肾上腺脑白质营养不良（adrenoleukodystrophy，ALD）是一种主要侵犯大脑白质、肾上腺等器官的X-连锁隐性代谢性遗传病。根据临床表现和发病时间，可将ALD分成儿童脑型、肾上腺脊髓神经病型等6个临床类型[1]。各型的共同特征是极长链饱和脂肪酸（very long chain fatty acids，VLCFA）在体内蓄积，引起大脑白质脱髓鞘、肾上腺功能不全等病理改变。其致病基因定位于染色体Xq28，称ABCD1基因。ALD的病程呈进行性发展，预后不良，尤以儿童大脑型为甚——患者发病后的平均生存时间仅为3年左右[2]。到目前为止，对ALD尚无效果确切的治疗手段[3]，也无法逆转已出现的中枢神经系统损害。因此，对ALD携带者所怀胎儿进行产前诊断，防止携带ABCD1突变的婴儿出生，对降低我国出生缺陷的发生，提高人口素质，有重要的意义[4]。本实验室于2003年和2004年分别对2个ALD家系实施了产前分子诊断，报告如下。
1 对象和方法
1.1
对象 李某，女，39岁，汉族，广东佛山市人。其第1个孩子为男孩，因患ALD（广东省佛山市第一人民医院诊断）于2002年死亡。2003年李某又一次怀孕，于妊娠21周时该孕妇到广东省妇幼保健院作产前检查，并抽脐带血查染色体，显示胎儿为正常男性核型，致畸5项、G-6-PD等均未见异常。经该院介绍，李某夫妇自愿抽血送本实验室进行基因检测，证实李某为
ABCD1基因突变（R
617G突变）携带者，推测其第1个孩子为ALD患者（图
1A）
[5]。在接受遗传咨询后，李某认识到其所怀胎儿有患病风险，要求本实验室对胎儿进行针对ALD的分子诊断。遂于妊娠28周时来我院妇产科抽羊水，并送本实验室检查。 王某，女，35岁，汉族，山东临沂市人。2002年本实验室曾对该家系所有成员进行
ABCD1基因突变分析，证实王某为P534R突变携带者，其儿为P534R突变基因型
[5]。2004年王某又一次怀孕，在认识到其所怀胎儿有患病风险后，于妊娠14周时来我院妇产科抽羊水，并送本实验室检查。
1.2
羊水的采集、培养及胎儿基因组DNA的提取 孕妇排空膀胱，取仰卧位，在B超指引下，由妇产科医师按常规用一次性注射器抽取羊水。前2ml弃去，共取40ml，置无菌容器中，立即送实验室。将羊水以300×ɡ离心10min，去上清，取一部分沉淀按常规提取羊水细胞（AFC）基因组DNA，备用。 将另一部分沉淀，加入适量AmininMAX（GIBCO公司）培养基，置
37℃、5%CO
2湿润环境培养7-10天。培养结束后，按上述方法提取AFC基因组DNA，备用。
1.3
母体基因组DNA污染的排除 取已提取纯化的AFC基因组DNA、胎儿父母的外周血基因组DNA，应用Identifiler试剂盒（ABI公司）进行PCR，在总反应体积25 μl中含：基因组DNA 0.5 ng、Identifiler引物5.5 μl、Gold
Taq DNA聚合酶2.5 U。反应条件：
95℃ 11 min；
94℃ 1 min，
59℃ 1 min，
72℃ 1 min，28个循环；
60℃ 60 min。PCR结束后，加入甲酰胺，于
95℃变性5 min，立即上样，在3100 Avant分析仪上检测，并用Genescan Analysis片段分析和Genotype基因分型软件鉴定样品的STR位点，以排除母体DNA的污染。
1.4
