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Microcon-PCR是PCR产物纯化的离心超滤管

Microcon-PCR操作步骤

1，将一个样品管放入eppendorf管内；

2，将400微升Milli-Q水或TE缓冲液加入样品管，再加入100微升PCR反应混合液；

3，1000g离心15分钟；

4，将样品管从eppendorf管内取出，加入20微升Milli-Q水或TE缓冲液；

5，回收纯化DNA，将样品管倒转放入另外一个eppendorf管中，1000g离心2分钟，回收产物即在eppendorf管底部。

PCR产物直接用于测序或克隆的革新纯化方法

PCR是一种扩增DNA的有力工具。为了保证成功地扩增，应该尽量去除可

能对扩增产生抑制的各种物质，如：血红素，肝素或EDTA。血源性DNA

可以用透析的方法去除这些物质。Microcon或Centricon超滤离心管可以

用于从小体积血样中分离DNA。

PCR之后，如果PCR产物用于测序或克隆，一般必须对PCR产物进行纯化处理，去除引物，dNTPs和盐。Microcon-30或Centricon-30超滤离心管可以用来去除引物，同时对PCR产物进行浓缩和脱盐，可以去除90%的引物和dNTPs.

操作步骤

Microcon-30

将一个样品管放入eppendorf内；

去除PCR反应管中的轻矿物油(PCR反应结束之后，将反应管放入－20度中，待液相冻结之后，可以轻易地去除油层)；

将400微升蒸馏水或TE缓冲液加入样品管，再加入100微升反应混合液；

14000g离心10分钟；

再重复3-4次；

回收纯化DNA，将样品管倒转放入另外一个eppendorf管中，500g离心2分钟，回收产物即在eppendorf管的底部。

Centricon-30

将样品管放入过滤杯中，在样品管中加入2毫升蒸馏水或TE缓冲液；

去除PCR反应管中的轻矿物油(同 Microcon-30);

加100微升反应混合液到样品管中；

5000g离心20分钟；

加2毫升蒸馏水或TE缓冲液到样品管中，并重复4-5次；

将接收管戴到样品管的上面，倒转500g离心2分钟，回收产物即在接收管的底部。