生化分析仪参数选择-波长

  生化分析仪是基于分光光度法的自动化仪器,因此生化分析仪的参数选择就是分光光度法的参数选择。由于目前试剂的商品化相当普及,方法学的建立已经不在是临床检验科或临床实验的事了。波长的选择方法?早忘记了:-)。当前的生化分析仪不论高档还是低级,其单色器总是不能得到连续光谱,对于试剂标称波长没法选择时怎么办?就近原则正确吗?

  当然最聪明的办法就是用两个相近的波长来实验,选最好的。结果会发现就近原则不一定正确。这是为什么呢?让我们从方法学的波长选择开始复习。

  我们知道,分子、原子都有其价电子围绕旋转,当价电子从高能级跃迁至低能级会释放光子,而从低能级跃迁至高能级必需吸收光子,只有当光子的能量和跃迁相等的时候才发生吸收,因此,当有入射光通过时原子对光的吸收是较特异的,分子的能级较为复杂其有跃迁能级,振动能级,和转动能级,因此分子在不同的谱带有不同的吸收峰,但其能级也与分子结构密切相关也具备特异性,因此对不同波长的光,物质有特异性的吸收,并且吸收与浓度和光径成正比,这是分光光度法测定的理论基础。

因此,入射光的选择很重要。怎样选择入射波长,这不仅与待测物的吸收光谱有关,还须受体系干扰物的制约。作波长扫描图(如右图)所示:a为待测物质,b为体系干扰物,当然λ3处a吸收峰最高,λ1次之,但因在λ1处b物质吸收能峰远高于λ3处因此测定波长要选λ1。

  但假设在λ3处干扰物吸收峰低,而用λ3作测定时就会发现由于其峰是非对称峰,因此就近原则在此处会发生偏差。不过因为在此情况下干扰物吸收峰发生突跃的概率很小,所以在实际工作中并不明显。