～45oC的营养琼脂培养基（细菌）或沙氏琼脂培养基（酵母菌）15 ml作倾注，转动平皿，使其充分均匀，琼脂凝固后翻转平板，35oC±2oC培养48 h（细菌）或72 h（酵母菌），作活菌菌落计数。
试验重复3次, 按下式计算杀菌率:
X3 = (A-B) / A × 100%
式中：
X3 ：杀菌率，% ；
A：对照样品平均菌落数；
B：被试样品平均菌落数。
②评价标准
杀菌率≥90%，产品有杀菌作用。
（4）溶出性抗（抑）菌产品抑菌性能测试方法
1）操作步骤
将试验菌24h斜面培养物用 PBS洗下，制成菌悬液（要求的浓度为：用100μl滴于对照样片上或5ml样液内，回收菌数为1×104cfu/片～9×104cfu/片或ml）。
取被试样片（2.0cm×3.0cm）或样液（5 ml）和对照样片或样液（与试样同质材料，同等大小，但不含抗菌材料，且经灭菌处理）各4片（置于灭菌平皿内）或4管。
取上述菌悬液，分别在每个被试样片或样液和对照样片或样液上或内滴加100μl，均匀,涂布/混合，开始计时，作用2 min、5 min、10 min、20min,用无菌镊分别将样片或样液（0.5 ml）投入含5mL PBS的试管内，充分混匀,作适当稀释，然后取其中2-3个稀释度，分别吸取0.5 ml，置于两个平皿，用凉至40oC～45oC的营养琼脂培养基（细菌）或沙氏琼脂,培养基（酵母菌）15 ml作倾注，转动平皿，使其充分均匀，琼脂凝固后翻转平板，35oC±2oC培养48h（细菌）或72 h（酵母菌），作活菌菌落计数。
试验重复3次, 按下式计算抑菌率:
X4 = (A-B) / A × 100%
式中：
X4：抑菌率，% ；
A：对照样品平均菌落数；
B：被试样品平均菌落数。
2）评价标准
抑菌率≥50%～90%，产品有抑菌作用，抑菌率≥90%，产品有较强抑菌作用。
（5）非溶出性抗（抑）菌产品抑菌性能测试方法
1）操作步骤
称取被试样片（剪成1.0cm×1.0cm大小）0.75 g，放入一个250 ml的三角烧瓶中,分别加入70 ml PBS和5 ml 菌悬液, 使菌悬液在PBS中的浓度为1×104 cfu/ml～9×104cfu/ml。
将三角烧瓶固定于振荡摇床上,以300 r/min 振摇1 h。
取0.5 ml振摇后的样液,或用PBS做适当稀释后的样液, 以琼脂倾注法接种平皿, 进行菌落计数。
同时设对照样片组和不加样片组. 对照样片组的对照样片与被试样片同样大小但不含抗菌成分,其它操作程序均与被试样片组相同.不加样片组分别取5ml菌悬液和70 ml PBS加入一个250 ml三角烧瓶中,混匀,分别于0时间和振荡1h后, 各取0.5 ml菌悬液与PBS的混合液做适当稀释,然后进行菌落计数。
试验重复3次, 按下式计算抑菌率:
X5 = (A-B) / A × 100%
式中：
X5：抑菌率，% ；
A：被试样品振荡前平均菌落数；
B：被试样品振荡前平均菌落数。
2）评价标准
不加样片组的菌落数在1×104cfu/ml～9×104cfu/ml之间, 且样本振荡前后平均菌落数差值在10 %以内, 试验有效；被试样片组抑菌率与对照样片组抑菌率的差值 > 26 %,产品具有抗菌作用。
（6）稳定性测试方法
1）测试条件
①自然留样：将原包装样品置室温下至少1年，每半年进行抑菌或杀菌性能测试。
②加速试验：将原包装样品置54oC～56oC恒温箱内14天或37oC～40oC恒温箱内3个月，保持相对湿度 ≥75 %, 放置前后分别进行抑菌或杀菌性能测试。
2）评价标准
①产品经自然留样，其杀菌率或抑菌率达到规定的标准值，产品的杀菌或抑菌作用在室温下的保持时间即为自然留样时间。
②产品经54oC加速试验，其杀菌率或抑菌率达到规定的标准值，产品的杀菌或抑菌作用在室温下至少保持一年。
