荧光染色分类技术
应用此原理进行血液分析的是Sysmex SF-3000,雅培CD-3500、CD-4000仪器。Sysmex SF-3000 白细胞分类是通过两个通道来完成的:一个通道是血液标本,加入预温至35℃的分类试剂Ⅰ(荧光染色)和分类试剂Ⅱ(分类溶血剂),经过稀释、溶血后使用流式细胞法送到检测部。用激光散射法检测,低角度散射光得到细胞大小的信号,高角度散射光得到细胞内部的情报,把这些信号作为参数反映在散点图上就分出了淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜中性粒细胞(含嗜碱性粒细胞)四类;另一个通道是血液标本,加入预温至35℃的BA溶血剂,BA溶血剂的主要为非离子表面活性剂、强酸性。在这个酸性溶血剂中,嗜碱性粒细胞以外的白细胞发生显著的收缩,嗜碱性粒细胞作为大细胞而存在。在激光的照射下,不同角度的散射光信息反映在散点图上,即可得到白细胞总数和嗜硷性粒细胞数。
雅培公司的CD-3500、CD-4000分类原理是一定体积的血标本用鞘流液按比例稀释,其白细胞内部结构近似于自然状态。在水动力系统的作用下,标本被集中为一个直径30μm小股液流,该液流将细胞单个排列,单个通过激光束,在各个方向都有其散射光。从四个角度测定散射光的密度。这四个角度分别是① 0角度:前角光散射(1-3度),粗测细胞大小;② 10度:狭角光散射(7-10度),测细胞结构及其复杂性的相对指征;③ 90度:垂直光散射(70-110),主要对细胞内部颗粒和细胞分叶进行测定;④ 90度:偏振光散射(70-110度),基于颗粒可以将垂直角度的偏振光消偏振的特性,将嗜酸性细胞从中性粒细胞和其它细胞中分离出来。
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