医学检验信息网 检验医学 2007-1-19 16:41:31

邓小军，谢志雄，张阳根 2006-5-18 13:21:48 《实用医技杂志》 2006年2月 第5卷 第4期 关键词：流式细胞术

［关键词］ 流式细胞术；强直性脊柱炎；HLAB27

［摘  要］ 目的：探讨HLAB27抗原检测在临床诊断强直性脊柱炎（AS）的意义。方法：应用流式细胞仪对189例门诊以及住院疑似AS患者进行检测。采用1984年的纽约修订的AS诊断标准对研究对象进行诊断。结果：受检189例中，HLAB27阳性检出率为43.3%(82/189)。按照纽约标准诊断为AS的84例患者中，HLAB27阳性率为91.7%（77/84）。HLAB27检测对诊断AS的敏感度为91.7%（77/84），特异度为95.2%（100/105），诊断正确率为93.7%［（100+77)/189］。结论：HLAB27和AS有很强的相关性，而用流式细胞术进行检测是较好的方法。

The Significance of HLAB27 Testing in Clinical Diagnosis of Ankylosing Spondysis

DENG Xiaojun，XIE Zhixiong，ZHANG Yanggen

(The 175th Hospital of PLA， Zhangzhou,Fujian 363000，China)

Abstract:Objective To discuss the significance of HLAB27 testing in clinical diagnosis of ankylosing spondysis (AS).Methods Detect the HLAB27 antigen of 189 patients with flow Cytometer (FCM) ，and the judge of AS rely to the standard edited in New York,1984.Results The HLAB27 positive rate of all patients is 43.3%(82/189) ，and in those AS patients (rely to the standard), the HLAB27 positive rate is 91.7%（77/84） ，the sensitive of HLAB27 antigen in diagnosis of AS is 91.7%（77/84），and the specificity is 95.2%（100/105）， the accuracy is 93.7%（100+77/189）.Conclusion The HLAB27 is highly related to the AS,and the flow cytometry is a good method of HLAB27 testing.

Key words:Flow cytometry；Ankylosing sondysis (AS)；HLAB27

    HLA抗原是人类主要组织相容性复合体（Major Histocompatibity Complex， MHC）的表达产物，在免疫系统中主要负责细胞之间的相互识别和诱导免疫反应，调节免疫应答的功能。HLAB27基因属于Ⅰ型MHC基因。人们很早就发现HLAB27抗原的表达与强直性脊柱炎（Ankylosing Pondysis, AS）有着高度相关性，而AS由于其症状与许多疾病相似而难以确诊，因此HLAB27的检测在病情的诊断中有着重要意义。本文对流式细胞仪检测HLAB27抗原进行分析，探讨其应用价值，现报告如下。

1  材料与方法

1.1  调查对象 

189例患者来自于2005年2月到2005年9月骨科门诊以及住院病例，其中男136例，女53例，平均年龄28.9岁，20岁以下42例，20岁~30岁102例，30岁~40岁36例，40岁以上9例。其中有84例经过诊断确定为AS患者（采用1984年的纽约修订的AS诊断标准对研究对象进行诊断）。

1.2  仪器与试剂 

仪器采用美国BD公司生产FACSCalibur流式细胞仪，HLAB27荧光抗体F1(FITC)、CD3荧光抗体F2(PE)、校准微球和溶血素均来自BD公司标准试剂盒。

1.3  方法 

操作按试剂盒要求,将30 μl荧光抗体(含抗B27和抗CD3)加入到FCM专用试管底部,再加入抗凝血50 μl,混匀后室温避光15 min,然后加溶血素2 ml,混匀后室温避光10 min,1 500 r/min离心5 min,弃上清加PBS液2 ml,混匀1 500 r/min离心5 min,弃上清加PBS液500 μl,混匀后待测（每次检测之前均使用校准微球通过FASComp软件对仪器进行校准）。

1.4  采用FCM自带的数据获取与分析软件获取数据并进行分析 

如图1所示，先通过对淋巴细胞的获取然后对CD3+T淋巴细胞设门，再通过软件计算FSCFL2门内细胞抗HLAB27 FL1信号的平均荧光强度,并与界值相比较,如果大于(或等于)仪器设定的界值(界值由BD 公司提供),报告为HLAB27阳性,否则为阴性。

2  结果

通过计算分析得到的平均荧光强度（Median值）与临界值比较，≥142为阳性，小于则为阴性。结果如表1所示。表1  不同年龄段阳性率比较年龄段（略）     
表1结果可以看出，阳性率在30岁以下年龄段检出较高，这与本身AS的好发人群主要在青少年有关。从男女就诊比例以及阳性率上看（见表2），男性显著要高于女性。而在表3可以得出HLAB27抗原检测在诊断AS上，正确率为93.7%［（100+77)/189］，灵敏度为91.7%（77/84），特异性为95.2%（100/105）。