③产品经37oC加速试验，其杀菌率或抑菌率达到规定的标准值，产品的杀菌或抑菌作用在室温下至少保持二年。
2.1.11.8产品环氧乙烷残留量测试方法
（1）测试目的
确定产品消毒后启用时间，当新产品或原材料、消毒工艺改变可能影响产品理化性能时应予测试。
（2）样品采集
于环氧乙烷消毒后，立即从同一消毒批号的三个大包装中随机抽取一定量小包装样品，采样量至少应满足规定所需测定次数的量（留一定量在必要时进行复测用）。
分别于环氧乙烷消毒后24 h及以后每隔数天进行残留量测定，直至残留量降至规定的标准值以下。
（3）仪器与操作条件
仪器；气相色谱仪，氢焰检测器（FID）
柱： Chromosorb 101 HP60目～80目；玻璃柱长2 m，Φ3mm。柱温：120oC。
检测器：150oC
气化器：150oC
载气量：氮气：35 ml/min
氢气：35 ml/min
空气：350 ml/min
柱前压约为108 kPa。
（4）操作步骤
1）标准配制
用100 ml玻璃针筒从纯环氧乙烷小钢瓶中抽取环氧乙烷标准气（重复放空二次，以排除原有空气），塞上橡皮头，用10 ml针筒抽取上述100 ml针筒中纯环氧乙烷标准气10 ml，用氮气稀释到100 ml（可将10 ml标准气注入到已有90 ml氮气的带橡皮塞头的针筒中来完成）。用同样的方法根据需要再逐级稀释2次～3次（稀释1000倍～10000倍），作三个浓度的标准气体。按环氧乙烷小钢瓶中环氧乙烷的纯度、稀释倍数和室温计算出最后标准气中的环氧乙烷浓度。
计算公式如下：
44 × 106 273
C = ×
22.4 × 103 × k 273 + t
式中：
C：标准气体浓度，μg/ml；
K：稀释倍数；
T：室温，oC。
2）样品处理
至少取2个最小包装产品，将其剪碎，随机精确称取2g，放入萃取容器中，加入5 ml去离子水，充分摇匀，放置4h或振荡30 min待用。如被检样品为吸水树脂材料产品，可适当增加去离子水量，以确保至少可吸出2 ml样液。
3）分析
待仪器稳定后，在同样条件下，环氧乙烷标准气体各进样1.0 ml，待分析样品（水溶液）各进样2μl，每一样液平行作2次测定。
根据保留时间定性，根据峰面积（或峰高）进行定量计算，取平均值。
4）计算
以所进环氧乙烷标准气的微克(μg)数对所得峰面积(或峰高)作环氧乙烷工作曲线。
以样品中环氧乙烷对应的峰面积（或峰高）在工作曲线上求得环氧乙烷的量A（μg），并按下式求得产品中环氧乙烷的残留量。
A
X =
m
× V（进）
V（萃）
式中：X—产品中环氧乙烷残留量，μg/g；
A：从工作曲线中所查得之环氧乙烷量，μg；
M：所取样品量，g；
V（萃）：萃取液体积，ml；
V（进）：进样量，ml。
2.1.11.9生产环境采样与测试方法
（1） 空气采样与测试方法
1）样品采集
在动态下进行。
室内面积不超过30m2，在对角线上设里、中、外三点，里、外点位置距墙1m；室内面积超过30m2，设东、西、南、北、中5点，周围4点距墙1m。
采样时，将含营养琼脂培养基的平板（直径9 cm）置采样点（约桌面高度），打开平皿盖，使平板在空气中暴露5 min。
2）细菌培养
在采样前将准备好的营养琼脂培养基置35oC±2oC培养24 h，取出检查有无污染，将污染培养基剔除。
将已采集的培养基在6 h内送实验室，于35oC±2oC 培养48 h观察结果，计数平板上细菌菌落数。
3）菌落计算
&n,bsp; &nbs,p; A × 50000
Y1 =
S1 × t
式中：
Y1：空气中细菌菌落总数，cfu/m3 ；
A：平板上平均细菌菌落数 ；
S1：平板面积, cm2 ；
T：暴露时间，min 。
（2） 工作台表面与工人手表面采样与测试方法
1）样品采集
工作台：将经灭菌的内径为5 cm×5 cm的灭菌规格板放在被检物体表面，用一浸有灭菌生理盐水的棉签在其内涂抹10次，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含10 ml灭菌生理盐水的采样管内送检。
工人手：被检人五指并拢，用一浸湿生理盐水的棉签在右手指曲面，从指尖到指端来回涂擦10次，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含10mL灭菌生理盐水的采样管内送检。
2）细菌菌落总数检测
将已采集的样品在6 h内送实验室，每支采样管充分混匀后取1 mL样液，放入灭菌平皿内，倾注营养琼脂培养基，每个样品平行接种两块平皿，置35oC±2oC培养48 h，计数平板上菌落数。
A
Y2 = × 10
S2
Y3 = A × 10
式中：
Y2 ：工作台表面细菌菌落总数，cfu/ cm2 ；
A：平板上平均细菌菌落数；
S2：采样面积，cm2 ；
Y3：工人手表面细菌菌落总数，cfu/只手。
2.1.11.10消毒效果生物监测评价方法
（1）环氧乙烷消毒
1）环氧乙烷消毒效果评价用生物指示菌为枯草杆菌黑色变种芽胞（ATCC 9372）。在菌量为5×105 cfu/片～5×106cfu/片、环氧乙烷浓度为600 mg/L±30mg/L、作用温度为54oC±2oC、相对湿度为60 % ± 10 % 条件下，其杀灭90 % 微生物所需时间D值应为2.5 min～5.8 min，存活时间≥7.5 min，杀灭时间≤58 min。
2）每次测试至少布放10片生物指示剂，放于最难杀灭处。消毒完毕，取出指示菌片接种营养肉汤培养液作定性检测或接种营养琼脂培养基作定量检测，将未处理阳性对照菌片作相同接种，两者均置35oC±2oC培养。阳性对照应在24 h内有菌生长。定性培养样品如连续观察7d全部无菌生长，可报告生物指示剂培养阴性，消毒合格。定量培养样品与阳性对照相比灭活指数达到103也可报告消毒合格。
（2）电离辐射消毒
1）电离辐射消毒效果评价用生物指示菌为短小杆菌芽胞E 601（ATCC 27142），在菌量为5×105-5×106cfu/片时，其杀灭90 % 微生物所需剂量D10值应为1.7 kGy。
2）每次测试至少选5箱，每箱产品布放3片生物指示剂，置最小剂量处。消毒完毕，取出指示菌片接种营养肉汤培养液作定性检测或接种营养琼脂培养基作定量检测，将未处理阳性对照菌片作相同接种，两者均置35oC±2oC培养。阳性对照应在24h内有菌生长。定性培养样品如连续观察7d全部无菌生长，可报告生物指示剂培养阴性，消毒合格。定量培养样品与阳性对照相比灭活指数达到103也可报告消毒合格。
（3）压力蒸汽消毒
参照GB 15981-1995《消毒与灭菌效果的评价方法与标准》第一篇：压力蒸汽灭菌效果评价方法与标准中的规定执行。
2.3 消毒剂毒理学实验技术
2.3.1急性经口毒性试验
2.3.1.1 目的
(1)检测消毒剂对试验动物的急性毒性作用和强度。
(2)为蓄积毒性和亚慢性毒性等试验提供剂量选择的依据。
2.3.1.2 试验动物
小鼠或大鼠任选一种，雌雄各半。小鼠体重18g～22g，大鼠体重180g～220g，根据不同的计算LD50方法，选用适当的动物数量。
2.3.1.3 试验分组
如应用概率单位-对数图解法计算LD50，随机分为5个～6个剂量组。通常最高剂量组的动物死亡率应≥90%，最低剂量组动物死亡率应≤10%。可先以较大的组距较少量动物进行预试，找出其粗略致死剂量范围，然后再设计正式试验的剂量分组。
2.3.1.4 操作程序
(1)动物的准备：试验前，一般禁食过夜，不限制饮水。
(2)受试物溶液的配制：常以水或食用植物油为溶剂。灌胃给予受试动物的最大容量，对小鼠不超过0.4ml/20g体重，大鼠不超过1.0ml/100g体重。