3  讨论

3.1  AS与HLA

B27的相关性［1］  AS与HLAB27强相关,是迄今获得的HLA与疾病关联最典型并有临床意义的疾病。关于两者之间的相关机制，目前尚没有明确解释，主要存在以下几种假说。

3.1.1  连锁不平衡学说 

认为HLA和疾病相关可能是由于HLA某基因座位的等位基因和真正的疾病易感基因处于紧密连锁不平衡,而HLA基因本身并不是引起疾病的真正基因即直接原因,仅仅是遗传标志,但大量的遗传调查未能发现这种B27以外致病基因的存在。

3.1.2  免疫应答基因学说 

认为人的Ir基因包含在HLAⅡ类基因群中,特定的Ⅱ类基因型别可能导致特定的异常免疫应答,从而表现为易感某种疾病。

3.1.3  受体学说 

认为HLA抗原可能是微生物或其他病原物质的一个受体,两者结合而导致组织损伤。有关免疫应答基因及受体学说尽管有一些研究报道,但目前尚缺乏足够令人信服的实验证据来支持这2种假说。分子模拟学说认为HLA抗原本身和某种病的病因物质之间,在分子结构上类似,即存在分子模拟或交叉反应性,由此造成机体对这种病原物质不能发生有效的免疫应答,既不能识别也不能排除这个病原体,或者把HLA抗原自身当作病原物质而破坏产生免疫应答。但该学说无法解释AS病的组织特异性,因为HLAⅠ类抗原广泛存在于几乎所有组织,且转基因动物实验也证实B27是作为抗原提呈分子发挥病理作用而非病原模拟肽的提供者。

3.1.4  其他 

目前大量的转基因动物及体外B27相关肽研究均倾向于关节源性肽假说。该假说认为关节源性致命肽只存在于关节组织中,特异性地由HLAB27提呈,但在正常情况下,其递呈水平太低,致使细胞毒性T淋巴细胞(CTL)在胸腺发育过程中经历阳性和阴性选择后,既不能诱导克隆删除,也不能激发免疫应答,当带有某些具有结构同源性的蛋白的病毒或细菌感染时,则可致敏耐受的T细胞,从而识别以低水平递呈的关节源性致命肽,引起自身免疫反应而损伤组织,组织损伤所释放的自身抗原又可进一步扩大这种自身免疫,已有报道许多革兰阴性菌、病毒、衣原体等感染可引起反应性关节炎,而这些细菌都是可以刺激CTL细胞应答的。

除上述4种比较有代表性的假说外,还有其他假说。总之,AS的发病机制仍不甚明确,HLAB27的确切诊断价值也有待AS发病机制的突破。

3.2  HLAB27对AS的诊断价值 

HLAB27抗原是一种免疫遗传标记抗原，为显性遗传。有研究发现HLAB27阳性者患AS的概率是阴性患者的200倍～300倍［1］。AS主要累及脊柱、骶髂关节和周围大关节，其致残率较高。从发病到明确诊断往往需经过4 a~10 a。临床上主要依靠X线片进行诊断，而早期骶髂关节炎症较轻时判断较为困难。随着对HLAB27与AS相关性研究的不断深入研究［2，3］显示，在AS的早期诊断中，检测HLAB27有着重要的价值。

关于AS患者HLAB27抗原检测的灵敏度和特异性,国内较多同行进行了报道，陈志坚等［4］报道CDMD法、PCRSSP法、流式细胞法的灵敏度分别为83.7%、95.3%、93.0%，MartinezBorra等［5］报道灵敏度和特异性为90.9%和93.4%。黄翠珍等［6］报道为88.4%，93.4%，与本文报道差异无显著性。

综上所述，采用流式细胞仪对HLAB27进行检测，对于AS的诊断有很好的特异性、灵敏度和准确性，并且操作简便，是很好的一种检测方法。

参考文献：

［1］李维,吴强.HLAB27亚型及其强直性脊柱炎关系的研究进展［J］.免疫学杂志,2002,18(3):191194.

［2］Lopez de Castro JA.The pathogenetic code of HLAB27 in chronic arthritis［J］.Curr opin Immunol,1998,10(1):5966.

［3］袁玉华,王学谦.B27在强直性脊柱炎发病中的作用研究进展［J］.中华风湿病学杂志,2002,6(2):113115.

［4］陈志坚,李山.强直性脊柱炎患者HLAB27的检测［J］.华中医学杂志,2004,28(1):1314.

［5］MartinezBorra J,Gonzalez S,LopezVazquez A,et al．HLAB27 alone rather than B27ralated class I hap lo types contributes to ankylosing spondylitis suscep tibility［J］.Hum Immunol,2000,61(2):131139.

［6］黄翠珍，蔡桂丰.HLAB27检测在强直性脊柱炎临床诊断中的意义［J］.实用医学杂志,2005,21(4):390391.

(解放军一七五医院，福建 漳州 363000)

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