(3)染毒方法：用灌胃针头将受试物溶液一次给予动物。若受试物毒性很低，一次灌胃容量太大，可在24h内分成2次～3次给予，其总剂量作为一日剂量计算。
(4)染毒后观察动物中毒的表现和死亡数及死亡时间。试验观察 14d。
2.3.1.5 LD50 的计算方法
根据给受试物后14d内的各剂量组动物死亡率计算LD50 (半数致死量)。
2.3.1.5.1概率单位-对数图解法：
(1)根据各剂量组动物死亡率，从表2-10 中查各组的概率单位。因死亡率为 0% 和 100%的概率单位，与所试动物数有关，故需另在表2-11中查找。
例如：对死亡率为45%的概率单位，可查表2-10 。先在表的左侧横标目上找到 40，而后在表的上行纵标目处找到5，两者交叉点处的4.87，即为45% 的概率单位。
又如:某组用 10 只试验动物，如果全部存活(死亡率为0%)，查表2-11，其概率单位为 3.04。
表2-10 百分率-概率单位换算表
% 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
0 .. 2.67 2.95 3.12 3.25 3.36 3.45 3.52 3.59 3.66
10 3.72 3.77 3.82 3.87 3.92 3.96 4.01 4.05 4.08 4.12
20 4.16 4.19 4.23 4.26 4.29 4.33 4.36 4.39 4.42 4.45
30 4.48 4.50 4.53 4.56 4.59 4.61 4.64 4.67 4.69 4.72
40 4.75 4.77 4.80 4.82 4.85 4.87 4.90 4.92 4.95 4.97
50 5.00 5.03 5.05 5.08 5.10 5.13 5.15 5.18 5.20 5.23
60 5.25 2.28 5.31 5.33 5.36 5.39 5.41 5.44 5.47 5.50
70 5.52 5.55 5.58 5.61 5.64 5.67 5.71 5.74 5.77 5.81
80 5.84 5.88 5.92 5.95 5.99 6.04 6.08 6.13 6.18 6.23
90 6.28 6.34 6.41 6.48 6.55 6.64 6.75 6.88 7.05 7.33
注: 横标目数字为死亡率的十位数， 纵标目数字为死亡率的个位数。
表2-11 相应于反应率为 0％及100％的概率单位
该组动物数 反应率 该组动物数 反应率
0% 100% 0% 100%
... ... ... 11 3.00 7.00
2 3.85 6.15 12 2.97 7.03
3 3.62 6.38 13 2.93 7.07
4 3.47 6.53 14 2.90 7.10
5 3.36 6.64 15 2.87 7.13
6 3.27 6.73 16 2.85 7.15
7 3.20 6.80 17 2.82 7.18
8 3.13 6.87 18 2.80 7.20
9 3.09 6.91 19 2.78 7.22
10 3.04 6.96 20 2.76 7.24
(2) 用方格纸绘散点图，横轴表示剂量的对数值(X)，纵轴为概率单位值(Y)，将各组数值点在图上。
(3) 按各点的分布趋势，用直尺绘出一条最适合于各点的直线，使线上方的点到线的总距离与线下方的点到线的总距离相近，此线应尽量靠近概率单位为 5 的点及附近的点。
(4) 查出求概率单位5处的浓度对数，其反对数即为 LD50 。
(5)按下列公式计算 LD50 的 95% 可信限。
S =(X2 － X1)/(Y2 － Y1)
Sm =S/(N'/2)-1/2
LD50对数值的95%可信限 = log LD50 ± 1.96Sm
(上式结果，经反对数变换后，可得LD50 的95%可信限)
[Sm 为 LD50的标准误；S为标准差；X1、X2 分别为机率单位等于4(Y1)和6(Y2)时相应的浓度对数值；N'为Y1(=4)及Y2(=6)相应的死亡率间所用的动物数。]
2.3.1.5.2一次最大限度试验：
如20只动物(雌雄各半)一次灌胃剂量大于5000mg/kg体重，在14d内又无死亡，可判定LD50大于5000mg/kg体重。
2.3.1.5.3其他方法：如霍恩(Horn)法、寇氏(Karber)法等。]
2.3.1.6 评价规定
消毒剂的毒性评价：
LD50大于5000mg/kg体重者属实际无毒；
LD50为501mg/k～5000mg/kg体重者属低毒；
LD50为51mg/k～500mg/kg体重者属中等毒性；
LD50为1mg/k～50mg/kg体重者属高毒；
LD50小于1mg/kg体重者属剧毒。
注：为评价消毒剂在实际应用时对人体的安全性，当LD50≤5000mg/kg体重时，需增做消毒剂最高应用液浓度5倍的急性经口毒性试验，并计算其LD50。
2.3.2 急性吸入毒性试验
2.3.2.1 目的
检测消毒剂对试验动物的急性吸入毒性作用和强度。
2.3.2.2 试验动物
小鼠或大鼠任选一种，雌雄各半。小鼠体重为18g～22g，大鼠体重为180g～200g。
2.3.2.3 操作程序
染毒可采用静式染毒法或动式染毒法。
2.3.2.3.1 静式染毒法
静式染毒是将实验动物放在一定体积的密闭容器（染毒柜）内，加入一定量的毒物，并使其挥发，造成实验需要浓度的含消毒剂空气，一次性吸入染毒2h。
(1)染毒柜的容积以每只染毒小鼠每小时不少于3L空气计，每只大鼠不少于30L计。
(2)染毒浓度的计算：染毒浓度一般应采用实际测定浓度。在染毒期间一般可测4次～5次，求其平均浓度。在无适当测试方法时。可用下式计算染毒浓度
a×d
C= × 106
V
式中：
C：染毒浓度（mg/m3）
A：加入消毒剂量(ml)
D：消毒剂比重
V：染毒柜容积（L）
2.3.2.3.2 动式染毒法
动式染毒是采用机械通风装置，连续不断地将含有一定浓度消毒剂的空气均匀不断地送入染毒柜，并排出等量的染毒气体，维持相对稳定的染毒浓度。一次性吸入染毒2h。
（1）消毒剂气化（雾化）和输入的常用方法：
1） 气体，经流量计与空气混合成一定浓度后，直接输入染毒柜。
2） 易挥发的液体，通过空气鼓泡或适当加热促使挥发后输入染毒柜。
3） 若消毒剂现场使用采取喷雾法时，可采用喷雾器或超声雾化器使其雾化后输入染毒柜。
（2）染毒浓度计算：染毒浓度一般应采用动物呼吸带实际测定浓度，每30min一次，取其平均值。若无适当的测试方法，也可采用以下公式计算染毒浓度：
a×d
C= × 106
V1+ V2
式中：
C：染毒浓度（mg/m3）
a：气化或雾化消毒剂量(ml)
d：消毒剂比重
V1：输入染毒柜风量(L)
V2：染毒柜容积（L）
2.3.2.3.3 观察和记录染毒和观察期内的动物症状和死亡情况。关于染毒浓度的设计、动物分组、观察期限、观察指标和LC50的计算等可参照急性经口毒性试验(2.3.1)。
在预试验的基础上，如20只动物（雌雄各半）一次2h吸入染毒浓度>10000mg/m3,在14d内无死亡，可判定LC50大于10000mg/m3。
2.3.2.4评价规定
消毒剂的毒性评价：
LC50 2h大于10000mg/m3 者属实际无毒；
LC50 2h为1001 mg/m3～10000mg/m3 者属低毒；
LC50 2h为101 mg/m3～1000mg/m3 者属中等毒性；
LC50 2h为10 mg/m3～100mg/m3 者属高毒；
LC50 2h小于10mg/m3 者属剧毒。
2.3.3 皮肤刺激试验
2.3.3.1 目的
检测消毒剂对试验动物皮肤的刺激/腐蚀作用和强度。
2.3.3.2 试验动物
每次试验至少需 4 只皮肤完好的健康家兔或豚鼠。
2.3.3.3 操作程序
2.3.3.3.1一次皮肤刺激试验
(1)在试验前24h，将家兔或豚鼠背部脊柱两侧的毛剪掉，不得损伤表皮。去毛范围，左、右各约3cm×3cm。
(2)次日将受试物(浓度为皮肤消毒应用液的5倍或原液)0.5ml滴于2.5cm×2.5cm 大小的2层~4 层纱布上并敷贴在一侧去毛皮肤表面，然后用一层无刺激塑料膜或油纸覆盖，再用无刺激胶布固定。另一侧去毛皮肤作为空白对照(或溶剂对照)。敷贴时间为 4h。试验结束后，用温水或无刺激性溶剂除去残留受试物。
(3)分别于去除受试物后1h、24h和48h，分别观察皮肤局部反应，并按表2-10进行刺激反应评分。
2.3.3.3.2多次皮肤刺激试验
(1)同一次皮肤刺激试验操作步骤2.3.3.3.1 (1)。
(2)次日将受试物（浓度为皮肤消毒应用液的5倍或原液）0.2ml涂在一侧皮肤上，另一侧涂溶剂作为对照，每天涂抹一次，连续涂抹14d。每次涂抹前，按表2～12评分。对照区和试验区同样处理。
2.3.3.4 评价规定
2.3.3.4.1一次皮肤刺激试验
按照表2-12，分别将各时间的动物皮肤红斑与水肿形成情况的评分相加，除以动物数，得各时间的皮肤刺激反应积分值(刺激指数)。取其中最高皮肤刺激指数，按表2-13 评定该受试物对动物皮肤刺激强度的分级。
2.3.3.4.2多次皮肤刺激试验
按下列公式计算每天每只动物平均积分，以表2-12判定皮肤刺激强度。
∑（红斑和水肿总积分）
每天每只动物平均积分= / 14
受试动物数
表2-12 皮肤刺激反应的评分标准
皮肤刺激反应 皮肤刺激反应评分
红斑形成：
无 0
勉强可见 1
明显 2
严重 3
紫红色红斑，并有焦痂 4
水肿形成:
无 0
勉强可见 1
皮肤隆起，轮廓清楚 2
水肿隆起约1mm 3
水肿隆起超过1mm 4
表2-13 皮肤刺激强度分级
皮肤刺激指数 刺激强度级别
＜0.5 无刺激性
0.5～＜2.0 轻刺激性
2.0～＜6.0 中等刺激性
≥6.0 强刺激性
2.3.4 急性眼刺激试验
2.3.4.1 目的
检测消毒剂对试验动物眼睛的急性刺激和腐蚀作用。
2.3.4.2 试验动物
使用3只家兔。试验前检查家兔双眼，有异常者不得用于试验。
2.3.4.3 操作程序
(1)将黏膜消毒应用液5 倍浓度的溶液或原液作为受试物。吸取受试物0.1ml，滴入家兔一侧眼结膜囊内，另一侧眼以生理盐水作为正常对照。
(2)滴受试物后使眼被动闭合1s，30s后用生理盐水冲洗。于滴眼后24h、48h、72h、7d、14d和21d，肉眼观察家兔眼结膜、虹膜和角膜的损伤与恢复情况。如果第7d或第14d，眼睛刺激反应评分降至0，即可终止试验。必要时,用2% 荧光素钠溶液或裂隙灯检查角膜及虹膜变化。
2.3.4.4 评价规定
按表2-14对家兔眼角膜、虹膜和结膜的急性刺激反应进行评分，并分别计算每只动物在三个不同观察时段（24h、48h和72h）角膜、虹膜和结膜充血、水肿四方面的平均评分（即24h、48h和72h评分之和除以时段数3）。分别以动物眼角膜、虹膜和结膜充血、水肿的平均评分和恢复时间进行综合评价，按表2-15，表2-16眼刺激反应分级标准判定受试物对眼睛的刺激强度。
表2-14 家兔急性眼刺激反应的评分标准
眼损害表现 评 分
角膜：混浊(以最致密部位为准):
无溃疡形成或混浊 0
散在或弥漫性混浊，虹膜清晰可见 1
&,nbsp; 半透明区易分辨，虹膜模糊不清 2
出现灰白色半透明区，虹膜细节不清，瞳孔大小勉强可见 3
角膜不混浊，虹膜无法辨认 &nbs